Avaliação das propriedades antioxidantes e anti-helmínticas de extratos de Tithonia diversifolia contra ovos de nematóides gastrointestinais usando ensaios in vitro

Minha pesquisa foca em parasitologia, atualmente estudando componentes naturais de plantas para controlar parasitas internos em pequenos ruminantes. Queremos integrar o conhecimento tradicional e métodos alternativos para controlar a população mundial de pequenos ruminantes. Hoje em dia, estamos usando cada vez mais tecnologias como modelagem preditiva, contadores automáticos e ferramentas moleculares para detectar alertas específicos.

Além disso, vários institutos ao redor do mundo estão desenvolvendo protótipos de vacinas contra contorções de Haemonchus. Esse é um grande avanço. Outros estão usando motores orgânicos para reduzir a dependência de animais de laboratório, o que é ético e cientificamente valioso.

No geral, há um esforço global forte e coordenado para avançar ferramentas diagnósticas e pesquisas, visando desenvolver estratégias inovadoras e sustentáveis para o controle de parasitas em todo o mundo e prevenir a resistência a medicamentos. Para começar, misture 30 gramas de cada amostra fecal com 50 mililitros de solução salina saturada com densidade de 1,2 gramas por mililitro para preparar ensaios de coprologia. Homogeneize três gramas da amostra fecal em 50 mililitros de solução saturada de cloreto de sódio e filtre a mistura através de uma pano de queijo.

Examine a lâmina ao microscópio com ampliação 10x e conte os ovos do tipo strongyle. Calcule ovos por grama usando a fórmula dada. Filtre as fezes duas vezes usando gaze estéril.

Depois, filtre a suspensão resultante e transfira-a para uma peneira. Lave o material retido na peneira com água destilada e recolha a suspensão lavada em tubos de 15 mililitros. Coloque as amostras em uma centrífuga de mesa com um rotor de balde oscilante e gire a aproximadamente 4.800 G por cinco minutos em temperatura ambiente.

Ressuspenda os ovos e o PBS, e ajuste a concentração para 100 ovos por mililitro para preparar o ensaio. Prepare o controle positivo dissolvendo Fenbendazol em PBS para obter uma solução de estoque de 1.000 microgramas por mililitro. Após adicionar a mistura um a um de extrato e suspensão de ovo, adicione aproximadamente 100 ovos por mililitro a cada poço de uma placa de 48 poços.

O principal desafio dessa técnica está na variabilidade da resposta de eclosão dos ovos. Mesmo seguindo todos os passos do protocolo, a eclosão dos ovos pode ocorrer entre 48 e 72 horas ou, em alguns casos, nem ocorrer. O efeito inibitório do extrato de Tithonia diversifolia na eclosão dos ovos mostrou um padrão dependente da dose refletido no valor EC50 de 521,6 microgramas por mililitro.

Esse resultado indica que concentrações moderadas do extrato bruto são necessárias para atingir 50% de inibição, sugerindo a presença de compostos bioativos com potencial antihelmíntico. Em doses baixas de 150 a 300 microgramas por mililitro, a inibição era mínima e a variabilidade permanecia baixa, consistente com exposição insuficiente para interferir na embriogênese ou na emergência larval. A variabilidade atingiu o pico na dose intermediária de 1.200 microgramas por mililitro, consistente com a zona de transição não linear de uma curva de resposta à dose, onde pequenas diferenças biológicas ou experimentais podem causar grandes mudanças de resultado.

Isso é esperado com extratos de plantas brutas contendo múltiplos compostos ativos. No geral, os resultados confirmam a atividade anti-eclosão de Tithonia diversifolia com eficácia crescente em doses mais altas. Refinar ou fracionar o extrato pode aumentar a potência, e estudos fitoquímicos e in vivo adicionais são recomendados para avaliar sua utilidade em programas de controle de parasitas.

Nossos achados mostram atividade in vitro, confirmando o potencial antiparasitário. Esses representam uma descoberta significativa e a potencial aplicação clínica para melhorar a saúde animal. Além disso, o baixo custo e a abordagem ética desse ensaio validam o uso do conhecimento tradicional em relação a estudos futuros.

O resultado do nosso estudo forneceu insights baseados em evidências sobre estratégias anti-helmínticas, componentes ecológicos validados para apoiar estratégias de controle e redução da dependência de drogas.