Name: Extração e Limpeza de Tecidos Preparação de Amostras de Cérebro-Medula Espinhal de Camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Aprenda a extrair e limpar amostras intactas de cérebro e medula espinhal de camundongos preservando sinais fluorescentes. Este protocolo acelera a análise e melhora a qualidade de imagem em estudos de neurociência.

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<ol><li>Ueda, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+applications+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its applications in neuroscience.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (2), 61-79 (2020).</li>
<li>Tainaka, K., Kuno, A., Kubota, S. I., Murakami, T., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+principles+in+tissue+clearing+and+staining+protocols+for+whole-body+cell+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical principles in tissue clearing and staining protocols for whole-body cell profiling.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 32, 713-741 (2016).</li>
<li>Susaki, E. A., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+and+whole-organ+clearing+and+imaging+techniques+with+single-cell+resolution%3A+Toward+organism-level+systems+biology+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Whole-body and whole-organ clearing and imaging techniques with single-cell resolution: Toward organism-level systems biology in mammals.</a> Cell Chem Biol. 23 (1), 137-157 (2016).</li>
<li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+nociceptor+neurons+in+the+spleen+promotes+germinal+center+responses+and+humoral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Innervation of nociceptor neurons in the spleen promotes germinal center responses and humoral immunity.</a> Cell. 187 (12), 2935-2951.e19 (2024).</li>
<li>Liu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+innervations+modulate+the+lung+innate+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic innervations modulate the lung innate immune responses.</a> Sci Adv. 6 (20), eaay1497(2020).</li>
<li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDISCO%3A+Advanced+solvent-based+clearing+method+for+imaging+whole+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">FDISCO: Advanced solvent-based clearing method for imaging whole organs.</a> Sci Adv. 5 (1), eaau8355(2019).</li>
<li>Bagnoli, S., Terzibasi Tozzini, E., Cellerino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-Brain+clearing+and+immunofluorescence+in+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Whole-Brain clearing and immunofluorescence in Nothobranchius furzeri.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2023 (9), 698-704 (2023).</li>
<li>Lu, T., Shinozaki, M., Nagoshi, N., Nakamura, M., Okano, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+imaging+of+supraspinal+inputs+to+the+thoracic+and+lumbar+spinal+cord+mapped+by+retrograde+tracing+and+light-sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">3D imaging of supraspinal inputs to the thoracic and lumbar spinal cord mapped by retrograde tracing and light-sheet microscopy.</a> J Neurochem. 162 (4), 352-370 (2022).</li>
<li>Saritas, T., Puelles, V. G., Su, X. T., Ellison, D. H., Kramann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+clearing+and+imaging+of+immunolabeled+kidney+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optical clearing and imaging of immunolabeled kidney tissue.</a> J Vis Exp. (149), e60002(2019).</li>
<li>Song, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+mapping+of+single+neurons+by+calibrated+3D+reconstruction+of+brain+slices+reveals+topographic+projection+in+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Precise mapping of single neurons by calibrated 3D reconstruction of brain slices reveals topographic projection in mouse visual cortex.</a> Cell Rep. 31 (8), 107682(2020).</li>
<li>Fournel, R., Veruki, M. L., Hartveit, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+reconstruction+and+quantitative+morphometric+analysis+of+bipolar+cells+in+live+rat+retinal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Digital reconstruction and quantitative morphometric analysis of bipolar cells in live rat retinal slices.</a> J Comp Neurol. 530 (10), 1700-1728 (2022).</li>
<li>Lin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-type-specific+and+projection-specific+brain-wide+reconstruction+of+single+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Cell-type-specific and projection-specific brain-wide reconstruction of single neurons.</a> Nat Methods. 15 (12), 1033-1036 (2018).</li>
<li>Peng, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+histological+assessment+of+prostate+specimens+in+the+three-dimensional+space+by+hydrophilic+tissue+clearing+and+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Rapid histological assessment of prostate specimens in the three-dimensional space by hydrophilic tissue clearing and confocal microscopy.</a> J Histochem Cytochem. 70 (8), 597-608 (2022).</li>
<li>Singhal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+histomorphometric+changes+in+tissue+architecture+in+relation+to+alteration+in+fixation+protocol+-+An+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Diagn+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of histomorphometric changes in tissue architecture in relation to alteration in fixation protocol - An in vitro study.</a> J Clin Diagn Res. 10 (8), ZC28-ZC32 (2016).</li>
<li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+landscape+for+tissue+clearing+based+on+hydrophilic+reagents%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Chemical landscape for tissue clearing based on hydrophilic reagents.</a> Cell Rep. 24 (8), 2196-2210.e9 (2018).</li>
<li>Lee, S. H., Son, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+wave%2C+late-stage+neuroinflammation+in+cleared+brains+of+aged+5xFAD+Alzheimer%27s+mice+detected+by+macrolaser+light+sheet+microscopy+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Second wave, late-stage neuroinflammation in cleared brains of aged 5xFAD Alzheimer's mice detected by macrolaser light sheet microscopy imaging.</a> Int J Mol Sci. 24 (23), 242317058(2023).</li>
<li>Zhao, J., Lai, H. M., Qi, Y., He, D., Sun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+tissue+clearing+and+the+path+forward+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Current status of tissue clearing and the path forward in neuroscience.</a> ACS Chem Neurosci. 12 (1), 5-29 (2021).</li>
<li>Ou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Achieving+optical+transparency+in+live+animals+with+absorbing+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Achieving optical transparency in live animals with absorbing molecules.</a> Science. 385 (6713), eadm6869(2024).</li>
<li>Ou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Achieving+optical+transparency+in+live+animals+with+absorbing+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Achieving optical transparency in live animals with absorbing molecules.</a> Science. 385, eadm6869(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Seringa de 1 ml</td><td>Shandong Weigao Group Medical Polymer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>502 cola</td><td>Deli Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD seringa de insulina</td><td>Becton,Dickinson e&nbsp; Empresa</td><td>328421</td><td></td></tr><tr><td>Curvatura pinça de dissecação dentada</td><td>Jinzhong</td><td>JD1050</td><td></td></tr><tr><td>Braçadeira de aço circular</td><td>Weili</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura fina</td><td>Jinzhong</td><td>y00030</td><td></td></tr><tr><td>Pinça hemostática dobrada com dente</td><td>Jinzhong</td><td>J31020</td><td></td></tr><tr><td>Pinça hemostática reta com dente</td><td>Jinzhong</td><td>J31010</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de infusão 0,7 mm</td><td>Gentilmente Grupo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Linha de escala de caixa leve</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH210901</td><td></td></tr><tr><td>Microdissecção pinça reta</td><td>Jinzhong</td><td>WA3020</td><td></td></tr><tr><td>NobeliumSoftware</td><td>Nuohai Life Science</td><td>Software</td><td></td>de digitalização</tr><tr><td>paraformaldeído</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>Bombas peristálticas</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH1000</td><td></td></tr><tr><td>Cabeça de bombas peristálticas</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH-15</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>Heparina sódica</td><td>Shanghai Pharma</td><td>H31022051</td><td></td></tr><tr><td>STOCK Tg (Thy1-EGFP) Camundongos da cepa MJrs/J</td> Jackson <td>Laboratory</td><td>007788</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de dissecação com dentes retos</td><td>Jinzhong</td><td>JD1060</td><td></td></tr><tr><td>Kit de limpeza de tecidos (histrófilo)</td> <td>Nuohai Life Science</td><td>NH-CR-210701</td><td></td></tr><tr><td>Tratamento de cultura de tecidos 100 mm x 20 mm</td><td>NEST</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>tesoura de tecido</td><td>Jinzhong</td><td>J21040</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>Venus tesoura</td><td>Jinzhong</td><td>YBC010</td><td></td></tr></tbody></table>

extração e limpeza de tecidos preparação de amostras de cérebro-medula espinhal de camundongos

Extraction and Tissue Clearing Preparation of Mouse Brain-Spinal Cord Samples

Este protocolo isola com sucesso todo o cérebro conectado à medula espinhal em camundongos machos da linhagem STOCK Tg (Thy1-EGFP) MJrs/J. Ele também torna as amostras transparentes, garantindo que os sinais fluorescentes sejam totalmente preservados e capturados, fornecendo imagens claras e detalhadas que mantêm a integridade da fluorescência original.
A Figura 1 mostra uma medula cérebro-espinhal ...

Extração e Limpeza de Tecidos Preparação de Amostras de Cérebro-Medula Espinhal de Camundongos

Neuroscience research focused on the central nervous system necessitates a thorough understanding of various factors, including cell distribution, ...

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Neuroscience

Neurociência

Nós descrevemos um protocolo para perfusão intracardíaca de ratos, remoção e corte do cérebro, bem como coloração por imunoperoxidase, a incorporação de resina, seccionamento e ultrafina das seções do cérebro. Após a conclusão desses procedimentos, o material imunocoradas está pronto para exame em microscopia eletrônica de transmissão.

Preparação do Tecido Cerebral de Rato imunomicroscopia

O perfilamento da expressão de RNA em regiões discretas do cérebro de camundongos exige uma estratégia precisa e repetível de coleta de tecidos. Aqui é descrito um protocolo que utiliza o seccionamento coronal do cérebro e a microdissecação assistida por perfurador de tecidos. O rendimento e a qualidade do RNA total obtido a partir das amostras resultantes confirmam a utilidade do método descrito.

Laser não-Abordagem Microscopia de captura para o Microdissecção de regiões cerebrais discretas Mouse para isolamento de RNA total e Seqüenciamento Next-Generation Downstream e perfil de expressão gênica

Um método para preparar traducionalmente ativa, synaptoneurosomes intacta (SNs) de córtex cerebral de rato é descrito. O método utiliza um gradiente de densidade descontínua Percoll-sacarose permitindo a preparação rápida de ativos SNs.

Preparação de Synaptoneurosomes de rato Cortex usando um gradiente de densidade Percoll descontínuo Sacarose-

Microscopia Multiphoton de órgãos inteiros de rato é possível através opticamente limpando o órgão antes de imagem, mas nem todos os protocolos de preservar o sinal de fluorescência de proteínas fluorescentes. Usando um método de compensação óptica com base de etanol a desidratação e álcool benzílico: benzil benzoato de compensação, que mostram imagens de alta resolução multifotônica de cérebro de rato inteiro expressando YFP.

Microscopia multifotônica do cérebro do rato Cleared Expressando YFP

Este vídeo demonstra um protocolo passo a passo detalhado para preparar seções congeladas de tecido cerebral de camundongo para análises a jusante.

Processamento de um cérebro de camundongo para análise a jusante

Fonte: Pekarek, B. T., et. al., Imagem e quantificação de dendritos neuronais intactos via limpeza de tecido CLARITY. J. Vis. Exp. (2021)Neste vídeo, demonstramos a preparação, imagem e análise de um cérebro de camundongo limpo para examinar árvores dendríticas, morfologia da coluna vertebral e distribuição neuronal usando microscopia confocal e técnicas de reconstrução 3D.

Imagem de microscopia confocal de árvores dendríticas intactas e morfologia da coluna vertebral em um cérebro de camundongo limpo

Neste artigo vamos descrever o procedimento experimental completo para reconstruir, com alta resolução, a anatomia do cérebro multa de cérebros fluorescente etiquetado do mouse. O protocolo descrito inclui preparação de amostras e limpeza, espécime de montagem para a imagem latente, os dados de pós-processamento e visualização multi-escala.

Micron escala Resolução óptica Tomografia de todo cérebro do rato com confocal Luz Folha de Microscopia

Aqui, apresentamos um protocolo para extrusão hidráulica da medula espinhal, bem como identificação e isolamento de gânglios da raiz dorsal (DRGs) específicos no mesmo roedor. Comparado aos métodos padrão de isolamento da medula espinhal, esse método é significativamente mais rápido e reduz o risco de danos aos tecidos.

Extrusão hidráulico da medula espinhal e Isolamento de gânglios das raízes dorsais em roedores

Este artigo apresenta dois protocolos otimizados para examinar células imunes residentes e derivadas periféricas dentro do sistema nervoso central, incluindo cérebro, medula espinhal e meninges. Cada um desses protocolos ajuda a determinar a função e a composição das células que ocupam esses compartimentos em condições de estado estacionário e inflamatório.

Isolando Tecidos do Sistema Nervoso Central e Meninges Associadas para Análise a Jusante de Células Imunes

A morfologia dendrítica neuronal muitas vezes está por trás da função. De fato, muitos processos de doenças que afetam o desenvolvimento de neurônios se manifestam com um fenótipo morfológico. Este protocolo descreve um método simples e poderoso para analisar arbores dendríticas intactas e suas espinhas associadas.

Imagem e quantificação de dendritos neuronais intactos via clareza de tecido

Este protocolo descreve uma abordagem eficiente e reprodutível para estudos histológicos cerebrais do camundongo, incluindo perfusão, seção cerebral, imunostaining flutuante livre, montagem de tecido e imagem.

Imunostaining flutuante livre de cérebros de rato

Aprenda a extrair e limpar amostras intactas de cérebro e medula espinhal de camundongos preservando sinais fluorescentes. Este protocolo acelera a análise e melhora a qualidade de imagem em estudos de neurociência.

Extração e Limpeza de Tecidos Preparação de Amostras de Cérebro-Medula Espinhal de Camundongos

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