Conteúdo de flavonóides durante o crescimento e desenvolvimento floral de Calendula officinalis L.

Nosso estudo utiliza um método colorimétrico acessível e confiável para quantificar o flavonoide total, facilitando a análise de dados em laboratórios de fitoquímica e apoiando a pesquisa de compostos com propriedades terapêuticas.

O teor de flavonóides na calêndula é estudado durante o desenvolvimento floral para identificar a época ideal de colheita e maximizar seu potencial medicinal e comercial.

Nosso protocolo é uma microtécnica sensível e eficiente que permite a quantificação de flavonóides usando pequenas quantidades de amostra, otimizando o uso de solventes e a análise com material vegetal é limitada.

[Instrutor] Para começar, seque o material vegetal em um forno de ar forçado a 40 graus Celsius por 48 horas. Depois de seco, retire-o do forno, transfira o material seco para envelopes de papel e guarde-os no escuro em temperatura ambiente. Congele o material vegetal usando nitrogênio líquido para se preparar para a moagem. Em seguida, triture o material congelado em uma argamassa de porcelana até atingir uma textura uniforme. Prepare as amostras pesando 25 miligramas do material pulverizado de cada amostra. Adicione 500 microlitros de metanol a 80% ao material pesado. Para extrair flavonóides, incube a mistura a 70 graus Celsius por uma hora. Após incubação, centrifugar a mistura a 731 g durante 13 minutos. Agora, prepare alíquotas pegando 150 microlitros do extrato obtido e adicionando 37 microlitros de metanol a 80%. Pegue 50 microlitros do extrato e adicione 100 microlitros de um acetato de potássio molar e 100 microlitros de cloreto de alumínio a 10%. Complete a solução elevando o volume total da mistura para cinco mililitros usando água destilada. Defina o comprimento de onda de absorbância de um espectrofotômetro para 415 nanômetros e meça a absorbância da solução. Gere a curva de calibração preparando soluções de quercetina variando de 50, 100, 175 e 350 miligramas por mililitro. Para preparar amostras de calibração, pipete 500 microlitros da solução de quercetina a partir do último ponto da curva de calibração e adicione 100 microlitros de cloreto de alumínio a 10% e 100 microlitros de um acetato de potássio molar à solução. Em seguida, adicione 1,5 mililitros de metanol a 80% e 2,8 mililitros de água destilada. Deixe as soluções de calibração repousarem durante 40 minutos à temperatura ambiente. Defina o comprimento de onda de absorbância do espectrofotômetro para 415 nanômetros e meça a absorbância das amostras de calibração para construir a curva de calibração. Finalmente, calcule a concentração de flavonóides e o teor de flavonóides por grama de material seco. Esta tabela resume como a concentração de flavonóides e a produção de flavonóides por planta variam desde a formação inicial de botões até a floração completa e o desenvolvimento de frutos em cabeças de flores de calêndula. Níveis mais elevados de concentração de flavonóides totais foram observados entre os estágios oito e 11, correspondendo a gemas com sépalas separadas a cabeças de flores totalmente abertas. Em estágios iniciais, como botões com sépalas unidas, e em estágios posteriores, como cabeças de flores senescentes, as concentrações de flavonóides foram 22% a 27% menores em comparação com cabeças de flores totalmente abertas. Esta figura mostra a medição da concentração total de flavonóides na matéria seca de cabeças de flores de calêndula, flores liguladas e flores tubulares em todos os estágios de desenvolvimento floral. Os resultados sugerem que entender a variação da concentração de flavonóides entre diferentes estruturas e estágios florais é útil para determinar o momento ideal de colheita para maximizar o teor de flavonóides em cabeças de flores de calêndula.