Name: Aplicação de um novo hidrogel de hialuronano para cultura de folículos tridimensionais e metodologia para criopreservação de folículos ovarianos de camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Aprenda a cultivar folículos pré-antrais em hidrogel de hialuronano 3D usando tecido ovariano de camundongos. Este método avança a biologia reprodutiva e tratamentos de fertilidade.

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<ol><li>Telfer, E. E., Andersen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+growth+and+maturation+of+primordial+follicles+and+immature+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">In vitro growth and maturation of primordial follicles and immature oocytes.</a> Fertil Steril. 115 (5), 1116-1125 (2021).</li>
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<li>Carabatsos, M. J., Sellitto, C., Goodenough, D. A., Albertini, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-granulosa+cell+heterologous+gap+junctions+are+required+for+the+coordination+of+nuclear+and+cytoplasmic+meiotic+competence%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Oocyte-granulosa cell heterologous gap junctions are required for the coordination of nuclear and cytoplasmic meiotic competence.</a> Dev Biol. 226 (2), 167-179 (2000).</li>
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<li>Telfer, E., Torrance, C., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+study+of+cultured+preantral+ovarian+follicles+of+mice+after+transplantation+under+the+kidney+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Morphological study of cultured preantral ovarian follicles of mice after transplantation under the kidney capsule.</a> J Reprod Fertil. 89 (2), 565-571 (1990).</li>
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<li>Zaniker, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensionally+printed+agarose+Micromold+supports+scaffold-free+mouse+ex+vivo+follicle+growth%2C+ovulation%2C+and+luteinization%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Three-dimensionally printed agarose Micromold supports scaffold-free mouse ex vivo follicle growth, ovulation, and luteinization.</a> Bioengineering. 11 (7), 719(2024).</li>
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<li>Wu, J., Nayudu, P. L., Kiesel, P. S., Michelmann, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luteinizing+hormone+has+a+stage-limited+effect+on+preantral+follicle+development+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Luteinizing hormone has a stage-limited effect on preantral follicle development in vitro.</a> Biol Reprod. 63 (1), 320-327 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubulina anti-alfa-FITC marcada</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2168</td><td></td></tr><tr><td>Tubulina anti-beta-FITC marcada</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2043</td><td></td></tr><tr><td>BZ-X700</td><td>Keyence</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prato de centro bem</td><td>Fisher Científico</td><td>08-772-12</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase Tipo I</td><td>Corporação Bioquímica Worthington</td><td>LS004196</td><td></td></tr><tr><td>Frasco Crycap ventilado</td><td>Pesquisa Hampton</td><td>HR4-904</td><td></td></tr><tr><td>Cryoloop</td><td>Pesquisa Hampton</td><td>HR4-974</td><td></td></tr><tr><td>Tampa de cristal</td><td>Pesquisa Hampton</td><td>HR4-733</td><td></td></tr><tr><td>Prato de cultura 60mm</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>08-772B</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Fator de crescimento epidérmico (EGF)</td><td>R & D Sistemas</td><td>236-EG</td><td></td></tr><tr><td>Etilenoglicol (EG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>293237</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino fetal inativado por calor</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10082-147</td><td></td></tr><tr><td>Hormônio folículo estimulante (FSH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4021</td><td></td></tr><tr><td>Global-Hepes&nbsp; Média</td><td>CooperSurgical</td><td>LGGH-100</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2261</td><td></td></tr><tr><td>Gonadotrofina coriônica humana (hCG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CG10</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sérica humana</td><td>CooperSurgical</td><td>GHSA-125</td><td></td></tr><tr><td>Hialuronidase</td><td>CooperSurgical</td><td>ART-4007-A</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrogénio</td><td>CVS Farmácia Inc.</td><td>372441</td><td></td></tr><tr><td>Insulina-transferrina-selênio (ITS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41400-045</td><td></td></tr><tr><td>Médio Leibovitz (L-15)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11415-064</td><td></td></tr><tr><td>Hormona luteinizante</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L9773</td><td></td></tr><tr><td>Varinha magnética</td><td>Pesquisa Hampton</td><td>HR4-729</td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas (1000 &micro; m)</td><td>Minitubo</td><td>19025/0050</td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas (175, 200 e 275 &micro; m)</td><td>CooperSurgical</td><td>MXL3-175, MXL3-200, MXL3-275</td><td></td></tr><tr><td>Filtro Millex GV 0.22 &micro; m</td><td>Millipore</td><td>SLGU033RS</td><td></td></tr><tr><td>Óleo mineral</td><td>CooperSurgical</td><td>LGOL-500</td><td></td></tr><tr><td>Mínimo Essencial Médio alfa (MEM)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>32561-037</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imagem de oócitos - Spindleview</td><td>Hamilton Thorne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Iodeto de propídio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Pág. 4170</td><td></td></tr><tr><td>Rápido i</td><td>Vida Vitro</td><td>14406</td><td></td></tr><tr><td>Caixa inteligente</td><td>Vida Vitro</td><td>14423</td><td></td></tr><tr><td>Substituto de proteína sintética (SPS)</td><td>CooperSurgical</td><td>ART-3011</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Biohidrogel de Hialuronano ligado à tiramina</td><td>Núcleo de vida</td><td>ENG-00151</td><td></td></tr><tr><td>Seladora ultrassônica</td><td>Vida Vitro</td><td>14415</td><td></td></tr><tr><td>Prato de cultura GPS universal 8x 100 &micro; l poços</td><td>CooperSurgical</td><td>UGPS-010</td><td></td></tr></tbody></table>

aplicação de um novo hidrogel de hialuronano para cultura de folículos tridimensionais e metodologia para criopreservação de folículos ovarianos de camundongos

Application of a Novel Hyaluronan Hydrogel for Three-Dimensional Follicle Culture and Methodology for Mouse Ovarian Follicle Cryopreservation

Este artigo detalha a metodologia para o uso de um novo gel de hialuronano ligado à tiramina para cultura in vitro de folículos pré-antrais de camundongos36,37. A Figura 6 ilustra as diferenças entre o crescimento do folículo pré-antral quando colocado em um sistema de cultura 2-D convencional versus um único folículo encapsulado em gel de HA para cultura 3-D. A arquitetura do folículo nativo é mantida durante os 12 dias de cultivo com um antro claramente visível no último dia de crescimento.
O gel HA é muito versátil, permitindo o crescimento de folículos isolados isoladamente ou em grupos e também o tecido ovariano é mecanicamente quebrado em pequenos aglomerados de folículos. O gel é transparente, permitindo visualizar os folículos, mesmo que em profundidades diferentes. Os folículos encapsulados e FL-C exibem expansão radial devido à proliferação contínua de células da granulosa (Figura 7). Os diâmetros iniciais dos folículos são em média de 139,8 ± 28 μm, com o diâmetro do oócito GV medindo 63,5 ± 4,6 μm. Em folículos cultivados individualmente, os diâmetros finais medem cerca de 385,6 ± 36,7 μm, um aumento de aproximadamente 3 vezes no tamanho. Os oócitos ovulados metafásicos II medem cerca de 84,8 ± 3,8 μm. Dentro dos clusters FL cultivados, o tamanho do folículo é bastante diverso (Figura 5, Figura 7). Oócitos ovulados após o gatilho de hCG são encontrados próximos ao folículo (Figura 8). A maioria dos oócitos metafásicos II será recuperada dos COCs ovulados Os folículos ainda incorporados após o gatilho geralmente contêm oócitos GV e metáfase I.
A Tabela 1 contrasta as taxas de maturação entre folículos isolados e aglomerados de FL de ovários frescos ou congelados. FL-C de ovários criopreservados teve taxas de maturação significativamente mais baixas. Observações microscópicas mostraram que eles freqüentemente têm lâmina basal quebrada, tornando-os bastante suscetíveis à extrusão prematura de oócitos. A natureza frágil dos aglomerados foliculares foi um pouco contrariada pelo encapsulamento. O tratamento com colagenase de ovários criopreservados foi evitado, pois era especialmente prejudicial com baixa sobrevivência e baixo rendimento de folículos intactos.
A criopreservação de folículos isolados é muito mais eficaz do que a preservação de todo o ovário. Altas taxas de maturação podem ser alcançadas com ambos os métodos de vitrificação examinados (Tabela 2). Apesar das grandes diferenças nas taxas de resfriamento, a maturação do oócito após a VCI não diferiu. O transportador aberto CL permite mais eficiência, pois até dez folículos podem ser carregados em um único transportador aberto CL. Isso também reduz o tempo total de recuperação de vários folículos criopreservados. No entanto, para qualquer eventual aplicação clínica de vitrificação para folículos humanos, o sistema fechado e selado pode ser preferível.
O arranjo da cromatina ao redor do nucléolo do oócito GV pode ser usado para identificar oócitos com maior probabilidade de fertilizar após a ovulação e evoluir para blastocistos38. A Figura 9 ilustra a coloração viva de oócitos para visualizar o padrão de distribuição da cromatina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig01.jpg"> Figura 1: Esquema do crescimento folicular. Este diagrama ilustra os diferentes estágios do desenvolvimento do folículo, de um folículo primário ao estágio pré-antral secundário e, finalmente, a um folículo terciário totalmente maduro pronto para a ovulação. Uma imagem microscópica de um folículo pré-antral típico também é mostrada com suas diferentes características morfológicas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig02.jpg"> Figura 2: Esquema do método de encapsulamento de HA. A estrutura do gel de hialuronano e as diferentes etapas para a incorporação do folículo são ilustradas neste diagrama. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig03.jpg"> Figura 3: Isolamento e encapsulamento do folículo. (A, B) Folículo pré-antral selecionado para incorporação com aumento de 40x e 200x. (C) O folículo apoptótico é mostrado com folículo pré-antral saudável com oócito não muito central. (D) Imagem de grânulo de gel de HA semeado com folículos e (E) com dois FL-C. Imagens tiradas com um estereomicroscópio para mostrar todo o grânulo de gel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig04.jpg"> Figura 4: Dispositivos de vitrificação para criopreservação de folículos isolados. Com o dispositivo de suporte aberto CL, a etapa de vitrificação é conduzida por imersão direta dos folículos em nitrogênio líquido. A taxa de resfriamento é, portanto, extremamente alta, acima de -20.000 °C/min. Em contraste, com o transportador fechado RI, os folículos são carregados no bastão de plástico interno e jogados em um canudo externo imerso em nitrogênio líquido. Este método de vitrificação fechado evita o contato direto com nitrogênio líquido. No entanto, a taxa de resfriamento é significativamente menor a -1220 °C/min. O carregamento e a recuperação de folículos de qualquer um dos portadores são fáceis. O transportador aberto CL acomodou a carga de até dez folículos por dispositivo, em comparação com apenas dois com o transportador fechado RI. Este número foi modificado de35. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig05.jpg"> Figura 5: Imagens representativas dos problemas encontrados. (A) Aglomerado de folículos com oócito sendo extrudado. (B) Folículos isolados com membrana da lâmina basal quebrada e um com oócito extrudado. (C) Folículo embutido sob uma bolha no gel. (D) Aglomerado de folículos que permaneceu no gel (esquerda) em comparação com o aglomerado embutido muito profundo que acabou se fixando no prato. A ampla gama de tamanhos de folículos em FL-C é claramente visível. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig06.jpg"> Figura 6: Comparação do crescimento folicular em convenções 2-D versus cultura 3-D em HA. Com o crescimento 2-D, o achatamento do folículo e a fixação das células da granulosa à placa de cultura de tecidos foram observados no dia 4, deixando o oócito vulnerável à migração de células da granulosa, ruptura das junções comunicantes e extrusão prematura de oócitos. O folículo encapsulado em AH permaneceu solto durante todo o intervalo de cultivo. A expansão das células da granulosa ocorreu em todas as direções, envolvendo o oócito e mantendo a arquitetura 3-D. Este número foi modificado de36. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig07.jpg"> Figura 7: Imagens representativas de folículos encapsulados em gel de hialuronano ligado à tiramina. (A) Folículo pré-antral coletado após a digestão da colagenase do ovário fresco no Dia 1. (B) Gota de gel semeada com quatro folículos pré-antrais fotografados no dia 1 e (C) Dia 4 de cultura, (D) Aglomerado de folículos de ovário fresco no dia 2, (E) no dia 6 e (F) no dia 9 de cultura. (G) Aglomerado de folículos dissecado mecanicamente do ovário inteiro vitrificado mostrado no dia 2 e (H) no dia 6 da cultura. (I) O folículo com formação de antro é claramente visível no dia 9 da cultura. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig07large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig08.jpg"> Figura 8: Ovulação do oócito. (A, B) Complexo cumulus-oócito ovulado (COC) mostrado ao lado do talão de gel HA. (C) Os oócitos foram fotografados após o tratamento enzimático de COCs com hialuronidase para remover as células do cumulus circundantes. Numerosos oócitos metafásicos II. (D) Oócito metafásico II com corpo polar proeminente. Ampliação 400x. (E) Imagem ao vivo do oócito metásico II usando luz polarizada e um sistema de imagem para visualizar o fuso meiótico e avaliar a organização, feita conforme descrito em37. Ampliação 400x. Fuso birrefringente normal visível. (F) Oócito metafásico II fixado e corado com anti-alfa/beta-tubulina e iodeto de propídio para visualizar a organização do fuso meiótico. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig08large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig09.jpg"> Figura 9: Reorganização da cromatina em oócitos GV. O arranjo da cromatina em oócitos GV após a formação do antro foi examinado pela coloração de DNA com Hoechst 33342 (50 ng/mL). Folículos representativos foram colhidos de grânulos de AH por pipetagem suave. As células da granulosa foram removidas com hialuronidase. Os oócitos GV foram então corados por 15 min. (Ver protocolo de Monti et al.38). As imagens foram tiradas com ampliação de 40x. (A) Oócito GV mostrado no Dia 1 no início da cultura exibindo o padrão de coloração da cromatina não circundada (NSN). (B) Oócito GV do folículo em crescimento com antro mostrado no dia do gatilho do hCG. A cromatina condensou-se e formou um anel perinuclear ao redor do nucléolo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig09large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Parâmetro</td>
			<td colspan="2">Ovário fresco</td>
			<td>Ovário congelado</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>FL-isolado</td>
			<td>FL-Cluster</td>
			<td>FL-Cluster</td>
		</tr><tr><td>Folículos observados durante a VCI</td>
			<td>130</td>
			<td>154</td>
			<td>69</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">Ovulação após HCG (%)</td>
			<td>71%</td>
			<td>66%</td>
			<td>93%</td>
		</tr><tr><td>(92/130)</td>
			<td>(101/154)</td>
			<td>(64/69)</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">GVBD (%)</td>
			<td>30%</td>
			<td>28%</td>
			<td>52%</td>
		</tr><tr><td>(28/92)</td>
			<td>(28/101)</td>
			<td>(33/64)</td>
		</tr><tr><td>Formação de oócitos MII (%)</td>
			<td>59%</td>
			<td>55%</td>
			<td>*34%</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>(54//92)</td>
			<td>(56/101)</td>
			<td>(22/64)</td>
		</tr></tbody></table>Tabela 1: Resultados com folículos embebidos em HA de ovários frescos e vitrificados. Folículos e FL-C de ovários frescos foram amadurecidos in vitro após encapsulamento em gel de HA. O gel de HA também foi testado em folículos de ovários vitrificados usando um protocolo EG / DMSO39. Com ovários frescos, tanto os folículos individuais (FL) quanto os aglomerados de folículos (FL-C) foram coletados após a digestão da colagenase. Para ovários vitrificados, a exposição à colagenase foi, de fato, prejudicial aos folículos. A melhor abordagem com ovários criopreservados foi isolar aglomerados de FL em vez de folículos individuais e usar apenas dissecção mecânica com agulhas. A tabela contrasta os resultados entre grânulos de HA semeados com folículos em grupos de 4-6 versus grânulos com um único FL-C contendo 6-10 folículos. *A taxa de maturação com FL-C de ovários criopreservados foi significativamente menor (p = 0,008; Análise qui-quadrado para testar a significância).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2">Portador</td>
			<td>RI</td>
			<td>CL</td>
		</tr><tr><td>(Fechado)</td>
			<td>(Aberto)</td>
		</tr><tr><td>Sobrevida (%)</td>
			<td>100% (24/24)</td>
			<td>100% (41/41)</td>
		</tr><tr><td>Formação de antro* (%)</td>
			<td>25.0% (6/24)</td>
			<td>75.6% (31/41)*</td>
		</tr><tr><td>Taxa de ovulação (%)</td>
			<td>66.7% (16/24)</td>
			<td>87.8% (36/41)</td>
		</tr><tr><td>Taxa de maturação (% MIIs)</td>
			<td>81.3% (13/16)</td>
			<td>69.4% (25/36)</td>
		</tr></tbody></table>Tabela 2: Resultados após criopreservação de folículos isolados em dois dispositivos de vitrificação diferentes. Altas taxas de maturação foram alcançadas tanto com o dispositivo CL aberto quanto com o portador RI fechado, com sua menor taxa de resfriamento. A formação de antro foi a única medida de desfecho observada como significativa, mas não impactou a taxa de maturação geral (p &lt; 0,05; Análise qui-quadrado para testar a significância).

Aplicação de um novo hidrogel de hialuronano para cultura de folículos tridimensionais e metodologia para criopreservação de folículos ovarianos de camundongos

The 3-D architecture of the ovarian follicle and the complex interactions between somatic cell components and the oocyte that are necessary for ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Um novo método para encapsulação de ovário folículos em uma rede de fibrina 3D alginato-interpenetrantes é descrito. Este sistema combina suporte estrutural, com a degradação proteolítica para apoiar o desenvolvimento de folículos imaturos para produzir ovócitos maduros. Este método pode ser aplicado a agregados de cultura de células para manter contatos célula-célula sem limitar a expansão.

Um método para Encapsulation ovário folículo e Cultura em um proteoliticamente Degradáveis ​​3 Sistema Dimensional

Cultura de células normais em seu contexto tridimensional representa um método alternativo para estudar os eventos iniciais necessárias para a transformação celular e tumorigênese. Este método é usado para crescer ovariano normal e células oviductal para estudar os eventos iniciais na formação de câncer de ovário.

Hidrogéis alginato para Tridimensional Cultura Órgão de ovários e tubas uterinas

Este protocolo descreve a cultura primária / co-cultura de tecido ovariano rato, usando ovários de camundongos recém-nascidos e folículos ovarianos individuais de ratos pré-púberes. As técnicas de cultura de suportar o desenvolvimento de uma forma altamente fisiológico, que permita a investigação do efeito de agentes extrínsecos no ovário, e das interacções entre os folículos do ovário.

Cultura e Co-Culture of Mouse ovários e folículos ovarianos

Uma técnica altamente promissora para gerar tecido constrói sem usar matriz é a células de cultura em uma condição de microgravidade simulado. Usando um sistema rotativo de cultura, nós examinamos o crescimento do folículo ovariano e a maturação do oócito em termos de função oócito sob a condição de microgravidade simulado, morfologia, crescimento e sobrevivência do folículo.

In Vitro Crescimento do folículo pré-antral do Mouse sob microgravidade simulado

Culturas de tecido ovarianos podem ser usadas como modelos de atresia de folículo, ovulação e desenvolvimento do folículo e indicar mecanismos reguladores de processos dinâmicos de ovário.

Cultura do tecido ovariano Visualizar fenômenos no ovário de Mouse

Apresentados aqui estão dois protocolos para o encapsulamento de oócitos suínos em condições culturais 3D. No primeiro, os complexos cumulus-oocyte (COCs) são encapsulados em contas fibrina-alginato. No segundo, são fechados com partículas fluoradas de propileno de etileno (microbioreatores). Ambos os sistemas garantem condições ideais para manter sua organização 3D.

Hidrogéis alginatos desordeiros descabidos proteolíticos e microbiorreatores hidrofóbicos para encapsulamento de oócito suíno

Aqui, descrevemos um protocolo que descreve como isolar folículos ovarianos humanos de tecido cortical congelado e descongelado para realizar análises de expressão gênica.

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Descrevemos métodos para cultura de folículos ovarianos em um novo molde de agarose livre de andaimes que complementa a gametogênese in vitro .

Produção e uso de moldes de agarose personalizáveis para cultura de folículos ovarianos de camundongos sem andaimes

Descrevemos uma plataforma baseada em chip para o cultivo tridimensional de células em micro-biorreatores. Um chip pode abrigar até 10 milhões. células que podem ser cultivadas sob condições estritamente definidas em relação ao fluxo de fluidos, etc tensão de oxigênio em um circuito de circulação estéril, fechado.

Chip baseado em Cultura de Células tridimensional em perfundidos Micro-biorreatores

Nós apresentamos dois processos para a microfabricação dos chips porosa de polímero para tridimensional cultivo celular. O primeiro é de estampagem a quente combinado com um processo de soldagem solvente vapor. A segunda usa um processo desenvolvido recentemente microthermoforming combinado com tecnologia de iões pista levando a uma significativa simplificação de fabricação.

Microfabricação de Chip porte Andaimes para tridimensional de cultivo celular

Aprenda a cultivar folículos pré-antrais em hidrogel de hialuronano 3D usando tecido ovariano de camundongos. Este método avança a biologia reprodutiva e tratamentos de fertilidade.

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