Name: Inoculação intradérmica de Mycobacterium avium na orelha de camundongo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: Aprenda a técnica de inoculação intradérmica de Mycobacterium avium em orelhas de camundongo para estudar respostas imunes a micobactérias não tuberculosas. Este modelo reprodutível permite investigar infecções sustentadas em condições controladas.

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<ol><li>Abdelaal, H. F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+It%27s+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: It's Complex.</a> Microorganisms. 10 (7), (2022).</li>
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<li>Dutt, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+exposure+to+non-tuberculous+mycobacteria+elicits+B+cell-mediated+immunity+against+pulmonary+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mucosal exposure to non-tuberculous mycobacteria elicits B cell-mediated immunity against pulmonary tuberculosis.</a> Cell Rep. 41 (11), 111783(2022).</li>
<li>Kupz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Latent+Tuberculosis+Infection+to+Study+Intervention+Strategies+to+Prevent+Reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Latent Tuberculosis Infection to Study Intervention Strategies to Prevent Reactivation.</a> PLoS One. 11 (7), e0158849(2016).</li>
<li>Reece, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease+activity+contributes+to+control+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+hypoxic+lung+granulomas+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Serine protease activity contributes to control of Mycobacterium tuberculosis in hypoxic lung granulomas in mice.</a> J Clin Invest. 120 (9), 3365-3376 (2010).</li>
<li>Nemeth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contained+Mycobacterium+tuberculosis+infection+induces+concomitant+and+heterologous+protection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Contained Mycobacterium tuberculosis infection induces concomitant and heterologous protection.</a> PLoS Pathogens. 16 (7), e1008655(2020).</li>
<li>Jarchow-MacDonald, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+Incidence+and+Characteristics+of+Nontuberculous+Mycobacterial+Infections+in+Scotland+and+Comparison+With+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+Incidence+%282011+to+2019%29%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Forum+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Changing Incidence and Characteristics of Nontuberculous Mycobacterial Infections in Scotland and Comparison With Mycobacterium tuberculosis Complex Incidence (2011 to 2019).</a> Open Forum Infect Dis. 10 (1), ofac665(2023).</li>
<li>Thomson, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+climate+variables+on+the+rising+incidence+of+nontuberculous+mycobacterial+%28NTM%29+infections+in+Queensland%2C+Australia+2001-2016%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Influence of climate variables on the rising incidence of nontuberculous mycobacterial (NTM) infections in Queensland, Australia 2001-2016.</a> Sci Total Environ. 740, 139796(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,05% Tween80</td><td>Sigma</td><td>P6224</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 1mL</td><td>Fisher</td><td>15-823-434</td><td></td></tr><tr><td>7H10 triplacas de ágar</td><td>Moltox</td><td>21-40S234</td><td></td></tr><tr><td>26G agulha romba</td><td>Fisher</td><td>NC0981254</td><td></td></tr><tr><td>Armário de biossegurança</td><td>Nuaire</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubadora</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-103-0513</td><td></td></tr><tr><td>Fita dupla face</td><td>Scotch</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de microlitro Hamilton 701N</td><td>Fisher</td><td>14-824-16</td><td></td></tr><tr><td>Pontas omni de tecido duro</td><td>Fisher</td><td>15-340-102</td><td></td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de insulina</td><td>Fisher</td><td>NC1551333</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-890-8598</td><td></td></tr><tr><td>Lupa iluminada</td><td>Brightech</td><td>B07MMZ27QK</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>Homogeneizador de tecidos</td><td>Omni</td><td>TH115</td><td></td></tr><tr><td>Suporte homogeneizador de tecidos</td><td>Omni</td><td>S1000</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr></tbody></table>

inoculação intradérmica de mycobacterium avium na orelha de camundongo

Intradermal Inoculation of Mycobacterium avium in the Mouse Ear

Usamos o protocolo detalhado acima para determinar se um modelo de desafio NTM reprodutível usando a derme da orelha como via de infecção ou exposição poderia ser estabelecido. As orelhas foram coletadas de dois animais no ponto de tempo 28 dias pós-desafio, homogeneizadas e plaqueadas conforme descrito no meio 7H10 seletivo para micobactérias. Observamos que o M. avium persistiu por 28 dias nas orelhas que foram desafiadas por via intradérmica e ausência de M. avium na orelha não desafiada (Figura 2).
Embora não tenhamos observado disseminação para a orelha não desafiada até 28 dias após a infecção, outros que usaram esse modelo de derme da orelha para modelagem latente de TB observaram disseminação para outros locais de órgãos distais14. Nossa hipótese é que uma dose mais baixa de desafio e o uso de isolado de M. avium podem reduzir a disseminação para pontos de tempo posteriores que podem refletir melhor a exposição versus infecção crônica. Portanto, a eutanásia foi realizada em coortes de camundongos desafiados com n = 5 M. avium 28, 56, 90 e 132 dias após a infecção. Os seguintes órgãos foram homogeneizados com o mesmo protocolo descrito para os tecidos auditivos: pulmão, baço, linfonodo drenante (DLN) e cérebro. Essa via de desafio resultou em uma disseminação esporádica ao longo do tempo, onde menos da metade dos animais demonstrou UFC contável em órgãos testados até 56 ou 90 dias após a infecção (Tabela 1). Aos 132 dias após o desafio, todos os camundongos tinham M. avium detectável em seus baços (n = 5/5 animais avaliados), mas pareciam abrigar bactérias mínimas (n = 1/5 em DLN) ou nenhuma (n = 0/5 em pulmões ou cérebro) em outros órgãos neste momento (Tabela 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig1.jpg"> 
Figura 1: Orientação de uma agulha com o lado chanfrado para cima. Antes da inserção da agulha, o lado chanfrado deve estar voltado para cima para administrar adequadamente o inóculo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig2.jpg"> 
Figura 2: Colonização do tecido da orelha por M. avium 28 dias após o desafio. Camundongos C57BL/6 fêmeas foram desafiados na orelha com 102 UFC de Mycobacterium avium. A orelha desafiada (+) foi comparada com a orelha não desafiada (-) aos 28 dias, n = 2 animais individuais de um único experimento mostrado, com cada animal em uma cor e símbolo diferentes. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Hora (dia)</td>
			<td colspan="4">Log de Órgãos10 UFC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pulmão</td>
			<td>Baço</td>
			<td>DLN</td>
			<td>Cérebro</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28</td>
			<td>3,08, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>2,81, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,78, 0,90, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>56</td>
			<td>2.30, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1,53, 3,43, ND, ND, ND</td>
			<td>2,78, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1,20, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,60, 3,35, 3,26, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,60, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>132</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>4.03, 3.58, 3.58, 4.03, 3.69</td>
			<td>2.41, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="5">DLN = linfonodo drenante, ND = não detectado</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Disseminação de M. avium da orelha ao longo do tempo após o desafio. Pulmões, baço, linfonodo de drenagem (DLN) e cérebro foram colhidos de n = 5 camundongos por ponto de tempo após o desafio. Os tecidos homogeneizados foram plaqueados e avaliados quanto ao crescimento bacteriano. A UFC do órgão apresentou como log10 valores transformados onde as bactérias foram contadas e não detectadas (ND) onde nenhuma UFC foi observada em qualquer concentração plaqueada. Dados de curso de tempo representativos de um experimento.

Inoculação intradérmica de Mycobacterium avium na orelha de camundongo

In contrast to natural nontuberculous mycobacterial (NTM) exposures or infections whose pathology is founded on a slow-replicating organism, the aerosol ...

intradermal-inoculation-of-mycobacterium-avium-in-the-mouse-ear

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo demonstra a indução de inflamação sistêmica em um camundongo anestesiado. A injeção de depósitos adjuvantes de antígenos micobacterianos desencadeia a liberação de citocinas e inflamação localizada. Os vasos linfáticos se abrem, permitindo a entrada de células imunes nos gânglios linfáticos e a ativação das células T, que liberam citocinas pró-inflamatórias, levando à inflamação generalizada.

Injeção subcutânea de antígeno bacteriano para induzir inflamação sistêmica em modelo murino

Este vídeo demonstra um método para gerar um modelo de camundongo de uveíte micobacteriana (PMU) para estudar uveíte pós-infecciosa. Após a indução de PMU por injeção intravítrea de Mycobacterium tuberculosis morto pelo calor em um camundongo previamente imunizado com o mesmo imunógeno, a progressão da inflamação crônica no olho é analisada por meio de exames de imagem e...

Um modelo murino de uveíte micobacteriana preparada para estudar uveíte pós-infecciosa

O vídeo demonstra a indução de encefalomielite autoimune experimental em um modelo de camundongo injetando uma combinação de glicoproteínas de oligodendrócitos de mielina e Mycobacterium tuberculosis inativado. O modelo permite que os pesquisadores estudem os mecanismos da doença e testem intervenções terapêuticas.

Indução de encefalomielite autoimune experimental em modelo de camundongo

Este vídeo demonstra um ensaio para imunizar um modelo de camundongo com esporozoítos vivos atenuados. Os esporozoítos de Plasmodium atenuados por radiação são injetados no lado dorsal da orelha do camundongo. Após injeções em vários locais em ambas as orelhas, o camundongo pode se recuperar.

Imunização intradérmica com esporozoítos vivos atenuados em modelo de camundongo

Neste vídeo, um modelo de camundongo com esclerose múltipla é estabelecido usando encefalomielite autoimune experimental (EAE). O camundongo é injetado com uma emulsão contendo um peptídeo neuronal e um adjuvante, desencadeando uma resposta imune que ativa as células T autorreativas. Isso é seguido por uma injeção de toxina coqueluche (PTX) para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que as células T autorreativas se infiltrem no cérebro. Essa infiltração inicia uma...

A matriz extracelular sofre remodelação substancial durante a cicatrização de feridas, inflamação e tumorigênese. Nós apresentamos uma abordagem microscopia de imunofluorescência intravital romance de visualizar a dinâmica de fibrilar, bem como componentes da matriz de malha-like com resolução espacial e temporal alta usando epifluorescência ou microscopia de dois fótons.

Longo prazo intravital Imunofluorescência imagem do tecido componentes da matriz com epifluorescência e microscopia de dois fótons

Os mecanismos que regulam a motilidade intersticial de células T efectoras CD4 em locais de inflamação são relativamente desconhecidos. Apresenta-se uma abordagem não invasiva para visualizar e manipular em células T CD4 + in vitro -primed na derme da orelha inflamado, permitindo o estudo do comportamento dinâmico destas células in situ.

Migração intersticial imagens de células CD4 T na derme inflamadas

Um ensaio em camundongos para rastrear a migração celular da pele para o linfonodo de drenagem é descrito, o que permite a caracterização das células dendríticas da pele mobilizadas para o linfonodo após infecção do pata com Bacilo Calmette-Guérin.

Um ensaio baseado em CFSE para estudar a migração de Murino pele as células dendríticas em drenagem gânglios linfáticos durante a infecção com<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacilo de Calmette-Guérin

Neste relato apresentamos um protocolo que permite ao investigador gerar um modelo de uveíte intraocular em camundongo. Mais comumente referido como uveíte autoimune experimental (EAU), este modelo estabelecido captura muitos aspectos da doença humana. Aqui, descreveremos como induzir e monitorar a progressão da doença usando várias leituras.

Uveíte Autoimune Experimental: Um Modelo de Rato Inflamatório Intraocular

Este protocolo descreve as etapas para a indução da Uveíte Micobacteriana Primed (PMU) em camundongos. Este método descreve as etapas para ajudar a produzir inflamação ocular confiável e robusta no sistema modelo de rato. Usando este protocolo, geramos olhos uveíticos e outros olhos não inflamados de animais individuais para avaliação adicional com ensaios imunológicos, transcriptômicos e proteômicos.

Uveíte micobacteriana preparada (PMU) como modelo para uveíte pós-infecciosa

Os camundongos são geralmente resistentes a infecções por Mycobacterium abscessus, o que complica a descoberta e o desenvolvimento de antibióticos muito necessários contra infecções pulmonares. Aqui, descrevemos um método de preparação de inóculo e infecção intratraqueal que demonstrou fornecer infecção sustentada em camundongos imunocompetentes.

Preparação de Mycobacterium abscessus embebido em grânulo de ágar para inocular camundongos imunocompetentes por via intratraqueal

Aprenda a técnica de inoculação intradérmica de Mycobacterium avium em orelhas de camundongo para estudar respostas imunes a micobactérias não tuberculosas. Este modelo reprodutível permite investigar infecções sustentadas em condições controladas.

Inoculação intradérmica de Mycobacterium avium na orelha de camundongo

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