Name: Células de crista neural craniana tridimensionais in vitro protocolo de diferenciação para ensaio multiplexado (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Aprenda a diferenciar células de crista neural craniana em 3D a partir de células-tronco embrionárias de camundongo. Este protocolo reduz a variabilidade no tamanho dos neuroesferas e permite ensaios multiplexados para estudar o desenvolvimento celular.

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<ol><li>Rothstein, M., Bhattacharya, D., Simoes-Costa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+of+neural+crest+axial+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The molecular basis of neural crest axial identity.</a> Dev Biol. 444, S170-S180 (2018).</li>
<li>Smeriglio, P., Zalc, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cranial+neural+crest+cells+contribution+to+craniofacial+bone+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Osteoporos+Rep%22%5BJournal%5D)">Cranial neural crest cells contribution to craniofacial bone development and regeneration.</a> Curr Osteoporos Rep. 21 (5), 624-630 (2023).</li>
<li>Zalc, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactivation+of+the+pluripotency+program+precedes+formation+of+the+cranial+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Reactivation of the pluripotency program precedes formation of the cranial neural crest.</a> Science. 371 (6529), eabb4776(2021).</li>
<li>Perera, S. N., Kerosuo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+road+again%3A+Establishment+and+maintenance+of+stemness+in+the+neural+crest+from+embryo+to+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">On the road again: Establishment and maintenance of stemness in the neural crest from embryo to adulthood.</a> Stem Cells. 39 (1), 7-25 (2021).</li>
<li>Nguyen, B. H., Ishii, M., Maxson, R. E., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+and+manipulation+of+O9-1+neural+crest+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Culturing and manipulation of O9-1 neural crest cells.</a> J Vis Exp. (140), e58346(2018).</li>
<li>Ishii, M., Arias, A. C., Liu, L., Chen, Y. B., Bronner, M. E., Maxson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stable+cranial+neural+crest+cell+line+from+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">A stable cranial neural crest cell line from mouse.</a> Stem Cells Dev. 21 (17), 3069-3080 (2012).</li>
<li>Rada-Iglesias, A., Bajpai, R., Prescott, S., Brugmann, S. A., Swigut, T., Wysocka, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenomic+annotation+of+enhancers+predicts+transcriptional+regulators+of+human+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Epigenomic annotation of enhancers predicts transcriptional regulators of human neural crest.</a> Cell Stem Cell. 11 (5), 633-648 (2012).</li>
<li>Cederquist, G. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specification+of+positional+identity+in+forebrain+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Specification of positional identity in forebrain organoids.</a> Nat Biotechnol. 37 (4), 436-444 (2011).</li>
<li>Rada-Iglesias, A., Bajpai, R., Swigut, T., Brugmann, S. A., Flynn, R. A., Wysocka, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+chromatin+signature+uncovers+early+developmental+enhancers+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A unique chromatin signature uncovers early developmental enhancers in humans.</a> Nature. 470 (7333), 279-283 (2011).</li>
<li>Prescott, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancer+divergence+and+cis-regulatory+evolution+in+the+human+and+chimp+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Enhancer divergence and cis-regulatory evolution in the human and chimp neural crest.</a> Cell. 163 (1), 68-83 (2015).</li>
<li>Chaddah, R., Arntfield, M., Runciman, S., Clarke, L., van der Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+neural+stem+cells+from+human+embryonic+stem+cell+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Clonal neural stem cells from human embryonic stem cell colonies.</a> J Neurosci. 32 (23), 7771-7781 (2012).</li>
<li>Bajpai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHD7+cooperates+with+PBAF+to+control+multipotent+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">CHD7 cooperates with PBAF to control multipotent neural crest formation.</a> Nature. 463 (7283), 958-962 (2010).</li>
<li>Sipahi, R., Zupanc, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stochastic+cellular+automata+model+of+neurosphere+growth%3A+Roles+of+proliferative+potential%2C+contact+inhibition%2C+cell+death%2C+and+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Theor+Biol%22%5BJournal%5D)">Stochastic cellular automata model of neurosphere growth: Roles of proliferative potential, contact inhibition, cell death, and phagocytosis.</a> J Theor Biol. 445, 151-165 (2018).</li>
<li>Mori, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+neurosphere+size+on+the+growth+rate+of+human+neural+stem%2Fprogenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of neurosphere size on the growth rate of human neural stem/progenitor cells.</a> J Neurosci Res. 84 (8), 1682-1691 (2006).</li>
<li>Kress, C., Vandormael-Pournin, S., Baldacci, P., Cohen-Tannoudji, M., Babinet, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonpermissiveness+for+mouse+embryonic+stem+%28ES%29+cell+derivation+circumvented+by+a+single+backcross+to+129%2FSv+strain%3A+establishment+of+ES+cell+lines+bearing+the+Omd+conditional+lethal+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Nonpermissiveness for mouse embryonic stem (ES) cell derivation circumvented by a single backcross to 129/Sv strain: establishment of ES cell lines bearing the Omd conditional lethal mutation.</a> Mamm Genome. 9 (12), 998-1001 (1998).</li>
<li>Simões-Costa, M., Bronner, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+neural+crest+identity%3A+a+gene+regulatory+recipe%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Establishing neural crest identity: a gene regulatory recipe.</a> Development. 142 (2), 242-257 (2015).</li>
<li>Memberg, S. P., Hall, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dividing+neuron+precursors+express+neuron-specific+tubulin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Dividing neuron precursors express neuron-specific tubulin.</a> J Neurobiol. 27 (1), 26-43 (1995).</li>
<li>Kim, C. N., Shin, D., Wang, A., Nowakowski, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+molecular+dynamics+of+the+developing+human+thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal molecular dynamics of the developing human thalamus.</a> Science. 382, eadf9941(2023).</li>
<li>Grimaldi, A., Comai, G., Mella, S., Tajbakhsh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+bipotent+progenitors+that+give+rise+to+myogenic+and+connective+tissues+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22ELife%22%5BJournal%5D)">Identification of bipotent progenitors that give rise to myogenic and connective tissues in mouse.</a> ELife. 11, e70235(2022).</li>
<li>To, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multiomic+atlas+of+human+early+skeletal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A multiomic atlas of human early skeletal development.</a> Nature. 635 (8039), 657-667 (2024).</li>
<li>Bajpai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+stages+of+rapid+and+uniform+neuralization+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Molecular stages of rapid and uniform neuralization of human embryonic stem cells.</a> Cell Death Differ. 16 (6), 807-825 (2009).</li>
<li>Kerosuo, L., Nie, S., Bajpai, R., Bronner, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crestospheres%2C+Long-term+maintenance+of+multipotent%2C+premigratory+neural+crest+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Crestospheres, Long-term maintenance of multipotent, premigratory neural crest stem cells.</a> Stem Cell Reports. 5 (4), 499-507 (2015).</li>
<li>Abe, S., Yamaguchi, S., Sato, Y., Harada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-derived+multipotent+progenitor+cells+obtained+from+human+oral+mucosa+are+enriched+in+neural+crest+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Sphere-derived multipotent progenitor cells obtained from human oral mucosa are enriched in neural crest cells.</a> Stem Cells Transl Med. 5 (1), 117-128 (2016).</li>
<li>Jensen, J. B., Parmar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strengths+and+limitations+of+the+neurosphere+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Strengths and limitations of the neurosphere culture system.</a> Mol Neurobiol. 34 (3), 153-161 (2006).</li>
<li>Ziegler, L., Grigoryan, S., Yang, I. H., Thakor, N. V., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+generation+of+Schwann+cells+from+human+embryonic+stem+cell-derived+neurospheres%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient generation of Schwann cells from human embryonic stem cell-derived neurospheres.</a> Stem Cell Rev Rep. 7 (2), 394-403 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,22 &mu; m filtros de seringa</td><td>ClearLine</td><td>146560</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Tubo Cônico de Polipropileno de Alta Clareza</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>200 &micro; L ClearLine Plus Pontas de Filtro de Baixa Ligação</td><td>Dutscher</td><td>713263</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; m filtros</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Pipeta sorológica</td><td>Starstedt</td><td>86.1253.001</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Tubo cônico de polipropileno de alta clareza</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Merck-Sigma</td><td>A6964</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 burro anti coelho IgG (H + L)</td> <td>Thermofisher Scientific</td><td>A21206</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 burro anti IgG de camundongo (H+L)</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>A21203</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti cabra de burro IgG (H+L)</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>A31571</td><td></td></tr><tr><td>Solução antibiótico-antimicótica&nbsp;</td><td>Suplemento Merck-Sigma</td><td>A5955</td><td></td></tr><tr><td>B27 PLUS</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino (BSA)</td><td>Merck-Sigma</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Clorofórmio</td><td>Carlo Erba</td><td>438601</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase Tipo IV</td><td>Thermofisher Scientific, Gibco</td><td>17104019</td><td></td></tr><tr><td>Costar 6 placas de poços múltiplos tratadas com TC bem transparente</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Óculos de cobertura, redondos</td><td>VWR&</td><td>nbsp; 630-2113</td><td></td></tr><tr><td>DMEM KnockOut</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>10829018</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12+Glutamax</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>10565018</td><td></td></tr><tr><td>DMEM alta glicose</td><td>Merck-Sigma</td><td>D0822</td><td></td></tr><tr><td>DNA LoBind&nbsp; Tubos, 2 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30108078</td><td></td></tr> Água <tr><td>Destilada Livre de DNase/RNase</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>10977-035</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 0,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30121023</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 2 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30120094</td><td></td></tr><tr><td>ESGRO mLIF Medium Supplement</td><td>Merck-Sigma</td><td>ESG1107</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 70%</td><td>Carlo Erba</td><td>528170</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Soro Bovino</td><td>Merck-Sigma</td><td>F7524</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectina</td><td>Merck-Sigma</td><td>F085-2MG</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>Invitrogen</td><td>00-4958-02</td><td></td></tr><tr><td>Solução de gelatina</td><td>Merck-Sigma</td><td>ES-006-B</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Humano EGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15-500UG</td><td></td></tr><tr><td>Humano FGF-básico</td><td>Peprotech</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>Humano SOX9 Anticorpo</td><td>R & Dsystems</td><td>AF3075</td><td></td></tr><tr><td>Insulina do pâncreas bovino</td><td>Merck-Sigma</td><td>I6634</td><td></td></tr><tr><td>iScript cDNA Synthesis Kit</td><td>Biorad</td><td>1708891</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Anti-Human AP-2 alpha Monoclonal Antibody, Unconjugated</td><td>DSHB</td><td>3B5</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Anti-Human PAX7 Monoclonal Monoclonal, Unconjugated</td><td></td><td></td> DSHB PAX7 <td></td></tr><tr><td>N2</td> suplemento <td>Thermofisher Scientific</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal Medium</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>Placa tratada para cultura de tecidos, 96 poços,</td> Placa tratada com cultura de <td>351172</td><td></td><td>não tecido de</td> fundo plano</tr><tr><td>, 96 poços,</td><td>solução de 16% de</td> paraformaldeído <td>351177</td><td></td></tr> de <tr>fundo em U, <td>Microscopia Eletrônica</td><td>de grau em</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Propan-2-ol</td><td>Carlo Erba</td><td>415154</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-tubulina &beta; 3 purificado</td><td>Biolegend</td><td>MMS-435P</td><td></td></tr><tr><td>RapiClear 1.47</td><td>Sunjin Lab</td><td>RC147001</td><td></td></tr><tr><td>RapiClear 1.52</td><td>Sunjin Lab</td><td>RC152001</td><td></td></tr><tr><td>Scotch Dupla Face 12.7 mm &vezes; 22.8 m</td><td></td><td></td><td>Fita dupla face transparente sem fibra</td></tr><tr><td>Kit SensiFAST SYBR No-ROX</td><td>Meridian Bioscience</td><td>BIO-98020</td><td></td></tr><tr><td>Bisturis Cirúrgicos Descartáveis Estéreis</td><td>Swann-Morton</td><td>05XX</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Lâminas de Microscópio de Adesão</td><td>Epredia</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>A16046. </td><td></td></tr><tr><td>AP TRIzol Reagente</td><td>FisherScientific</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,05%)</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Fisher Scientific</td><td>10113103</td><td></td></tr><tr><td>TWIST1 Rabbit mAb (IF Formulado)</td><td>Tecnologia de sinalização celular</td><td>E7E2G</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanol</td><td>Thermofisher Scientific</td><td></td><td></td>31350010</tr></tbody></table>

células de crista neural craniana tridimensionais in vitro protocolo de diferenciação para ensaio multiplexado

Cranial Neural Crest Cells Three-Dimensional In Vitro Differentiation Protocol for Multiplexed Assay

Seguindo o protocolo, as colônias de mESC foram dissociadas e 3000 células foram semeadas em placas de 96 poços não tratadas com TC. No dia 2, os NS agregados foram transferidos para placas de 96 poços de fundo plano não tratadas com TC para permitir que se fixassem. Uma visualização simplificada do protocolo de agregação NS é fornecida na Figura 1A. Os NS foram cultivados até o dia 9 e depois processados para coloração por imunofluorescência. As células que migraram do SN para a placa foram...

Células de crista neural craniana tridimensionais in vitro protocolo de diferenciação para ensaio multiplexado

With their remarkable capacity to generate both ectodermal and mesenchymal derivatives, cranial neural crest cells (CNCC) have attracted a lot of interest ...

cranial-neural-crest-cells-three-dimensional-vitro-differentiation

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Para cultivar células-tronco da crista neural (NCSC) in vitro, um meio especial (NCSCM) é necessária. Parte essencial da NCSCM é extrair pinto embrião (CEE). Nós aqui descrever as técnicas precisas para produzir uma quantidade maximizada de puro e de alta qualidade CEE, incluindo detalhes como o isolamento, maceração, centrifugação, filtração e processos.

Produção de Extrato de embrião de galinha para o cultivo de células-tronco neurais murino Crest

Isolamento de crista neural embrionário a partir do tubo neural facilita o uso...

Isolamento e cultivo de células da crista neural do tubo neural embrionário murino

Este vídeo ilustra uma técnica para isolar as dobras neurais cranianas da região do mesencéfalo de embriões de pintinhos. Apresenta um processo detalhado de dissecção das dobras neurais, sua colocação e fixação em lamínulas revestidas com fibronectina, seguido pela observação da migração das células da crista neural das dobras neurais.

Isolando dobras neurais cranianas de um embrião de pintinho para uma cultura de células da crista neural

Crista neural (CN), as células derivadas de células-tronco pluripotentes humanas (HPSC) tem um grande potencial para a modelagem de desenvolvimento humano e de doenças e para terapias de substituição celular. Aqui, uma adaptação livre de alimentador do atualmente...

Derivação sem alimentador de células da crista neural progenitoras pluripotentes humanas de células-tronco

Com a intenção de caracterizar mudanças em miRNAs em células-tronco neurais humanas diferenciadas (hNSCs), descrevemos a diferenciação de hNSC em um sistema tridimensional, a avaliação de mudanças na expressão de microRNAs por matriz de PCR de miRNA e análise computacional para predição de alvos de miRNAs e sua validação por ensaio de luciferase dupla.

Diferenciação de uma linha de células-tronco neurais em Três Culturas dimensionais, os genes Análise de microRNA e putativo alvo

Nós descrevemos uma técnica para usar células-tronco embrionárias murinas para gerar dois ou três corpos embrióides dimensionais. Em seguida, explicar como induzir a diferenciação neuronal das células do corpo embrióides por ácido retinóico, e como para analisar o seu estado de diferenciação por imunofluorescência marcador de células progenitoras e imunotransferência.

Análise do induzida por ácido retinóico Neural diferenciação de células estaminais embrionárias rato em corpos embrióides Dois e tridimensionais

Este protocolo descreve a dissecção e a cultura de pilhas neurais cranianas da crista dos modelos do rato, primeiramente para o estudo da migração da pilha. Nós descrevemos as técnicas ao vivo da imagem latente usadas e a análise da velocidade e da forma da pilha muda.

Dissecção, cultura e análise de células da crista neural craniana primária do mouse para o estudo de delaminação e migração de células de crista neural

Apresentado aqui é um protocolo para a geração de uma cultura unicelular de células-tronco embrionárias humanas e sua diferenciação subseqüente em células progenitoras neurais. O protocolo é simples, robusto, escalável e adequado para rastreamento de medicamentos e aplicações de medicina regenerativa.

Diferenciação neural eficiente usando a cultura unicelular de células-tronco embrionárias humanas

Neste protocolo, descrevemos uma estratégia de diferenciação estável e altamente eficiente para a geração de neurônios simpáticos pós-ganglionários a partir de células-tronco pluripotentes humanas. Este modelo disponibilizará neurônios para o uso de estudos de múltiplos distúrbios autônomos.

Diferenciação eficiente de neurônios simpáticos pós-ganglionários usando células-tronco pluripotentes humanas em condições de cultura sem alimentadores e quimicamente definidas

Aqui, estabelecemos um método de baixo custo e fácil de operar que direciona a diferenciação rápida e eficiente das células-tronco embrionárias para os neurônios. Este método é adequado para popularização entre laboratórios e pode ser uma ferramenta útil para a pesquisa neurológica.

Diferenciação neuronal de células-tronco embrionárias do rato in vitro

Este protocolo versátil descreve o isolamento das células de crista neural pré-cardíaca (NCCs) através da excisão de dobras neurais cranianas de embriões de filhotes. Após o revestimento e a incubação, as DCNT migratórias emergem das explicações da dobra neural, permitindo a avaliação da morfologia celular e da migração em um ambiente 2D simplificado.

Preparação e Análise Morfológica das Culturas celulares da crista neural do pintinho

Aprenda a diferenciar células de crista neural craniana em 3D a partir de células-tronco embrionárias de camundongo. Este protocolo reduz a variabilidade no tamanho dos neuroesferas e permite ensaios multiplexados para estudar o desenvolvimento celular.

Células de crista neural craniana tridimensionais in vitro protocolo de diferenciação para ensaio multiplexado

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