Name: Crioseccionamento direto de cabeças de Drosophila para coloração e imunocoloração aprimoradas de fluorescência cerebral (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Aprenda um protocolo simplificado de crioseccionamento de cérebros de Drosophila para imunocoloração e análise de imagem quantitativa. Este método elimina dissecções complexas e reduz a dependência de equipamentos caros.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Pipeta 1000 uL</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 uL Pontas de Pipeta</td><td>Olympus Plastics</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Fisher</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris Buffered Saline</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60877.K2</td><td>pH=7.4</td></tr><tr><td>AF750 Anticorpo Secundário Anti-Rato de Cabra</td><td>Alexa Fluor</td><td>A21037</td><td></td></tr><tr><td>Vidro Anti-Rolo</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo Primário de Rato ApoE</td><td>Santa Cruz</td><td>SC13521</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de Soro Bovino Fisher</td><td></td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de Centrífuga 1,5 mL</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas Carregadas</td><td>Globe Scientific</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>Moldes de Criosseccionamento</td><td>Fisher</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM 3050 S</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de Criostato</td><td>C.L. Sturkey</td><td>DT554N50</td><td></td></tr><tr><td>Água</td><td></td><td></td><td></td>Destilada</tr><tr><td>Gelo Seco</td><td>???</td><td>???</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Fina</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Fly Pad</td><td>Tritech Research</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr><tr><td>Mídia de montagem de endurecimento com Dapi</td><td>Vectashield</td><td>H-1800</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Microscópio Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Olympus</td><td></td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Nile Red&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>N3013</td><td></td></tr><tr><td>Composto de Temperatura de Corte Ideal</td><td>Fisher</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>Agitador Orbital</td><td>OHAUS</td><td>SHLD0415DG</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído 20%</td> <td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de Barbear</td><td>Gravey</td> <td># 40475</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Mola</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>Fisher</td><td>S5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

crioseccionamento direto de cabeças de drosophila para coloração e imunocoloração aprimoradas de fluorescência cerebral

Direct Cryosectioning of Drosophila Heads for Enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining

O método descrito acima permite a imagem de fluorescência de cérebros de moscas adultas de forma confiável e sem dissecção tediosa. Ilustrado de forma simples na Figura 1, o método é simples e pode ser executado rapidamente se todas as amostras, equipamentos e materiais estiverem prontamente disponíveis. Alternativamente, usando armazenamento de -80 °C durante o estágio de molde OCT, as amostras podem ser mantidas para uso muitas semanas depois. Os pesquisado...

Crioseccionamento direto de cabeças de Drosophila para coloração e imunocoloração aprimoradas de fluorescência cerebral

Immunostaining Drosophila melanogaster brains is essential for exploring the mechanisms behind complex behaviors, neural circuits, and protein expression ...

direct-cryosectioning-drosophila-heads-for-enhanced-brain

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JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este vídeo demonstra a coloração por imunofluorescência de um cérebro transgênico de Drosophila para imagens de células gliais de células únicas. O cérebro expressa proteínas direcionadas à membrana fundidas com diferentes combinações de epítopos antigênicos sob o controle de um sistema de recombinase específico da glia. Os cérebros isolados e fixados são corados com anticorpos primários específicos para os epítopos antigênicos, seguidos por anticorpos secundários conjugados com fluoróforo.

Coloração por imunofluorescência de cérebros de Drosophila para a imagem de célula única de células gliais

A imunocoloração é uma técnica eficaz para visualizar tipos específicos de células e proteínas dentro dos tecidos. Ao utilizar a sonicação, o protocolo descrito aqui alivia a necessidade de dissecar tecidos de Drosophila melanogaster de embriões e larvas em estágio avançado antes da imunocoloração. Fornecemos uma metodologia eficiente para a imunocoloração de larvas de montagem inteira fixadas em formaldeído.

Facilitou-Sonication Imunofluorescência Coloração de Late-estágio embrionário e larval<em&gt; Drosophila</em&gt; Tecidos<em&gt; In Situ</em

O adulto de Drosophila cérebro é um sistema valioso para estudar circuitos neuronais, funções cerebrais superiores, e doenças complexas. Um método eficiente para dissecar tecido do cérebro inteiro do cabeça pequena mosca facilitará estudos baseados em cerebrais. Aqui nós descrevemos um de uma etapa simples protocolo, dissecação de cérebros adultos com morfologia bem preservada.

Um de uma etapa simples protocolo de dissecação para Whole mount-Preparação do Adulto<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

Este protocolo descreve a dissecção e imunocoloração de adultos Drosophila melanogaster tecidos do cérebro. Especificamente, este protocolo destaca o uso da Drosophila cogumelo corpo e fotoreceptor neurônios como subconjuntos neuronal de exemplo que podem ser usados com precisão para descobrir princípios gerais subjacentes a muitos aspectos do desenvolvimento neuronal.

Dissecção e imunofluorescência coloração de cogumelo corpo e fotoreceptor neurônios em cérebros adultos Drosophila melanogaster

Células exibir diferentes morfologias e estabelecer uma variedade de interações com seus vizinhos. Este protocolo descreve como para revelar a morfologia das células únicas e para investigar a interação célula-célula, usando o sistema de expressão Gal4/UAS bem estabelecido.

Aplicação de técnica de FlpOut MultiColor para estudar a alta resolução única célula morfologias e interações de células da Glia em Drosophila

Nós desenvolvemos um fluxo de trabalho simples e adaptável para extrair dados quantitativos de estudos biológicos fluorescência-imagem latente-à base de célula de agregação de proteínas e autophagic fluxo no sistema nervoso central de Drosophila modelos de Neurodegeneração.

Biologia celular quantitativa de neurodegeneração em Drosophila , através de uma análise imparcial das proteínas fluorescente etiquetadas usando o ImageJ

Este trabalho apresenta um método cirúrgico para dissecando Drosophila pupal retina juntamente com protocolos para o processamento de tecido para extração de RNA, análise ocidental e imuno-histoquímica.

Dissecação da Retina Pupal drosófila para imuno-histoquímica, análise ocidental e isolamento de RNA

A hibridização in situ de fluorescência iterativa assistida por expansão (EASI-FISH) é uma técnica robusta que combina microscopia de expansão com hibridização in situ de fluorescência (FISH) para detectar a expressão de vários genes em tecidos espessos. Este protocolo descreve os recentes avanços no método e sua adaptação para rotular o sistema nervoso central intacto da Drosophila.

Detecção multiplex da expressão gênica no cérebro intacto de Drosophila usando hibridização in situ de fluorescência iterativa assistida por expansão

O protocolo de corte cardíaco e imagem de fluorescência da Drosophila simplifica o estudo da estrutura e patologias do coração. Essa abordagem envolve seccionamento, coloração e imagem simples, ignorando o conhecimento técnico necessário para a dissecção tradicional. Aumenta a acessibilidade, tornando a Drosophila um modelo mais amplamente utilizável para pesquisas cardíacas dentro da comunidade científica mais ampla.

Método novo e eficiente para coloração de fluorescência cardíaca de Drosophila com crioseccionamento

Fluorescência dupla In situ Hibridação nas Seções cérebro fresco

Aprenda um protocolo simplificado de crioseccionamento de cérebros de Drosophila para imunocoloração e análise de imagem quantitativa. Este método elimina dissecções complexas e reduz a dependência de equipamentos caros.

Crioseccionamento direto de cabeças de Drosophila para coloração e imunocoloração aprimoradas de fluorescência cerebral

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