Name: Isolamento de populações de células mieloides e epiteliais vivas do pulmão de camundongo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: Aprenda a isolar populações de células mieloides e epiteliais vivas do pulmão de camundongo. Este protocolo detalha estratégias de gating para identificar subconjuntos celulares específicos e estudar reparo pulmonar após infecção viral.

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<meta charset="utf8"></head><body>Isolamento de células imunes e não imunes de pulmões de camundongos para citometria de fluxo

<ol><li>Wanner, A., Salathé, M., O'Riordan, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucociliary+clearance+in+the+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Mucociliary clearance in the airways.</a> Am J Respir Crit Care Med. 154 (6), 1868-1902 (1996).</li>
<li>Mason, R. J., Williams, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+II+alveolar+cell.+Defender+of+the+alveolus%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Type II alveolar cell. Defender of the alveolus.</a> Am Rev Respir Dis. 115 (1), 81-91 (1977).</li>
<li>Fehrenbach, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+type+II+cell%3A+defender+of+the+alveolus+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Res%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial type II cell: defender of the alveolus revisited.</a> Respir Res. 2 (1), 33-46 (2001).</li>
<li>Basil, M. C., Alysandratos, K. -D., Kotton, D. N., Morrisey, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+repair+and+regeneration%3A+Advanced+models+and+insights+into+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Lung repair and regeneration: Advanced models and insights into human disease.</a> Cell Stem Cell. 31 (4), 439-454 (2024).</li>
<li>Hussell, T., Bell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+macrophages%3A+plasticity+in+a+tissue-specific+context%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Alveolar macrophages: plasticity in a tissue-specific context.</a> Nat Rev Immunol. 14 (2), 81-93 (2014).</li>
<li>Gschwend, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+macrophages+rely+on+GM-CSF+from+alveolar+epithelial+type+2+cells+before+and+after+birth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Alveolar macrophages rely on GM-CSF from alveolar epithelial type 2 cells before and after birth.</a> J Exp Med. 218 (1), e20210745(2021).</li>
<li>Gillich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+cell-type+specialization+in+the+alveolus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Capillary cell-type specialization in the alveolus.</a> Nature. 586 (7831), 785-789 (2020).</li>
<li>Schyns, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-classical+tissue+monocytes+and+two+functionally+distinct+populations+of+interstitial+macrophages+populate+the+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Non-classical tissue monocytes and two functionally distinct populations of interstitial macrophages populate the mouse lung.</a> Nat Commun. 10 (1), 3964(2019).</li>
<li>Chakarov, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+interstitial+macrophage+populations+coexist+across+tissues+in+specific+subtissular+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two distinct interstitial macrophage populations coexist across tissues in specific subtissular niches.</a> Science. 363 (6432), eaat3773(2019).</li>
<li>Tsukui, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-producing+lung+cell+atlas+identifies+multiple+subsets+with+distinct+localization+and+relevance+to+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Collagen-producing lung cell atlas identifies multiple subsets with distinct localization and relevance to fibrosis.</a> Nat Commun. 11 (1), 1920(1920).</li>
<li>Aegerter, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza-induced+monocyte-derived+alveolar+macrophages+confer+prolonged+antibacterial+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Influenza-induced monocyte-derived alveolar macrophages confer prolonged antibacterial protection.</a> Nat Immunol. 21 (2), 145-157 (2020).</li>
<li>Johansson, C., Kirsebom, F. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+in+respiratory+viral+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophils in respiratory viral infections.</a> Mucosal Immunol. 14 (4), 815-827 (2021).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte-derived+alveolar+macrophages+autonomously+determine+severe+outcome+of+respiratory+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Monocyte-derived alveolar macrophages autonomously determine severe outcome of respiratory viral infection.</a> Sci Immunol. 7 (71), eabj5761(2022).</li>
<li>Moll, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+transplantation+of+syngeneic+lung+adenocarcinoma+cells+to+study+PD-L1+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic transplantation of syngeneic lung adenocarcinoma cells to study PD-L1 expression.</a> J Vis Exp. (143), e58101(2019).</li>
<li>Warshamana, G. S., Corti, M., Brody, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF-%CE%B1%2C+PDGF%2C+TGF-%CE%B21+expression+by+primary+mouse+bronchiolar-alveolar+epithelial+and+mesenchymal+cells%3A+TNF-%CE%B1+induces+TGF-%CE%B21%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">TNF-α, PDGF, TGF-β1 expression by primary mouse bronchiolar-alveolar epithelial and mesenchymal cells: TNF-α induces TGF-β1.</a> Exp Mol Pathol. 71 (1), 13-33 (2001).</li>
<li>Corti, M., Brody, A. R., Harrison, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+primary+culture+of+murine+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and primary culture of murine alveolar type II cells.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 14 (3), 309-315 (1996).</li>
<li>Quantius, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+virus+infects+epithelial+stem%2Fprogenitor+cells+of+the+distal+lung%3A+Impact+on+Fgfr2b-driven+epithelial+repair%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Influenza virus infects epithelial stem/progenitor cells of the distal lung: Impact on Fgfr2b-driven epithelial repair.</a> PLoS Pathog. 12 (5), e1005544(2016).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardiac+perfusion+of+the+mouse+for+brain+tissue+dissection+and+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22BIO+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transcardiac perfusion of the mouse for brain tissue dissection and fixation.</a> BIO Protoc. 11 (8), e3988(2021).</li>
<li>Morton, J., Snider, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+collection+and+processing+of+lungs+from+aged+mice+for+histological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pathobiol+Aging+Age+Relat+Dis%22%5BJournal%5D)">Guidelines for collection and processing of lungs from aged mice for histological studies.</a> Pathobiol Aging Age Relat Dis. 7 (1), 1313676(2017).</li>
<li>Bijgaart, R. J. E., van den Kong, N., Maynard, C., Plaks, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+live+imaging+of+lung+metastasis+and+their+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ex vivo live imaging of lung metastasis and their microenvironment.</a> J Vis Exp. (108), e53741(2016).</li>
<li>Shi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+purification+of+immune+cells+from+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Isolation and purification of immune cells from the liver.</a> Int Immunopharmacol. 85, 106632(2020).</li>
<li>Short, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+virus+damages+the+alveolar+barrier+by+disrupting+epithelial+cell+tight+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Influenza virus damages the alveolar barrier by disrupting epithelial cell tight junctions.</a> Eur Respir J. 47 (3), 954-966 (2016).</li>
<li>Laidlaw, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+cell+help+guides+formation+of+CD103%2B+lung-resident+memory+CD8%2B+T+cells+during+influenza+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">CD4+ T cell help guides formation of CD103+ lung-resident memory CD8+ T cells during influenza viral infection.</a> Immunity. 41 (4), 633-645 (2014).</li>
<li>D'Agostino, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+isolation+and+characterization+of+lung+tissue-resident+memory+T+cells+and+airway-trained+innate+immunity+after+intranasal+vaccination+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for isolation and characterization of lung tissue-resident memory T cells and airway-trained innate immunity after intranasal vaccination in mice.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101652(2022).</li>
<li>Waal, A. M., de Hiemstra, P. S., Ottenhoff, T. H., Joosten, S. A., vander Does, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+epithelial+cells+interact+with+immune+cells+and+bacteria+to+shape+the+microenvironment+in+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Lung epithelial cells interact with immune cells and bacteria to shape the microenvironment in tuberculosis.</a> Thorax. 77 (4), 408-416 (2022).</li>
<li>Bhattacharya, J., Westphalen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-epithelial+interactions+in+pulmonary+alveoli%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Macrophage-epithelial interactions in pulmonary alveoli.</a> Semin Immunopathol. 38 (4), 461-469 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Seringa de 1 mL com ponta deslizante</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>tubo de microcentrífuga de 1,7 mL</td><td>DOT Scientific</td><td>RN1700-GMT</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de 10 mL (descartáveis)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-567-603</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 10 mL com ponta BD Luer-Lok VWR</td><td></td><td>75846-756</td><td></td></tr><tr><td>123 contagem eBeads Counting Beads</td><td>Thermo Scientific</td><td>01-1234-42</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta de 12 canais (30-300ul)</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>7112-3300</td><td></td></tr><tr><td>16% paraformaldeído</td><td>VWR</td><td>100503-917</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de 23 G com bisel regular</td><td>VWR</td><td>305194</td><td></td></tr><tr><td>agulha de 27 G com bisel regular</td><td>VWR</td><td>BD305109</td><td></td></tr><tr><td>pipetas de 5 mL (descartáveis)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>170373</td><td></td></tr><tr><td>tubos de centrifugação de 50 mL</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>28-108</td><td></td></tr><tr><td>Placa inferior redonda de 96 poços</td><td>Corning</td><td>3797</td><td></td></tr><tr><td>ACK lysing buffer</td><td>Gibco</td><td>A100492-01</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-mouse CD11c</td><td>BioLegend</td><td>117311</td><td></td></tr><tr><td>Anti-F4/80 Anticorpo monoclonal de rato (PE (Ficoeritrina)/Cy7)</td><td>BioLegend</td><td>123114</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-mouse CD64 (Fc&gamma; RI)</td><td>BioLegend</td><td>139306</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-rato CD45</td><td>BioLegend</td><td>103115</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard Cateteres IV blindados</td><td>VWR</td><td>381423</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-rato I-A/I-E (MHC-II)</td><td>bioLegend</td><td>107632</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-rato/humano CD11b</td><td>BioLegend</td><td>101235</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 605 anti-rato Ly-6C</td><td>BioLegend</td><td>128036</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 711 anti-rato CD45</td><td>BioLegend</td><td>103147</td><td></td></tr><tr><td>camundongos C57BL/6J&nbsp;</td><td>Jackson Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cd140a (PDGFRA) Anticorpo monoclonal (APA5), PE-Cyanine7, eBioscience</td><td>Life Technologies</td><td>25-1401-82</td><td></td></tr><tr><td>CD170 (Siglec F) Anticorpo monoclonal (1RNM44N), PE</td><td>Life Technologies</td><td>12170280</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de células Centrífuga</td><td>Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Eppenodorf</td><td>5910R</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonuclease I do pâncreas bovino (DNase)</td><td>Millipore Sigma</td><td>DN25-100MG</td><td>Reconstituído a 20 mg/mL em DPBS como solução estoque armazenada a -20 &graus; C</td></tr><tr><td>Descarte</td><td>VWR</td><td>76176-668</td><td>Descongelado uma vez e armazenado como alíquotas de 1mL a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Pinça de dissecação (Dumont #7)</td>Tesoura de dissecção <td>Fine Science</td><td>Tools 11297-00</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ferramentas de Fine Science</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>kit de fixação eBioscience</td><td>Life Technologies</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>TX89125170HU</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>GeminiBio</td><td>100-106</td><td>Descongelado uma vez e inativado por calor antes do armazenamento de longo prazo como alíquotas a -20 &graus; C</td></tr><tr><td>FITC anti-mouse CD31 Anticorpo</td><td>BioLegend</td><td>102406</td><td></td></tr><tr><td>Gibco RPMI 1640 Médio</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-875-093</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de vidro</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-552-3</td><td></td></tr><tr><td>reservatório graduado</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>1930-2235</td><td></td></tr><tr><td>Balde de gelo</td><td>Corning</td><td>432128</td><td></td></tr><tr><td>injeção de hidroclororeto de cetamina (100 mg / mL)</td> A <td>mistura de eutanásia de cetamina e xialazina de Dechra pode ser mantida em 30 mg / mL de cloridrato de cetamina e 4,5 mg / mL de xilazina em DPBS estéril por até um mês.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Millipore Sigma</td><td>5401119001</td><td>Reconstituída a 5 mg / mL em DPBS como solução estoque armazenada a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Tampas para placas de 96 poços</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-201-731</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora Orbital Shaker</td><td>Pipeta Barnstead Lab-Line</td><td>SHKE4000</td><td></td></tr><tr><td>p1000</td><td>Eppenodorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>p1000 dicas</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>Pipeta p200 1122-1830</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppenodorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>p200 dicas</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>1110-1700</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-mouse CD326 (Ep-CAM)</td> <td>BioLegend</td><td>118206</td><td></td></tr><tr><td>PerCP / Cyanine5.5 anti-mouse CD104 Anticorpo</td><td>BioLegend</td><td>123614</td><td></td></tr><tr><td>PerCP / Cyanine5.5 anti-mouse Ly-6G</td><td>BioLegend</td><td>127616</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Aid&nbsp;</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Anti-rato purificado CD16/32 </td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>Referido como "bloco Fc" no texto </td></tr><tr><td>Frasco de spray</td><td>VWR</td><td>23609-182</td><td></td></tr><tr><td>Sutura (Tamanho 2-0)</td><td>VWR</td><td>100190-026</td><td></td></tr><tr><td>Underpads</td><td>VWR</td><td>56617-014</td><td></td></tr><tr><td>Xysed (xilazina 100mg/mL)</td><td>Pivetal</td><td></td><td>Veja as notas de hidrocolorida de cetamina acima.</td></tr><tr><td>Kit de Viabilidade Fixável Zombie Aqua</td><td>BioLegend</td><td>423102</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento de populações de células mieloides e epiteliais vivas do pulmão de camundongo

Isolation of Live Myeloid and Epithelial Cell Populations from the Mouse Lung

Um resumo bem-sucedido resultará em aproximadamente 20-25 milhões de células com viabilidade de 90% a 95%. Se aproximadamente 25.000 contas de contagem forem adicionadas a uma fração de 8% do pulmão, as contas devem comprometer 1% a 3% dos eventos coletados. Após o gating em singletes, aproximadamente 90% -95% das células devem ser Zombie Aqua negativas (indicando viabilidade) (Figura 2A, Figura 3A).
Das células CD45+, as c...

Isolamento de populações de células mieloides e epiteliais vivas do pulmão de camundongo

The lung is continuously exposed to pathogens and other noxious environmental stimuli, rendering it vulnerable to damage, dysfunction, and the development ...

isolation-live-myeloid-epithelial-cell-populations-from-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Aqui, nós descrevemos um protocolo para isolamento e cultura de células endoteliais pulmonares de camundongos. Este método compreende mecânico e dissociação enzimática do tecido pulmonar, bem como um processo de purificação passo 2, utilizando anti-PECAM-1 e anti-ICAM-2 anticorpos conjugados com esferas magnéticas, que produz uma população de células endoteliais pura de origem principalmente microvascular.

Isolamento e cultura de células endoteliais pulmonares de camundongos Neonatal

Neste artigo, vamos demonstrar o isolamento de murino residente de pulmão de células-tronco mesenquimais (MSC pulmão), sua expansão, caracterização e análise de propriedades imunomoduladores.

Isolamento &amp; Caracterização da Hoechst Baixa CD45 Negativo Mouse Células-Tronco Mesenquimais de pulmão

A preparação altamente purificada de células dendríticas pulmonares do rato é descrito. Ênfase específica é dada para o isolamento de um subconjunto de células dendríticas convencionais.

Isolamento de células dendríticas pulmonares do rato

Nós descrevemos o isolamento rápido de murinos primários células tipo II alveolares epiteliais (AECII) por meio de seleção por citometria de fluxo negativo. Estes AECII mostram viabilidade e pureza elevados e são adequadas para uma ampla gama de estudos funcionais e moleculares relativas ao seu papel em condições respiratórias, tais como doenças auto-imunes ou infecciosas.

Isolamento de citometria de fluxo de células primárias Murino Tipo II epiteliais alveolares de Estudos funcionais e Molecular

Este vídeo demonstra uma técnica in vitro para identificar células imunes que residem em pulmões murinos. Depois de isolar as células-alvo do tecido pulmonar murino, elas são marcadas na superfície usando um coquetel de anticorpos marcados com fluoróforo contra marcadores específicos em células imunes inatas e adaptativas. Além disso, monócitos, macrófagos e células dendríticas são marcados usando um marcador intracelular. Os vários tipos de células imunes são então identificados usando...

Um método in vitro para identificar células imunes inatas e adaptativas que residem em pulmões murinos

Este protocolo descreve uma técnica de isolamento para a obtenção de células do estroma mesenquimal residentes primários de pulmão de ratos, através do uso de digestão enzimática, separação por gradiente de densidade, e aderência ao plástico CD146 + selecção esférulas magnéticas.

Isolamento de CD146<sup&gt; +</sup&gt; Células Residente Lung estromais mesenquimais de rato Pulmões

Este protocolo descreve o uso de citometria de fluxo para identificar as alterações na composição das células imunes, perfil de citocina e perfil de quimiocina no ambiente pulmonar após a oclusão da artéria cerebral média transitória, um modelo murino de derrame isquêmico.

Caracterização de Células Imunes e Mediadores Proinflamatórios no Ambiente Pulmonar

Este artigo fornece uma metodologia detalhada para as abordagens de dissociação tecidual e fracionamento celular permitindo o enriquecimento de células epiteliais viáveis de regiões proximais e distais do pulmão humano. Aqui essas abordagens são aplicadas para a análise funcional das células progenitoras epiteliais pulmonares através do uso de modelos de cultura organoides 3D.

Isolamento e enriquecimento de células progenitoras epiteliais pulmonares humanas para a cultura organoide

Neste artigo, células endoteliais primárias do pulmão foram isoladas e cultivadas de camundongos neonatais.

Isolamento de Células Endoteliais Primárias de Pulmão de Camundongo

O protocolo descrito abaixo é uma maneira simples e eficaz de isolar células contendo retinóides de populações de células pulmonares altamente heterogêneas, fazendo uso de autofluorescência retinóide específica e empregando classificação de células ativadas por fluorescência.

Isolamento de células contendo retinóides pulmonares por classificação de células

Este protocolo apresenta um método baseado em citometria de fluxo para isolar células epiteliais alveolares tipo II (AECII) viáveis de pulmões neonatais, juvenis ou adultos de muros (infectados ou não infectados). Essa abordagem permite que estudos moleculares e/ou funcionais posteriores do AECII identifiquem seus papéis durante a inflamação e infecção pulmonar.

Isolamento de Células Epiteliais Alveolares Tipo II de Pulmões Neonatais, Juvenis e Adultos Múrios Adaptáveis a Ambientes Experimentais Infecciosos

Aprenda a isolar populações de células mieloides e epiteliais vivas do pulmão de camundongo. Este protocolo detalha estratégias de gating para identificar subconjuntos celulares específicos e estudar reparo pulmonar após infecção viral.

Isolamento de populações de células mieloides e epiteliais vivas do pulmão de camundongo

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