Name: Separação e Fracionamento de Proteínas da Parede Celular e da Membrana Celular de Mycobacterium tuberculosis para Análise de Proteínas a Jusante (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Aprenda a separar proteínas da parede celular e membrana de Mycobacterium tuberculosis usando focagem isoelétrica e SDS-PAGE. Este método facilita análises proteômicas e imunológicas diretas para diagnóstico de tuberculose.

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<ol><li>Seshadri, C., Turner, M. T., Lewinsohn, D. M., Moody, D. B., Van Rhijn, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoproteins+are+major+targets+of+the+polyclonal+human+T+cell+response+to+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lipoproteins are major targets of the polyclonal human T cell response to Mycobacterium tuberculosis.</a> J Immunol. 190 (1), 278-284 (2013).</li>
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<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Integrated+approach+for+proteomic+and+immunological+analysis+of+cell+wall+and+cell+membrane+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Arch%22%5BJournal%5D)">An Integrated approach for proteomic and immunological analysis of cell wall and cell membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Med Res Arch. 11 (11), (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Caldo 7H9</td><td>Himídia&nbsp;</td><td>M198</td><td></td></tr><tr><td>40% Bio-Lyte 3/10 Anfólito&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1631113</td><td></td></tr><tr><td>Ensaio de proteína BCA&nbsp;</td><td>MERCK</td><td>BCA1</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 5/7 Anfólito&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1631152</td><td></td></tr><tr><td>concentradores centrífugos 3 kDa</td><td>MERCK</td><td>Z629456</td><td></td></tr><tr><td>Digitonina.</td><td>MERCK</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Dnase</td><td>MERCK</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>TDT</td><td>MERCK</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>MERCK</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>MERCK</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>MERCK</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Leupeptina</td><td>MERCK</td><td>E18</td><td></td></tr><tr><td>Pestatina A</td><td>MERCK</td><td>Pág. 5318</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>MERCK</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>Rnase</td><td>MERCK</td><td>10109134001</td><td></td></tr><tr><td>Rotofor&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>170-2986</td><td>&nbsp; aparelho de focalização isoelétrica (IEF)</td></tr><tr><td>Soniador</td><td>Vibra-Cell, Sônica</td><td>VC 750</td><td></td></tr><tr><td>TLCK</td><td>MERCK</td><td>T7254</td><td></td></tr><tr><td>TPCK</td><td>MERCK</td><td>4376</td><td></td></tr><tr><td>ureia</td><td>MERCK</td><td>U5378</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho de Gel Eluter Inteiro&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

separação e fracionamento de proteínas da parede celular e da membrana celular de mycobacterium tuberculosis para análise de proteínas a jusante

Separation and Fractionation of Cell Wall and Cell Membrane Proteins from Mycobacterium tuberculosis for Downstream Protein Analysis

Isolamento de proteínas da parede celular e da membrana celular por ultracentrifugação de alta velocidade As proteínas da parede celular e da membrana foram isoladas de lisados de células inteiras por meio de ultracentrifugação, conforme descrito no protocolo. A análise SDS-PAGE das frações subcelulares separadas - parede celular, membrana celular e perfis de proteína do citosol de M. tuberculosis é mostrada na Figura 1.
Separa...

Separação e Fracionamento de Proteínas da Parede Celular e da Membrana Celular de Mycobacterium tuberculosis para Análise de Proteínas a Jusante

Mycobacterium cell wall and membrane proteins, which play a central role in tuberculosis pathogenesis, were successfully separated using preparative ...

separation-fractionation-cell-wall-cell-membrane-proteins-from

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Fonte: Gupta, S., Marcela Rodriguez, G. Isolamento e caracterização de vesículas extracelulares produzidas por micobactérias limitadas ao ferro. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o isolamento gradual de vesículas extracelulares (EVs) de Mycobacterium tuberculosis cultivadas sob condições limitantes de ferro que imitam o ambiente hospedeiro. Ele descreve o uso de ultrafiltração, centrifugação diferencial e separação de gradiente de densidade para enriquecer e identificar frações contendo...

Isolamento de vesículas extracelulares contendo sideróforo de Mycobacterium tuberculosis

Este vídeo demonstra a separação de ácidos micólicos baseada em cromatografia em camada fina. Essa técnica separa os diferentes ácidos micólicos - lipídios de cadeia longa presentes na parede celular das micobactérias - com base em sua polaridade.

Separação baseada em cromatografia em camada fina de variantes de ácido micólico: um método para separar lipídios da parede celular micobacteriana com base na polaridade

Este vídeo demonstra a técnica de cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) para purificar vesículas extracelulares bacterianas (EVs) do filtrado de cultura de Mycobacterium tuberculosis (Mtb). A técnica utiliza uma coluna porosa embalada com resina para obter frações purificadas de EVs. As partículas porosas permitem seletivamente que proteínas menores entrem nos poros, resultando em eluição mais lenta. Ao mesmo tempo, os EVs são excluídos de entrar nos poros devido ao seu tamanho maior e são...

Uma técnica de cromatografia de exclusão de tamanho para purificar vesículas extracelulares micobacterianas

A parede celular bacteriana é composta de peptidoglycan, uma rede macromolecular de fios de açúcar cruzados por peptídeos. A Cromatografia Líquida Ultra Performance fornece alta resolução e throughput para novas descobertas da composição peptidoglycan. Apresentamos um procedimento para o isolamento das paredes celulares (sacculi) e sua posterior preparação para análise via UPLC.

Isolamento e Preparação de Paredes Celulares Bacterianas para Análise Composicional por Cromatografia Líquida de Ultra Desempenho

Bactérias gram-negativas produzem duas membranas espacialmente segregadas. A membrana externa é particionada da membrana interna por um periplasma e uma camada peptidoglicana. A capacidade de isolar as bicamadas duplas desses micróbios tem sido fundamental para a compreensão de sua fisiologia e patogênese.

Separação do envelope celular para bactérias gram-negativas em frações de membrana interna e externa com ajustes técnicos para Acinetobacter baumannii

Um protocolo é apresentado para extrair o conteúdo lipídico total da parede celular de uma ampla gama de micobactérias. Além disso, são mostrados protocolos de extração e analíticas dos diferentes tipos de ácidos micólicos. Um protocolo cromatográfico de camada fina para monitorar esses compostos micobacterianos também é fornecido.

Análise da Composição Lipídica de Mycobacteria por Cromatografia de Camada Fina

As vesículas bacterianas desempenham papéis importantes na patogênese e têm aplicações biotecnológicas promissoras. A heterogeneidade das vesículas complica a análise e o uso; portanto, é necessário um método simples e reprodutível para separar diferentes tamanhos de vesículas. Aqui, demonstramos o uso da cromatografia de exclusão de tamanho para separar vesículas heterogêneas produzidas por Aggregatibacter actinomycetemcomitans.

Cromatografia de exclusão de tamanho para analisar heterogeneidade vesícula de membrana externa bacteriana

Este protocolo descreve a cromatografia de exclusão de tamanho, uma técnica fácil e reprodutível para enriquecer as vesículas extracelulares mycobacterium tuberculosis de supernascedores culturais.

Mycobacterium tuberculosis Enriquecimento de vesícula extracelular através da cromatografia de exclusão de tamanho

Este protocolo detalha o enriquecimento de vesículas extracelulares de micobactérias nativas (mEVs) de culturas axênicas de Mycobacterium smegmatis (Msm) e como mCherry (um repórter fluorescente vermelho) contendo MsmEVs recombinantes pode ser projetado e enriquecido. Por fim, verifica-se a nova abordagem com o enriquecimento de MsmEVs contendo a proteína EsxA do Mycobacterium tuberculosis.

Enriquecimento de vesículas extracelulares nativas e recombinantes de micobactérias

Embora os procariontes não tenham um sistema organelar, existem regiões subcelulares com proteínas localizadas. A análise quantitativa e qualitativa das enzimas e proteínas nas regiões subcelulares é importante para o desenvolvimento de alvos de fármacos e vacinas. Aqui, ilustramos o fracionamento subcelular de proteínas Leptospiras usando Triton X-114 e sua análise.

Enriquecimento de proteínas subcelulares em Leptospira usando uma abordagem de fracionamento baseada em Triton X-114

Este protocolo descreve a cultura, colheita e concentração de proteínas secretadas de Mycobacterium tuberculosis. As proteínas filtradas de cultura (CFPs) são quantificadas, separadas em 20 frações por focalização isoelétrica e posteriormente resolvidas em 30 frações usando um SDS-PAGE preparativo e um sistema de eletroeluição.

Separação e Fracionamento de Proteínas de Filtrado de Cultura (CFPs) de Mycobacterium tuberculosis

Aprenda a separar proteínas da parede celular e membrana de Mycobacterium tuberculosis usando focagem isoelétrica e SDS-PAGE. Este método facilita análises proteômicas e imunológicas diretas para diagnóstico de tuberculose.

Separação e Fracionamento de Proteínas da Parede Celular e da Membrana Celular de Mycobacterium tuberculosis para Análise de Proteínas a Jusante (Vídeo) | JoVE Journal

Separação e Fracionamento de Proteínas da Parede Celular e da Membrana Celular de Mycobacterium tuberculosis para Análise de Proteínas a Jusante

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