Name: Análise abrangente da resposta a medicamentos usando o ensaio FLICK (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Aprenda a usar o ensaio FLICK para avaliar respostas a medicamentos anticâncer em linhagens celulares. Este método calcula taxas de crescimento e morte celular induzidas por drogas com alta precisão.

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<ol><li>Hafner, M., Niepel, M., Sorger, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+drug+sensitivity+metrics+improve+preclinical+cancer+pharmacogenomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Alternative drug sensitivity metrics improve preclinical cancer pharmacogenomics.</a> Nat Biotechnol. 35 (6), 500-502 (2017).</li>
<li>Dixon, S. J., Lee, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+tips+for+interpreting+cell+death+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Quick tips for interpreting cell death experiments.</a> Nat Cell Biol. 25 (12), 1720-1723 (2023).</li>
<li>Schwartz, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+GRADE%3A+An+Integrated+Analysis+of+Population+Growth+and+Cell+Death+Reveals+Drug-Specific+and+Cancer+Subtype-Specific+Response+Profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Drug GRADE: An Integrated Analysis of Population Growth and Cell Death Reveals Drug-Specific and Cancer Subtype-Specific Response Profiles.</a> Cell Rep. 31 (12), 107800(2020).</li>
<li>Hafner, M., Niepel, M., Chung, M., Sorger, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+rate+inhibition+metrics+correct+for+confounders+in+measuring+sensitivity+to+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Growth rate inhibition metrics correct for confounders in measuring sensitivity to cancer drugs.</a> Nat Methods. 13 (6), 1-11 (2016).</li>
<li>Galluzzi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+cell+death+recommendations+of+the+Nomenclature+Committee+on+Cell+Death+2018%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of cell death recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2018.</a> Cell Death Differ. 25 (3), 486-541 (2018).</li>
<li>Tsvetkov, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+induces+cell+death+by+targeting+lipoylated+TCA+cycle+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Copper induces cell death by targeting lipoylated TCA cycle proteins.</a> Science. 375 (6586), 1254-1261 (2022).</li>
<li>Holze, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxeiptosis%2C+a+ROS-induced+caspase-independent+apoptosis-like+cell-death+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Oxeiptosis, a ROS-induced caspase-independent apoptosis-like cell-death pathway.</a> Nat Immunol. 19 (2), 130-140 (2018).</li>
<li>Maltese, W. A., Overmeyer, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methuosis+Nonapoptotic+Cell+Death+Associated+with+Vacuolization+of+Macropinosome+and+Endosome+Compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Methuosis Nonapoptotic Cell Death Associated with Vacuolization of Macropinosome and Endosome Compartments.</a> Am J Pathol. 184 (6), 1630-1642 (2014).</li>
<li>Inde, Z., Forcina, G. C., Denton, K., Dixon, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+Heterogeneity+of+Cancer+Cell+Fractional+Killing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Kinetic Heterogeneity of Cancer Cell Fractional Killing.</a> Cell Rep. 32 (1), 107845(2020).</li>
<li>Forcina, G. C., Conlon, M., Wells, A., Cao, J. Y., Dixon, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Quantification+of+Population+Cell+Death+Kinetics+in+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Syst%22%5BJournal%5D)">Systematic Quantification of Population Cell Death Kinetics in Mammalian Cells.</a> Cell Syst. 4 (6), 1-18 (2017).</li>
<li>Gelles, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Cell+and+Population-Level+Analyses+Using+Real-Time+Kinetic+Labeling+Couples+Proliferation+and+Cell+Death+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-Cell and Population-Level Analyses Using Real-Time Kinetic Labeling Couples Proliferation and Cell Death Mechanisms.</a> Dev Cell. 51 (2), 277-291.e4 (2019).</li>
<li>Richards, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+antagonism+and+single-agent+dominance+result+from+differences+in+death+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Drug antagonism and single-agent dominance result from differences in death kinetics.</a> Nat Chem Biol. 16 (7), 791-800 (2020).</li>
<li>Richards, R., Honeywell, M. E., Lee, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLICK%3A+an+optimized+plate+reader-based+assay+to+infer+cell+death+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">FLICK: an optimized plate reader-based assay to infer cell death kinetics.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100327(2021).</li>
<li>Honeywell, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+screens+with+death+rate+analyses+reveal+mechanisms+of+drug+action%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional genomic screens with death rate analyses reveal mechanisms of drug action.</a> Nat Chem Biol. 20 (11), 1443-1452 (2024).</li>
<li>Jannoo, R., Xia, Z., Row, P. E., Kanamarlapudi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+the+Interleukin-13+Receptor+%28IL-13R%29%CE%B12+Expressing+Prostate+Cancer+by+a+Novel+Hybrid+Lytic+Peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Targeting of the Interleukin-13 Receptor (IL-13R)α2 Expressing Prostate Cancer by a Novel Hybrid Lytic Peptide.</a> Biomolecules. 13 (2), 356(2023).</li>
<li>Gelles, J. D., Chipuk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+not+add+some+SPARKL+to+your+life+%28and+death%29%21%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Oncol%22%5BJournal%5D)">Why not add some SPARKL to your life (and death)!</a> Mol Cell Oncol. 7 (1), 1685841(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Belinostat</td><td>ApexBio</td><td>A4612</td><td></td></tr><tr><td>Camptotecina</td><td>ApexBio</td><td>A2877</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga cônico, 15mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-269</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>10017CV</td><td>Para semear e drogar células</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT-25950CQC</td><td>Para semear e drogar células</td></tr><tr><td>Microplaca Fisherbrand 96-Well, Tratada com Cultura de Células,</td> Fundo em U <td>Fisher Scientific</td><td>FB012932</td><td>Para semear e drogar células (placa de pino)</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One&nbsp; CELLSTAR &mu; Microplaca de fundo plano, tratada com cultura de células, transparente de 96 poços</td><td>Greiner</td><td>655090</td><td>Para semear e drogar células</td></tr><tr><td>IncuCyte S3</td><td>Essen Biosciences</td><td></td><td>Qualquer microscópio de fase funcionará</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td><td>MATLAB versão R2023b, é necessária uma licença</td></tr><tr><td>Leitor de fluorescência de microplacas</td><td>Tecan</td><td>Spark</td><td>Para medir a fluorescência de células mortas</td></tr><tr><td>Palbociclib</td><td>ApexBio</td><td>A8316</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CM</td><td>Qualquer PBS funciona</td></tr><tr><td>Leitor de microplacas multimodo Spark</td><td>Tecan</td><td>https://www.tecan.com/spark-overview</td><td>software SparkControl versão 2.2</td></tr><tr><td>Reservatório estéril, 25 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-681-508</td><td>Para semear e drogar células</td></tr><tr><td>Coloração de ácido nucleico verde Sytox</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S7020</td><td>Coloração de DNA para medição de fluorescência de células mortas</td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J66624-AP</td><td>Para permeabilizar células</td></tr><tr><td>U2OS</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td>Um exemplo de linha celular usada neste protocolo</td></tr><tr><td>Z-VAD-FMK</td><td>ApexBio</td><td>A1902</td><td></td></tr></tbody></table>

análise abrangente da resposta a medicamentos usando o ensaio flick

Comprehensive Analysis of Drug Response using the FLICK Assay

Usando este protocolo, exploramos a sensibilidade das células U2OS ao inibidor de HDAC Belinostat. Esses experimentos foram realizados usando 2 μM de SYTOX Green para marcar células mortas (Figura 1A). As leituras cinéticas foram feitas usando um leitor de placa fluorescente em uma configuração de ganho de 130 (Figura 1B). As células foram lisadas em solução de Triton-X a 1,5% em PBS por 2 h no final do ensaio (Figura 1C-D</...

Análise abrangente da resposta a medicamentos usando o ensaio FLICK

For understanding drug efficacy, a critical need is to characterize the extent of drug-induced cell death. Efforts to quantify the level of drug-induced ...

comprehensive-analysis-of-drug-response-using-the-flick-assay

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este vídeo fornece um protocolo detalhado para o estudo do perfil farmacológico dos direitos humanos TRPA1 canais usando FlexStation 3. O protocolo abrange detalhes de preparação das células, carregando corante e operação do leitor de microplacas, FlexStation 3.

Baseados em células de Ensaio de cálcio para Médio a High Throughput Screening de Funções TRP usando FlexStation Canal 3

Descreve-se o processo e análise de dados de um sistema de triagem química para sinalização glicocorticóide hormônio do estresse utilizando larvas do peixe: o Responsive In vivo Zebrafish luciferase atividade (grizly) ensaio de glicocorticóides. O ensaio com sensibilidade e especificamente detecta efeitos na sinalização glicocorticóide por compostos que requerem metabolização ou afectam a produção de glucocorticóide endógeno.

A Triagem procedimento químico para Glucocorticoid Sinalização com um Sistema Reporter Zebrafish Zergling luciferase

Descrevemos um ensaio de sensibilidade a medicamentos de alto rendimento para células primárias de mieloma múltiplo. Consiste em uma reconstrução do microambiente da medula óssea (incluindo matriz extracelular e estroma) em placas de múltiplos poços e um método não invasivo para quantificação longitudinal da viabilidade celular.

Um Sistema Organotípicas alta taxa de transferência para Caracterização de Drogas de sensibilidade de células de mieloma múltiplo primárias

Métodos simples para detectar a ativação seletiva de proteínas G por receptores acoplados à proteína G continuam sendo um grande desafio na sinalização celular. Aqui, os biossensores de transferência de energia de ressonância Fӧrster (FRET) foram desenvolvidos amarrando um GPCR a peptídeos de proteína G para sondar mudanças conformacionais em concentrações controladas em células vivas.

Conformações GPCR G Protein selectivos medida usando FRET Sensores em um Fluorometer Ensaio de células vivas de suspensão

Nós apresentamos uma análise (HCA) instrumento de alto conteúdo open source utilizando imagens de fluorescência vida automatizado (FLIM) para ensaiar interações proteína usando Förster transferência de energia de ressonância (FRET) leituras base. Aquisição de dados para este instrumento openFLIM-HCA é controlada por software escrito em μManager e análise de dados é realizado em FLIMfit.

Open Source Análise alta Conteúdo Utilizando Automated microscopia de fluorescência Lifetime Imagiologia

O ensaio de celular descrito destina-se a identificação do receptor do chemokine do CXC 4 (CXCR4)-interação agentes que inibem ou estimulam, competitivos ou qual alostericamente, o intracelular Ca2 + lançamento iniciado pela ativação de CXCR4.

Um cinética baseada em fluorescência Ca2 + mobilização ensaio para identificar agonistas do Receptor acoplado à proteína G, antagonistas e moduladores alostéricos

Combinações de drogas sinérgica são difíceis e demorados identificar empiricamente. Aqui, descrevemos um método para identificar e validar sinérgicas pequenas moléculas.

Identificação de alta produtividade de combinações de drogas sinérgica pelo método de sobreposição2

Introduzimos um protocolo para medir a resposta de drogas em tempo real em fatias organotípicas de tecido tumoral. A estratégia experimental aqui delineada fornece uma plataforma para realizar telas de medicamentos de médio-alto consumo em fatias de tecido derivadas de tumores clínicos ou de camundongos em condições ex-vivos.

Medição da resposta de drogas em tempo real em fatias de tecido tumoral organotípico

Neste trabalho, um ensaio de fluorescência de cálcio intracelular de alto rendimento para placas de 384 poços para rastrear pequenas bibliotecas de moléculas em receptores acoplados à proteína G recombinante (GPCRs) é descrito. O alvo, o receptor de cinina do carrapato da febre do gado, Rhipicephalus microplus, é expresso em células CHO-K1. Este ensaio identifica agonistas e antagonistas usando as mesmas células em um ensaio de "adição dupla".

Um ensaio de fluorescência de cálcio de "dupla adição" para a triagem de alto rendimento de receptores acoplados à proteína G recombinante

Organoides tumorais derivados de pacientes são um sofisticado sistema modelo para pesquisa básica e translacional. Este artigo de métodos detalha o uso de imagens de células vivas fluorescentes multiplexadas para avaliação cinética simultânea de diferentes fenótipos organoides.

Imagem Multiplexada de Células Vivas para Respostas a Drogas em Modelos de Câncer Organoides Derivados de Pacientes

Aprenda a usar o ensaio FLICK para avaliar respostas a medicamentos anticâncer em linhagens celulares. Este método calcula taxas de crescimento e morte celular induzidas por drogas com alta precisão.

Análise abrangente da resposta a medicamentos usando o ensaio FLICK

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