Name: Inervação de organoides intestinais humanos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Aprenda a gerar organoides intestinais humanos inervados para engenharia de tecidos. Este método integra o sistema nervoso entérico usando sinalização bioquímica e forças biomecânicas, melhorando a funcionalidade e organização celular.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+bowel+syndrome%3A+epidemiology+and+etiology%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Short bowel syndrome: epidemiology and etiology.</a> Semin Pediatr Surg. 19 (1), 3-9 (2010).</li>
<li>Spencer, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+short+bowel+syndrome%3A+redefining+predictors+of+success%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Pediatric short bowel syndrome: redefining predictors of success.</a> Ann Surg. 242 (3), discussion 409-412 403-409 (2005).</li>
<li>Goulet, O., Pigneur, B., Charbit-Henrion, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+enteropathies+involving+defects+in+enterocyte+structure+or+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract+Res+Clin+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Congenital enteropathies involving defects in enterocyte structure or differentiation.</a> Best Pract Res Clin Gastroenterol. 56-57, 101784(2022).</li>
<li>Koglmeier, J., Lindley, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+diarrhoeas+and+enteropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Congenital diarrhoeas and enteropathies.</a> Nutrients. 16 (17), 2971(2024).</li>
<li>Duggan, C. P., Jaksic, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+intestinal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pediatric intestinal failure.</a> N Engl J Med. 377 (7), 666-675 (2017).</li>
<li>Spence, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+intestinal+tissue+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells into intestinal tissue in vitro.</a> Nature. 470 (7332), 105-109 (2011).</li>
<li>McCracken, K. W., Howell, J. C., Wells, J. M., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+human+intestinal+tissue+from+pluripotent+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating human intestinal tissue from pluripotent stem cells in vitro.</a> Nat Protoc. 6 (12), 1920-1928 (2011).</li>
<li>Bajpai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHD7+cooperates+with+PBAF+to+control+multipotent+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">CHD7 cooperates with PBAF to control multipotent neural crest formation.</a> Nature. 463 (7283), 958-962 (2010).</li>
<li>Workman, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+human+pluripotent-stem-cell-derived+intestinal+tissues+with+a+functional+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Engineered human pluripotent-stem-cell-derived intestinal tissues with a functional enteric nervous system.</a> Nat Med. 23 (1), 49-59 (2017).</li>
<li>Schlieve, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cell+implantation+restores+enteric+nervous+system+function+and+alters+the+gastrointestinal+transcriptome+in+human+tissue-engineered+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Neural crest cell implantation restores enteric nervous system function and alters the gastrointestinal transcriptome in human tissue-engineered small intestine.</a> Stem Cell Rep. 9 (3), 883-896 (2017).</li>
<li>Fattahi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deriving+human+ENS+lineages+for+cell+therapy+and+drug+discovery+in+Hirschsprung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Deriving human ENS lineages for cell therapy and drug discovery in Hirschsprung disease.</a> Nature. 531 (7592), 105-109 (2016).</li>
<li>Barber, K., Studer, L., Fattahi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+enteric+neuron+lineages+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Derivation of enteric neuron lineages from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 14 (4), 1261-1279 (2019).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome-wide+analysis+reveals+hallmarks+of+human+intestine+development+and+maturation+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Transcriptome-wide analysis reveals hallmarks of human intestine development and maturation in vitro and in vivo.</a> Stem Cell Rep. 4 (6), 1140-1155 (2015).</li>
<li>Boyle, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+transplantation+of+human+intestinal+organoids+enhances+select+tight+junction+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo transplantation of human intestinal organoids enhances select tight junction gene expression.</a> J Surg Res. 259, 500-508 (2021).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tissue-engineered+small+intestine+using+embryonic+stem+cell-derived+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Generation of tissue-engineered small intestine using embryonic stem cell-derived human intestinal organoids.</a> Biol Open. 4 (11), 1462-1472 (2015).</li>
<li>Mahe, M. M., Brown, N. E., Poling, H. M., Helmrath, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+model+of+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo model of small intestine.</a> Methods Mol Biol. 1597, 229-245 (2017).</li>
<li>McNeill, E. P., Gupta, V. S., Sequeira, D. J., Shroyer, N. F., Speer, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+murine+host+sex+as+a+biological+variable+in+transplanted+human+intestinal+organoid+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of murine host sex as a biological variable in transplanted human intestinal organoid development.</a> Dig Dis Sci. 67 (12), 5511-5521 (2022).</li>
<li>Singh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+transplantation+sites+for+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of transplantation sites for human intestinal organoids.</a> PLoS One. 15 (8), e0237885(2020).</li>
<li>Watson, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+human+small+intestine+using+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of human small intestine using pluripotent stem cells.</a> Nat Med. 20 (11), 1310-1314 (2014).</li>
<li>Cortez, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+human+intestinal+organoids+into+the+mouse+mesentery%3A+A+more+physiologic+and+anatomic+engraftment+site%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of human intestinal organoids into the mouse mesentery: A more physiologic and anatomic engraftment site.</a> Surgery. 164 (4), 643-650 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100x Solução de Aminoácidos Não Essenciais (NEAA)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cônicos de 15 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>12565269</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>07920</td><td>"reagente de desprendimento de células enzimáticas"</td></tr><tr><td>B-27 Suplemento (50x), menos vitamina A</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>12587010</td><td>Para ENCC</td></tr><tr><td>Suplemento B-27 (50x), sem soro</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>para</td></tr><tr><td>hemacitômetro HIO Bright-Line</td><td>Hausser Scientific</td><td>3120</td><td></td></tr><tr><td>Microplacas de fixação ultrabaixa Corning Costar</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-601</td><td></td></tr><tr><td>Placa de fundo plano Corning de 24 poços, tratada com TC</td><td>VWR</td><td>29442-044</td><td></td></tr><tr><td>Placa de fundo plano Corning 3516 6 poços</td><td>VWR</td><td>29442-042</td><td></td></tr><tr><td>Essential 6 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A1516401</td><td></td></tr><tr><td>Essential 8 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A2858501</td><td>Meio alternativo de células-tronco, usado para placas ENCC.&nbsp;</td></tr><tr><td>Pinça de ponta fina</td><td>Dumont</td><td>11223-20</td><td></td></tr><tr><td>Forma Steri-Cycle i160</td><td>Thermo Scientific</td><td>50145522</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Advanced DMEM/F12</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>Gibco HEPES 1 M</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Neurobasal Medium</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>Glutagro, 200 mM, 100x</td><td>Corning</td><td>25-015-CI</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>H9 humano ESC Wicell</td><td>International Banco de Células-Tronco</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>HyCloneTM FBS Defined</td><td>VWR</td><td>16777-002</td><td></td></tr><tr><td>LabGard Gabinete de Segurança Biológica</td><td>Nuaire</td><td>Nu-430-400</td><td></td></tr><tr><td>Matriz de Membrana de Basement GFR Matrigel, Sem Vermelho de Fenol,</td><td>Corning</td> Livre de LDEV <td>356231</td><td>"Matriz de membrana de basal 3D transparente"</td></tr><tr><td>Matriz qualificada por Matrigel hESC,</td><td>Corning</td> sem LDEV <td>354277</td><td>"Matriz de membrana de basal 3D"</td></tr><tr><td>Micropipetas</td><td>Eppendorf (100-1000, 20-200, 10-100, 2-20, 0,5-10, 0,1-2,5 uL)</td><td>2231300008</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR 1</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>85850</td><td>"mídia de células-tronco" Número de catálogo inclui o suplemento 5x, para ser adicionado em massa com antecedência.&nbsp;</td></tr><tr><td>Suplemento N-2 (100x)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>para HIO</td></tr><tr><td>N-2 Suplemento, CTS (Sistemas de Terapia Celular)</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1370701</td><td>para ENCC. Formulação ligeiramente diferente.</td></tr><tr><td>Microscópio Nikon DS-Fi2 TS-100</td><td>Nikon</td><td>TS100</td><td></td></tr><tr><td>Mídia condicionada com cabeça Texas</td><td>Medical Center Centro de Doenças Digestivas GEMS Core, Subnúcleo Enteroid/Organoide</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (10,000 U/mL)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Sistemas de Orientação</td><td>de Células A de Ativina Humana Recombinante</td><td>GFH6-100</td><td></td></tr><tr><td>BMP-4 Humano Recombinante Fisher</td><td>Scientific</td><td>314BP010</td><td></td></tr><tr><td>Proteína EGF Humana Recombinante, CF</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>236-EG-200</td><td></td></tr><tr><td>FGF Humano Recombinante básico/FGF2 (146 aa) Proteína</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>233-FB-010</td><td></td></tr><tr><td>Humano Recombinante FGF-4</td><td>Peprotech</td><td>100-31</td><td></td></tr><tr><td>ReLeSR</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>5872</td><td>"Reagente de dissociação de células-tronco"</td></tr><tr><td>Ácido retinóico</td><td>SIGMA</td><td>R2625-50MG</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de microfuge sem Rnase, 2 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM12425</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin mídia condicionada</td><td>Texas Medical Center Centro de Doenças Digestivas GEMS Core, Subnúcleo Enteróide/Organoide</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>SB 431542, Tocris Bioscience</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-141-0</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall ST 16R Centrífuga</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standard Pontas de pipetador de orifício largo</td><td>VWR</td><td>89049-166</td><td></td></tr><tr><td>Estemolécula Chir99021 em solução</td><td>Stemgent</td><td>04-0004-02</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de pipeta de filtro estéril</td><td>VWR (1000uL, 200uL, 10uL)</td><td>76322-154, 76322-150, 89174-520</td><td></td></tr><tr><td>Vitronectina XF</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>7180</td><td>Matriz de membrana basal 3D alternativa, usada para placas ENCC.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

inervação de organoides intestinais humanos

Innervation of Human Intestinal Organoids

O ENS regula as funções essenciais do intestino delgado maduro, incluindo peristaltismo, absorção de nutrientes, transporte de fluidos e manutenção da barreira epitelial. Assim, o objetivo de inervar os HIOs é fornecer a essas construções os elementos necessários para desenvolver uma funcionalidade mais madura e de nível superior. Para esse fim, nosso laboratório estuda especificamente o desenvolvimento do ENS dentro dos HIOs, bem como os resultados funcionais em diferentes estágios.
É importa...

Inervação de organoides intestinais humanos

The complexity of intestinal cytoarchitecture and function poses significant challenges for the creation of the bioengineered small intestine. Techniques ...

Nossa pesquisa se concentra na geração de intestinos modificados por tecidos como uma solução para a síndrome do intestino curto. Nosso laboratório está focado em otimizar a integração de um sistema nervoso entérico e otimizar a organização espacial, a diversidade celular e a função. Esperamos que um dia possamos criar uma solução de mudança de vida para crianças que sofrem de insuficiência intestinal, criando intestinos de bioengenharia.A inervação de organoides intestinais humanos requer a imitação do desenvolvimento intestinal humano, e isso pode ser um desafio. O desenvolvimento do sistema nervoso entérico requer sinalização bioquímica e forças biomecânicas. Os estudos futuros do nosso laboratório estão focados na otimização do desenvolvimento do sistema nervoso entérico em organoides intestinais humanos.Estamos estudando a organização espacial, bem como a diversidade celular, e recentemente usamos uma nova técnica de imagem 3D desenvolvida pelo Dr. Herath, que pode caracterizar e quantificar de forma robusta o ENS em nossos organoides intestinais. Isso nos ajudará a refinar nosso modelo e recapitular o desenvolvimento e a função intestinal humana. Primeiro, pegue a placa de células da crista neural entérica cultivadas do dia 15 a 21 ou esferóides ENCC e remova cuidadosamente o meio do poço.Adicione um mililitro de um reagente de desprendimento de células enzimáticas quentes ao poço e incube a 37 graus Celsius por 30 minutos. Em seguida, bata na lateral da placa para facilitar a dissociação esferoide. Usando uma micropipeta P1000 com ponta larga, titular a mistura pipetando suavemente para cima e para baixo até que as células fiquem homogêneas.Transfira a suspensão ENCC para um tubo cônico de 15 mililitros. Lave o poço com um mililitro de meio celular da crista neural quente para coletar as células restantes e, em seguida, adicione-o ao tubo cônico. Centrifugar agora a suspensão celular a 300 g durante um minuto.Em seguida, aspirar o sobrenadante com uma ponta de pipeta estéril. Depois, usando uma ponta de pipeta de boca larga, ressuspenda o pellet celular em um mililitro de meio celular da crista neural quente. Colete os esferóides do intestino médio cultivados de todos os poços de uma placa organoide intestinal humana usando uma ponta de pipeta de boca larga e transfira-os para um tubo cônico de 15 mililitros.Adicione o volume calculado de suspensão ENCC no tubo cônico contendo os esferóides do intestino médio. Usando uma ponta de pipeta de boca larga, trite suavemente a mistura para misturar uniformemente os esferóides e ENCCs. Centrifugar a suspensão de células combinadas a 300 g durante um minuto.Aspire cuidadosamente o sobrenadante usando uma ponta de pipeta estéril. Em seguida, ressuspenda o pellet celular resultante em uma matriz de membrana basal reduzida por fator de crescimento livre de fenol frio. Em seguida, pipete a gota de 30 microlitros dos esferóides do intestino médio ressuspenso e ENCCs na matriz da membrana basal transparente para o centro de cada poço seco.Depois que todas as gotículas estiverem plaqueadas, cubra a placa, inverta-a e coloque-a em uma incubadora a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono por 30 minutos. No dia zero, uma vez que a matriz transparente da membrana basal tenha polimerizado, cubra cada gota com 500 microlitros de meio HIO quente do dia zero a três. No terceiro dia, aspire cuidadosamente o dia zero a três meios HIO do lado de cada poço sem perturbar a gota transparente da matriz da membrana basal.Substitua-o por 500 microlitros de mídia HIO quente do terceiro a 14 dias e retorne a placa à incubadora. No dia 14, examine cada poço ao microscópio para avaliar o número de estruturas HIO+ENS em desenvolvimento em cada gotícula de matriz de membrana basal 3D transparente. Adicione 30 microlitros de matriz de membrana basal transparente aos tubos de microcentrífuga de dois mililitros e mantenha-os no gelo.Sob uma capela de fluxo laminar, use uma pinça fina para remover cuidadosamente a gotícula transparente da matriz da membrana basal 3D contendo o HIO+ENS suspenso. Separe suavemente as estruturas individuais HIO+ENS usando a pinça. Usando uma pinça fina ou uma ponta de pipeta de boca larga, coloque cada estrutura HIO+ENS isolada nos tubos de microcentrífuga contendo 30 microlitros de matriz de membrana basal transparente.Em seguida, pipete uma gota de 30 microlitros do HIO + ENS ressuspenso em uma matriz de membrana basal transparente no centro de cada poço seco. Depois que as gotículas estiverem polimerizadas, adicione 500 microlitros de meio quente e fresco do terceiro dia a 14 HIO + ENS a cada poço e incube a placa durante a noite. No dia 15, aspire cuidadosamente o meio do dia três a 14 do lado de cada poço sem perturbar a gota polimerizada.Substitua a mídia por 500 microlitros de mídia HIO+ENS de dia quente 15 a 28. A cocultura HIO-ENS apresentou crescimento significativo com o desenvolvimento de estruturas mesenquimais, formando projeções finas e nebulosas, criando uma borda semelhante a halo ao redor das involuções epiteliais no dia 30. Os ENCCs migraram para os HIOs, integraram-se ao mesênquima e sobreviveram in vitro, como mostrado pela fluorescência de GFP dentro dos HIOs, confirmando sinais adequados de sobrevivência e diferenciação do mesênquima.As coculturas HIO+ENS transplantadas expressaram marcadores neuronais, incluindo HuCD, e marcadores gliais, como S100 beta após o crescimento in vivo, confirmando a diferenciação em neurônios e glia.

innervation-of-human-intestinal-organoids

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Este vídeo demonstra o método de criação de organoides nervosos motores, primeiro cultivando células-tronco pluripotentes induzidas por humanos em um meio especial para formar esferoides, depois diferenciando-as em neurônios motores usando inibidores específicos e, finalmente, cultivando-as em um chip microfluídico para estender axônios e formar organoides nervosos motores.

Desenvolvimento de organoides nervosos motores derivados de iPSC humanos usando um chip microfluídico

Este protocolo permite a diferenciação de células pluripotentes humanas em organoides intestinais. O protocolo mimetiza o desenvolvimento humano normal, diferenciando as células em uma população de endoderme definitivo, endoderme do intestino posterior e, em seguida, epitélio intestinal. Isso torna o protocolo adequado para estudar tanto o desenvolvimento intestinal quanto aplicações de modelagem de doenças.

Geração de organoides intestinais derivados de hiPSC para aplicações de modelagem de doenças e desenvolvimento

Aqui apresentamos dois protocolos que permitem a modelagem de interações apical-específicas intestinais. Monocamadas intestinais derivadas de organoides e culturas de Interface Ar-Líquido (ALI) facilitam a geração de epitélio bem diferenciadas acessíveis tanto de lados luminosos quanto basolaterais, enquanto as organoides intestinais invertidas pela polaridade expõem seu lado apical e são favoráveis a ensaios de alto rendimento.

Métodos culturais para estudar interações específicas apical usando modelos organoides intestinais

Aqui, são descritos métodos detalhados para gerar, manter e caracterizar organoides do intestino delgado e do cólon derivados de células-tronco pluripotentes humanas. Esses métodos são projetados para melhorar a reprodutibilidade, expandir a escalabilidade e diminuir o tempo de trabalho necessário para o revestimento e passagem de organoides.

Geração, manutenção e caracterização de organoides intestinais e colônicos derivados de células-tronco pluripotentes humanas

Este protocolo oferece instruções detalhadas para estabelecer organoides do intestino delgado murine, isolar células linfoides tipo 1 da lamina propria do intestino delgado murina e estabelecer coculturas tridimensionais (3D) entre ambos os tipos de células para estudar interações bidirecionais entre células epiteliais intestinais e células linfoides inatas tipo 1.

Co-Cultura de Organoides Epiteliais do Intestino Delgado Murine com Células Linfoides Inatas

Organoides intestinais derivados da biópsia e tecnologias de órgãos em chips são combinados em uma plataforma microfisiológica para recapitular a funcionalidade intestinal específica da região.

Combinando organoides humanos e tecnologia organ-on-a-chip para modelar funcionalidade específica da região intestinal

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar organoides intestinais de ratos e usá-los em várias aplicações a jusante. Os ratos são frequentemente um modelo pré-clínico preferido, e o robusto sistema organoide intestinal preenche a necessidade de um sistema in vitro para acompanhar os estudos in vivo .

Geração e Manipulação de Organoides Intestinais em Rato

O protocolo combina a tecnologia organoide intestinal humana com análise transcriptômica de célula única para fornecer informações significativas sobre a biologia intestinal anteriormente inexplorada.

Usando organoides intestinais humanos para entender o epitélio do intestino delgado no nível transcricional de uma única célula

Este estudo descreve um protocolo para gerar monocamadas 2D de organoides suínos derivados dos intestinos delgado e grosso. O crescimento dessas monocamadas é marcado pelo aumento dos valores de TEER, indicando integridade epitelial robusta. Além disso, essas monocamadas exibem respostas secretoras fisiológicas em experimentos de câmara de Ussing após a aplicação de forscolina.

Organoides intestinais suínos bidimensionais refletindo as propriedades fisiológicas do intestino nativo

A modelagem do desenvolvimento do cérebro humano foi prejudicada devido à complexidade sem precedentes do tecido epitelial neural. Aqui, é descrito um método para a geração robusta de organoides cerebrais para delinear eventos iniciais do desenvolvimento do cérebro humano e modelar a microcefalia in vitro.

Geração de iPSC-derivado do cérebro Organóides Humanos para modelar alterações precoces do desenvolvimento neurológico

Aprenda a gerar organoides intestinais humanos inervados para engenharia de tecidos. Este método integra o sistema nervoso entérico usando sinalização bioquímica e forças biomecânicas, melhorando a funcionalidade e organização celular.

Inervação de organoides intestinais humanos

Explorar mais vídeos