Name: Método de alto rendimento para observação de fenótipos de motilidade em Pseudomonas aeruginosa (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Aprenda um método de alto rendimento para analisar motilidade em Pseudomonas aeruginosa usando ensaios de swarming e twitching. Esta técnica permite identificar fatores genéticos envolvidos na formação de biofilmes e patogenicidade bacteriana.

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<ol><li>Burrows, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+twitching+motility%3A+type+IV+pili+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa twitching motility: type IV pili in action.</a> Annu Rev Microbiol. 66, 493-520 (2012).</li>
<li>Khan, F., Pham, D. T. N., Oloketuyi, S. F., Kim, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+and+controlling+the+motility+properties+of+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Regulation and controlling the motility properties of Pseudomonas aeruginosa.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 104 (1), 33-49 (2020).</li>
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<li>Arora, S. K., Neely, A. N., Blair, B., Lory, S., Ramphal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+motility+and+flagellin+glycosylation+in+the+pathogenesis+of+Pseudomonas+aeruginosa+burn+wound+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Role of motility and flagellin glycosylation in the pathogenesis of Pseudomonas aeruginosa burn wound infections.</a> Infect Immun. 73 (7), 4395-4398 (2005).</li>
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<li>Toutain, C. M., Zegans, M. E., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+two+flagellar+stators+and+their+role+in+the+motility+of+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Evidence for two flagellar stators and their role in the motility of Pseudomonas aeruginosa.</a> J Bacteriol. 187 (2), 771-777 (2005).</li>
<li>Köhler, T., Curty, L. K., Barja, F., van Delden, C., Pechère, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swarming+of+Pseudomonas+aeruginosa+is+dependent+on+cell-to-cell+signaling+and+requires+flagella+and+requires+flagella+and+pili%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Swarming of Pseudomonas aeruginosa is dependent on cell-to-cell signaling and requires flagella and requires flagella and pili.</a> J Bacteriol. 182 (21), 5990-5996 (2000).</li>
<li>Tremblay, J., Richardson, A. P., Lépine, F., Déziel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-produced+extracellular+stimuli+modulate+the+Pseudomonas+aeruginosa+swarming+motility+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Self-produced extracellular stimuli modulate the Pseudomonas aeruginosa swarming motility behaviour.</a> Environ Microbiol. 9 (10), 2622-2630 (2007).</li>
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<li>Hertzberg, R. P., Pope, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening%3A+new+technology+for+the+21st+century%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening: new technology for the 21st century.</a> Curr Opin Chem Biol. 4 (4), 445-451 (2000).</li>
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<li>Rasmussen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+screening+assay+for+inhibitors+of+bacterial+motility+identifies+a+novel+inhibitor+of+the+Na%2B-driven+flagellar+motor+and+virulence+gene+expression+in+Vibrio+cholerae%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">A high-throughput screening assay for inhibitors of bacterial motility identifies a novel inhibitor of the Na+-driven flagellar motor and virulence gene expression in Vibrio cholerae.</a> Antimicrob Agents Chemother. 55 (9), 4134-4143 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>96 placas de poço &nbsp; &nbsp;</td><td>Corning&nbsp; &nbsp;</td><td>3701&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Agar&nbsp;</td><td>Fisher Scientific & nbsp; &nbsp;</td><td>BP1423-2&nbsp;</td><td>Concentração final de 0,5% para motilidade em enxame ou 1% para motilidade de espasmos, respectivamente.</td></tr><tr><td>Ácidos Casamino &nbsp; &nbsp;</td><td>Fisher Scientific & nbsp; &nbsp;</td><td>223050&nbsp;</td><td>Prepare um estoque de 20% em água. O filtro esteriliza com 0,22 e mu; m filtrar e armazenar a 4 °C. Concentração final 0,5% em meio mínimo M9. &nbsp;</td></tr><tr><td>Violeta cristalino&nbsp;</td><td>Bio Basic&nbsp; &nbsp;</td><td>CB0331</td><td>Prepare uma solução a 1% em água.</td></tr><tr><td>D-Glicose&nbsp; &nbsp;</td><td>Bio Basic&nbsp; &nbsp;</td><td>GB0219&nbsp;</td><td>Prepare um estoque de 20% (1,1 M) em água e esterilize por autoclav. Concentração final de 0,2% em M9 médio mínimo. &nbsp;</td></tr><tr><td>Filtropur S 0.2&nbsp;</td><td>Sarstedt&nbsp;</td><td>83.1826.001</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycina sulfato&nbsp; &nbsp;</td><td>Bio Basic&nbsp; &nbsp;</td><td>GB0217&nbsp;</td><td>Prepare um caldo de 30 mg/ml em água. O filtro esteriliza com 0,22 e mu; M filtrar e armazenar em 4 graus e graus C & ndash; Concentração final nas placas 15 & micro; g/mL.. &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Inocular Loop e Agulha&nbsp;</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>22363597</td><td></td></tr><tr><td>M9 Sais Mínimos, 5X & nbsp;</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>248510</td><td>Prepare um estoque de 1M em água e esterilize por autoclave. Concentração final de 1 mM em médio mínimo M9. &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Sulfato de Magnésio (MgSO4)&nbsp; &nbsp;</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>M63-500</td><td>&nbsp; Prepare um caldo de MgSO4 de 1 M em água. O filtro esteriliza com 0,22 e mu; Filtro M e armazene em temperatura ambiente. Concentração final &nbsp;</td></tr><tr><td>Biblioteca de Mutantes de Inserção de Transposons PA14 &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td>Liberati et al., 2006 (Veja referência 29)</td><td>59 placas de 96 poços para toda a coleção. Cada poço contém um único mutante em LB com 25% de glicerol.</td></tr><tr><td>Placa de Petri 92x16mm&nbsp;</td><td>Sarstedt&nbsp;</td><td>82.1473.001</td><td></td></tr><tr><td>PhenoBooth+&nbsp;</td><td>Instrumentos de Cantor &nbsp;</td><td>https://www.singerinstruments.com/solution/phenobooth/specification/&nbsp;</td><td>Dissolva 11,3 g do pó em 200 mL de água purificada. Autoclave em 121 & deg; C por 15 min.&nbsp;</td></tr><tr><td>Seringa de plástico 10 mL&nbsp;</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>14955459</td><td></td></tr><tr><td>Rotor+&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Instrumentos de Cantor &nbsp;</td><td>https://www.singerinstruments.com/resource/rotor-had/&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Densidades de 384 RePads de pino curto &nbsp;</td><td>Instrumentos de Cantor &nbsp; &nbsp;</td><td>REP-004&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RePads de pino curto 96 densidades &nbsp; &nbsp;</td><td>Instrumentos de Cantor &nbsp; &nbsp;</td><td>REP-002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Sódio (NaCl)&nbsp; &nbsp;</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>BP358-212&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Replicador de 96 pinos com mola</td><td>EnzyScreen&nbsp; &nbsp;</td><td>CR1000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina cirúrgica de aço inox nº 25&nbsp;</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>08-918-5F</td><td></td></tr><tr><td>Triptona & nbsp;</td><td>Oxoid&nbsp; &nbsp;</td><td>LP0042B&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Placas Uniwell</td><td>Instrumentos de Cantor &nbsp; &nbsp;</td><td>PlusPlates: PLU-003&nbsp; &nbsp;</td><td>Tamanho da placa: 54 e multiplicados; 34 e mais vezes; 38 cm - sem paredes internas, que proporcionam dimensões internas maiores.</td></tr><tr><td>Placas Uniwell</td><td>VWR</td><td>Placas de cultura de tecido em poço único: 75780-348</td><td>Mesmas dimensões dos PlusPlates.</td></tr><tr><td>Extrato de Levedura & nbsp;</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>248510&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

método de alto rendimento para observação de fenótipos de motilidade em pseudomonas aeruginosa

High-throughput Method for Observing Motility Phenotypes in Pseudomonas aeruginosa

Método de alto rendimento para observação de fenótipos de motilidade em Pseudomonas aeruginosa

Motility behaviors often play a significant role in the ability of a bacterium to exploit the resources available in its environment. This is particularly ...

high-throughput-method-for-observing-motility-phenotypes-pseudomonas

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este protocolo descreve o desenvolvimento de um dispositivo micro para investigar quimiotaxia bacteriana em gradientes de concentração estável de chemoeffectors.

Um dispositivo micro para Quantificar Quimiotaxia bacteriana em gradientes de concentração estável

Fonte: Morales-Soto, N. et. al., Preparação, Imagem e Quantificação de Ensaios de Motilidade de Superfície Bacteriana. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra um ensaio de enxame usando bactérias que expressam proteína fluorescente verde para observar a motilidade da superfície em ágar macio. A imagem de lapso de tempo captura a expansão coordenada e a formação de gavinhas, destacando a motilidade da superfície bacteriana.

Ensaio de enxame para visualização da motilidade da superfície bacteriana

Fonte: Chu, W., e Zhuang, X. Visualizando a motilidade bacteriana com base em uma reação de cor. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra um ensaio de ágar semissólido à base de corante redox para avaliar a motilidade bacteriana distinguindo visualmente cepas móveis e não móveis.

Visualização da motilidade bacteriana usando meio semissólido suplementado com corante redox

Fonte: Scheidweiler, D., et al. Combinando dispositivos fluídicos com microscopia e citometria de fluxo para estudar o transporte microbiano em meios porosos em escalas espaciais. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demonstra o uso de um dispositivo microfluídico para quantificar a motilidade bacteriana por meio de uma matriz porosa composta por pilares dispostos aleatoriamente. Bactérias marcadas com fluorescência são introduzidas no dispositivo, imagens por microscopia enquanto se movem pela...

Avaliando a Motilidade Bacteriana Usando um Dispositivo Microfluídico

A motilidade de enxameação é influenciada por fatores físicos e ambientais. Descrevemos um protocolo de duas fases e diretrizes para contornar os desafios comumente associados à preparação do ensaio de enxame e à coleta de dados. Uma técnica de imagem macroscópica é empregada para obter informações detalhadas sobre o comportamento do enxame que não são fornecidas pelas técnicas de análise atuais.

Preparação, Imaging, e quantificação de Motilidade Ensaios superfície da bactéria

Neste estudo, uma câmara de fluxo nano-microfluídico foi utilizado para visualizar e funcionalmente caracterizar a motilidade espasmos da Xylella fastidiosa, bactéria que causa a doença de Pierce em videira.

Visualização de Twitching motilidade e Caracterização do papel da<em&gt; PilG</em&gt; in<em&gt; Xylella fastidiosa</em

Este artigo descreve o ensaio de elevado débito que foi estabelecida com sucesso para o rastreio de grandes bibliotecas de moléculas pequenas para a sua potencial capacidade de manipular os níveis celulares de cíclica di-GMP em Pseudomonas aeruginosa, proporcionando uma nova ferramenta poderosa para a descoberta de drogas anti-bacteriano e os testes de compostos.

Estabelecimento de um programa de configuração de alta capacidade para a triagem de pequenas moléculas que modulam c-di-GMP Sinalização<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Muitas bactérias usam motilidade impulsionada por flagela para navegar em seu ambiente e colonizar ambientes favoráveis tanto individualmente quanto como coletivos. Demonstrado aqui é o uso de três métodos estabelecidos que exploram a motilidade como ferramenta de seleção para identificar componentes/caminhos que contribuem para a natação e a motilidade.

Investigando a Motilidade Impulsionada por Flagella em Escherichia coli aplicando três técnicas estabelecidas em uma série

Aqui, descrevemos a construção de mutantes nulos de Aeromonas em glicosyltransferases específicas ou regiões contendo glicosyltransferases, os ensaios de motilidade e a purificação de flagela realizadas para estabelecer o envolvimento e função de suas enzimas codificadas na biossíntese de um glicano, bem como o papel deste glicano em patógenos bacterianos.

Geração de Mutantes Nulos para Elucidar o Papel das Glicosyltransferases Bacterianas na Motilidade Bacteriana

Aqui, apresentamos um protocolo para detectar motilidade bacteriana baseado em uma reação de cor. As principais vantagens deste método são que é fácil de avaliar e mais preciso, e não requer equipamentos especializados.

Visualizando a motilidade bacteriana com base em uma reação de cor

Neste manuscrito, fornecemos um protocolo abrangente para avaliar a sobrevida de antibióticos para Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus, transformando plasmídeos em P. aeruginosa e S. aureus para criar cepas repórteres e visualizar variantes fenotípicas, como persistentes, por microscopia de epifluorescência de lapso de tempo.

Imagem de microscopia de epifluorescência de lapso de tempo de fenótipos heterogêneos de Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus

Aprenda um método de alto rendimento para analisar motilidade em Pseudomonas aeruginosa usando ensaios de swarming e twitching. Esta técnica permite identificar fatores genéticos envolvidos na formação de biofilmes e patogenicidade bacteriana.

Método de alto rendimento para observação de fenótipos de motilidade em Pseudomonas aeruginosa

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