Name: Protocolo de injeção direta do nervo vago para ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Aprenda a realizar injeção direta no nervo vago de ratos para terapia gênica. Este método permite entrega precisa de vetores AAV9 ao sistema nervoso autônomo em estudos pré-clínicos.

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<ol><li>Fischer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+injection+into+the+dorsal+root+ganglion%3A+Technical%2C+behavioral%2C+and+histological+observations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Direct injection into the dorsal root ganglion: Technical, behavioral, and histological observations.</a> J Neurosci Methods. 199 (1), 43-55 (2011).</li>
<li>O'donnell, M., Fontaine, A., Caldwell, J., Weir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+dorsal+root+ganglia+%28drg%29+injection+in+mice+for+analysis+of+adeno-associated+viral+%28AAV%29+gene+transfer+to+peripheral+somatosensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Direct dorsal root ganglia (drg) injection in mice for analysis of adeno-associated viral (AAV) gene transfer to peripheral somatosensory neurons.</a> J Neurosci Methods. 411, 110268(2024).</li>
<li>Puljak, L., Kojundzic, S. L., Hogan, Q. H., Sapunar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+pharmacological+agents+into+rat+dorsal+root+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of pharmacological agents into rat dorsal root ganglion.</a> J Neurosci Methods. 177 (2), 397-402 (2009).</li>
<li>Rueter, L. E., Kohlhaas, K. L., Curzon, P., Surowy, C. S., Meyer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+and+central+sites+of+action+for+a-85380+in+the+spinal+nerve+ligation+model+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Peripheral and central sites of action for a-85380 in the spinal nerve ligation model of neuropathic pain.</a> Pain. 103 (3), 269-276 (2003).</li>
<li>Ulusoy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-to-neuron+alpha-synuclein+propagation+in+vivo+is+independent+of+neuronal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Neuron-to-neuron alpha-synuclein propagation in vivo is independent of neuronal injury.</a> Acta Neuropathol Commun. 3, 13(2015).</li>
<li>Helwig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+propagation+of+transduced+alpha-synuclein+involves+non-fibrillar+protein+species+and+is+enhanced+in+alpha-synuclein+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Brain propagation of transduced alpha-synuclein involves non-fibrillar protein species and is enhanced in alpha-synuclein null mice.</a> Brain. 139 (Pt 3), 856-870 (2016).</li>
<li>Chiang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+suprachoroidal-to-optic-nerve+%28scone%29+drug+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Development of a novel suprachoroidal-to-optic-nerve (scone) drug delivery system.</a> Drug Deliv. 31 (1), 2379369(2024).</li>
<li>Ferrari, L. F., Cunha, F. Q., Parada, C. A., Ferreira, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+to+perform+direct+intraganglionar+injections+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel technique to perform direct intraganglionar injections in rats.</a> J Neurosci Methods. 159 (2), 236-243 (2007).</li>
<li>Yuan, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+injection+of+lumbar+dorsal+root+ganglia+under+direct+vision%3A+Relevant+anatomy%2C+protocol%2C+and+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rapid injection of lumbar dorsal root ganglia under direct vision: Relevant anatomy, protocol, and behaviors.</a> Front. Neurol. 14, 1138933(2023).</li>
<li>Mason, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+AAV+serotypes+for+gene+delivery+to+dorsal+root+ganglion+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Comparison of AAV serotypes for gene delivery to dorsal root ganglion neurons.</a> Mol Ther. 18 (4), 715-724 (2010).</li>
<li>Arjomandnejad, M., Dasgupta, I., Flotte, T. R., Keeler, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+of+recombinant+adeno-associated+virus+%28AAV%29+vectors+for+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22BioDrugs%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity of recombinant adeno-associated virus (AAV) vectors for gene transfer.</a> BioDrugs. 37 (3), 311-329 (2023).</li>
<li>Ertl, H. C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+and+toxicity+of+AAV+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity and toxicity of AAV gene therapy.</a> Front Immunol. 13, 975803(2022).</li>
<li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+permanent+distal+middle+cerebral+with+common+carotid+artery+occlusion+in+aged+rats+to+study+cortical+ischemia+with+sustained+disability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing permanent distal middle cerebral with common carotid artery occlusion in aged rats to study cortical ischemia with sustained disability.</a> J Vis Exp. (108), e53106(2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD&nbsp; Seringa Tuberculina com Destacável 25 G x 5/8". Agulha</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>SKU:309626</td><td>Usado para conectar com agulha curva para puxar o nervo vago e segurá-lo no momento da injeção.</td></tr><tr><td>Injeção de cloridrato de bupivacaína a 0,5%</td><td>Hospira</td><td>NDC 0409-1162-19</td><td>Anestésicos locais usados para anestesiar o tecido local.</td></tr><tr><td>100 mL 0,9% de Cloreto de Sódio para Irrigação USP</td><td>Stericare Solutions</td><td>Item #6240</td><td>Solução salina normal, usada para reidratar ratos e tecidos.</td></tr><tr><td>20 Pontas Retratoras, 7.5 mm</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Surgi 5018</td><td>Usado para separar e segurar tecidos no momento da cirurgia.</td></tr><tr><td>Seringa BD-Luer-Lok de 3 mL, Estéril, Uso Único&nbsp;</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>SKU # 309657</td><td>Usado para injetar solução salina em ratos e preencher a solução salina no tubo de polietileno.</td></tr><tr><td>AK-Fluor10%</td> <td>Akorn</td><td>NDC 17478-253-10</td><td>Corante de fluoresceína visível dentro do nervo. Usado para rastrear a fidelidade da injeção.</td></tr><tr><td>Balança de pesagem de animais</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SCL 4000</td><td>Usado para medir o peso corporal de ratos.</td></tr><tr><td>Luvas cirúrgicas Ansell ENCORE Perry Style 42 PF</td> Luva estéril <td>Ansell</td><td>ASTM D3577</td>, <td>é usada no momento da cirurgia por um cirurgião.</td></tr><tr><td>Pomada artificial 3.5g das lágrimas</td><td></td><td>NDC 46066-753-55</td><td>Usado nos eyses para impedir a secura excessiva dos olhos.</td></tr><tr><td>Hemostático Baby-Myxter&nbsp;</td><td>Ferramentas Fine Science</td><td>13013-14</td><td>Usado para parar o sangramento em caso de emergência. Também usado para dobrar a agulha de 25 G x 5/8".</td></tr><tr><td>Tubulação de PE Intramédica BD</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>14-170-12A</td><td>Usado no sistema de configuração de injeção para conectar com agulha Hamilton e agulhas NanoFil. Ele também contém a mistura de injeção.</td></tr><tr><td>Agulha de Deslizamento BD Precison, 25 G x 5/8"</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#305122</td><td>Usada para injetar solução salina em ratos e para fazer uma agulha curva.</td></tr><tr><td>Agulha de Deslizamento BD Precison, 27 G x &frac12; "</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#301629</td><td>Usado para encher solução salina estéril no tubo intradérmico BD.</td></tr><tr><td>Benchmark Accuris " PróximoPette" Conjunto de Pipeta de Volume Variável Micro Starter inclui 4 pipetas: 10/20/200/1000 &mu; L, mais suporte</td><td>MilliporeSigma</td><td>BMSP7700S1</td><td>Usado para pipetar solução estéril.</td></tr><tr><td>Betadine, Povidina Iodo 10%&nbsp;</td><td>Honestmed</td><td>67618015017</td><td>Usado para desinfetar a área cirúrgica.</td></tr><tr><td>Solução injetável de carprofeno 50 mg/mL</td><td>Fornecido pela Covtrus (6451506845)</td><td>SKU 591149</td><td>No nosso caso, usamos carprofeno diluído na taxa de dose de 5 mg/kg fornecida pelo Animal Resource Center do University of Texas Southwestern Medical Center.</td></tr><tr><td>Agulha curvada (feita sob medida)</td> <td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#305122</td><td>BD PrecisionGlide 25 G x 5/8" in a agulha é curvada a 90 graus com a ajuda de um hemostático. A ponta da agulha é cega. Ele precisa ser esterilizado antes do uso. É usado para enganchar o nervo vago e segurá-lo no momento da separação e injeção.</td></tr><tr><td>Microscópio de dissecação</td><td>Motic&nbsp;</td><td>SMZ-171-BLED (binóculo com luzes)</td> <td>Usado para ampliar a área anatômica crifical no momento da separação do nervo vago, injeção e para verificar o vazamento da injeção.</td></tr><tr><td>Folha de cortinado&nbsp;</td><td>Dynarex</td><td>Reorder#8122</td><td>Usado como cortina após a esterilização.</td></tr><tr><td>Aplicadores de Ponta de Algodão Dukal, Não Estéril</td><td>Item Dukal</td><td>9003</td><td>Usado para separação de tecido, precisa esterilizar antes do uso.</td></tr><tr><td>Dumont #7 - Fórceps Fino</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>11274-20</td><td>Usado para separar o nervo vago esquerdo da artéria carótida comum. É curvo tão fácil de usar.</td></tr><tr><td>Sutura de Monofilamento Não Tingida Ethicon PDS II - SUTURA, 4/0 18 PDS II CLR MONO PS</td><td>Ethicon</td><td>VA - Z682G</td><td>Usado na sutura da ferida.</td></tr><tr><td>Sutura de Nylon Ethilon Monofilamento Preto</td><td>Ethicon</td><td>1856G</td><td>Usado na sutura da ferida se for usada sutura não absorvente. Também usado para enganchar o dente de rato para fixar o nariz dentro do cone do nariz.</td></tr><tr><td>Fórceps Fino - Acabamento Espelhado</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>11412-11</td><td>Usado no momento da separação do nervo vago da artéria carótida comum. Isso é direto.</td></tr><tr><td>Tesoura Fina - Sharp</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-09</td><td>Ued para cortar tecido.</td></tr><tr><td>Solução de limpeza</td><td>Hamilton Hamilton</td><td>HT18311</td><td>Usado para limpar o Hamilton após o uso.</td></tr><tr><td>Agulha Hamilton, 27G, Agulha RN de Cubo Pequeno, 2", PT3, 6/PK</td><td>Hamilton</td><td>7762-01</td><td>Usado para conectar BD Intramedic&trade; Tubulação PE.</td></tr><tr><td>Seringa Hamilton, 710RN&nbsp;</td><td>Hamilton</td><td>7638-01</td><td>Usado para segurar a droga no momento da injeção do nervo vago.</td></tr><tr><td>Seringa de Insulina</td><td>EXEL INT, Ponto de conforto</td><td>REF 26027</td><td>Usado para injetar carprofeno e anestésicos locais.</td></tr><tr><td>Lidocaína 2% Injeção</td><td>Covetrus</td><td>Reorder#002468</td><td>Usado para misturar com Bupivacaína e injetar no local da incisão.&nbsp;</td></tr><tr><td>Luxol Fast Blue MBSN</td><td>Acros Organics</td><td>212170250</td><td>Corante visível dentro do nervo, usado para misturar com a droga para que a mistura de injeção seja visível.</td></tr><tr><td>Micro esterilizador do grânulo com ferramentas finas da ciência dos grânulos de vidro</td><td></td><td>Artigo no. 18090-46</td><td>Usado para esterilizar ferramentas cirúrgicas entre a cirurgia do rato.</td></tr><tr><td>Agulhas NanoFil-NF35BV-2&nbsp;</td><td>Instrumento de Precisão Mundial</td><td>NC9708956</td><td>Usado para injetar uma mistura de drogas e corantes dentro do nervo vago.</td></tr><tr><td>Porta-agulhas Olsen-Hegar com cortadores de sutura</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>12002-12</td><td>Usado na sutura de feridas.</td></tr><tr><td>Filme de Embalagem de Laboratório Parafilm M, 4 Polegadas x 125 Pés, 1 Rolo por Caixa, 12 Contagem</td><td>Honestmed</td><td>PM#996</td><td>Usado para segurar os 5 uL aliquotados de mistura de droga-corante para que o carregamento da mistura de droga-corante no tubo intradérmico BDTM seja preciso.&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Almofadas de preparação de álcool PDI</td><td>Honestmed</td><td>NDC 10819-3914-2</td><td>Usado para desinfetar a área cirúrgica.</td></tr><tr><td>Esponjas de Gaze Tipo VII Estéreis Premium Care, 8-Ply, 2" x 2"</td><td>Item Dukal</td><td>C5119</td><td>Usado como cushon sob o pescoço de rato no momento da cirurgia.&nbsp;</td></tr><tr><td>Imprensa' n Filme de Vedação</td><td>Glad</td><td></td><td>Usado para cobrir um rato no momento da cirurgia como uma cortina.&nbsp;</td></tr><tr><td>Conjunto de Retrator de Rato</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Surgi 5002</td><td>Usado para manter a incisão aberta para que seja fácil separar o nervo vago da artéria carótida.</td></tr><tr><td>RightTemp Jr.</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td></td><td>20,3 cm L x 25,4 cm L (8 pol. L x 10 pol. L), usado para manter o rato aquecido.</td></tr><tr><td>S& Pinça T - Pontas SuperGrip Ferramentas</td><td>de Ciência Fina</td><td>00632-11</td><td>Usado no momento da sutura para segurar o tecido sem danos.</td></tr><tr><td>S& Pinça de amarração de sutura T</td><td>Fine Science Tools</td><td>00272-13</td><td>Usado para apertar a sutura.</td></tr><tr><td>Lâmina de bisturi #15</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td>Usada para fazer uma incisão na pele no lado ventral do pescoço.</td></tr><tr><td>Cabo de bisturi-#7</td><td>Fine Science Tools</td><td>10007-12</td><td>Usado para segurar a lâmina do bisturi.</td></tr><tr><td>Bomba de Seringa</td><td>&nbsp; KD Scientific</td><td>78-81-8052GL</td><td>&nbsp; A #D107034 serial, modelo # LEGATO-180, é uma bomba programável que pode bombear pequenos volumes de mistura sob um programa.</td></tr><tr><td>Recarga de Ponta de Filtro TipOne Starter Systems</td><td>USA Scientific</td><td>Item #1120-3510</td><td>Usado para pipetar a mistura de drogas e corantes.</td></tr><tr><td>Vaporizador para Isoflurano, Cheio de Funil</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Vetflow 1231</td><td>Usado para anestesiar ratos.</td></tr><tr><td>Adesivos de tecido Vetbond</td><td>3M Ciência aplicada à identificação de vida</td><td>B00016067</td><td>Usado para selar o tecido no local da ferida cortada se a sutura não for perfeita.</td></tr><tr><td>Kit de Tosquiadeira Sem Fio Profissional Wahl BravMini+</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>CL7300-Kit</td><td>Usado para cortar cabelo de rato.</td></tr></tbody></table>

protocolo de injeção direta do nervo vago para ratos

Direct Vagus Nerve Injection Protocol For Rats

Seis ratos adultos (3 machos e 3 fêmeas) foram utilizados no presente estudo. De seis, um rato foi injetado várias vezes para demonstrar uma condição de falha na injeção que mostra uma difusão de corante ao redor do local da injeção Figura 5A. Todos os outros ratos apresentaram injeção lisa e coloração nervosa, conforme mostrado na Figura 4B e na Figura 5B.
<p class="jove_content" fo:keep-togethe...

Protocolo de injeção direta do nervo vago para ratos

There is a relative abundance of strategies and methodologies to facilitate drug delivery to the central nervous system. However, drug delivery directly ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Fonte: Sanchez, C. A., et al. Preparação de eletrodos de estimulação de nervos periféricos para implantação crônica em ratos. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demonstra a estimulação do nervo vago em um rato acordado. Um rato com um eletrodo de manguito de nervo periférico crônico implantado e treinado em uma tarefa de pressão de alavanca é conectado a um gerador de estímulo por meio de uma tampa de cabeça implantada. O nervo vago é estimulado imediatamente após cada pressão bem-sucedida da...

Estimulação do nervo vago por meio de eletrodos de manguito de nervo periférico implantados cronicamente em ratos

Este vídeo descreve o registro intracelular in vivo de motoneurônios de ratos sob estimulação transespinhal por corrente contínua. O protocolo descreve como medir as propriedades da membrana e registrar o disparo rítmico de motoneurônios antes, durante e após a polarização anódica ou catódica da medula espinhal.

Estimulação transespinhal por corrente contínua do motoneurônio espinhal de um rato

Fonte: Grames, M. S., et al. Métodos e dicas para administração intravenosa de vírus adeno-associado a ratos e avaliação da transdução do sistema nervoso central. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a injeção na veia da cauda do vírus adeno-associado recombinante (AAV) em ratos. Após a injeção na veia lateral da cauda, o vírus entra na corrente sanguínea, circula pelo coração e chega ao cérebro, onde entra nos neurônios e facilita a produção de proteínas-alvo para aplicações...

 Administração intravenosa de vetores virais adeno-associados recombinantes em modelo de rato 

A sinalização vagal aferente transmite informações importantes ao sistema nervoso central a partir de receptores localizados em órgãos do abdômen e tórax. Os gânglios nodosos dos nervos vagos contêm muitos tipos de receptores que modulam a atividade vagal. Este protocolo descreve um método de injeções locais de neuroquímicos nos gânglios nodosos.

Um método de Nodoso Gânglios Injecção em ratos Sprague-Dawley

Estimulação do nervo vago (VNS) emergiu como uma ferramenta para induzir plasticidade sináptica alvejado na parte frontal do cérebro para modificar uma série de comportamentos. Este protocolo descreve como implementar VNS para facilitar a consolidação da memória de extinção do medo.

Estimulação do nervo vago como uma ferramenta para induzir plasticidade em Pathways relevantes para a Aprendizagem Extinção

A estimulação do nervo vago provou ter uma forte eficácia na diminuição da inflamação periférica. Aqui, apresentamos um protocolo de estimulação do nervo vago modificado que permite exames adicionais dos mecanismos anti-inflamatórios colinérgicos em respostas inflamatórias limitadas.

Aumento do tempo de recuperação e diminuição da Administração LPS para estudar o nervo vago Estimulação Mecanismos em respostas inflamatórias Limitada

Aqui nós apresentamos um método para validar a cauda veia injeções em ratos utilizando infravermelho fluorescência dados de imagem de corantes incorporados agentes ou sondas biológicas. A cauda é fotografada antes e após a injeção, o sinal fluorescente é quantificado, e é feita uma avaliação da qualidade da injeção.

Nova prática recomendada para validar a cauda veia injeções no rato com agentes próximo-infravermelho-rotulado

Aqui, descrevemos um método para entregar drogas ao sistema nervoso central do rato implantando um cateter no espaço intrathecal lombar da espinha. Nós nos concentramos na entrega de oligonucleotídeos antisenso, embora este método seja adequado para a entrega de outras modalidades terapêuticas também.

Entrega intrathecal de oligonucleotides do antisense no sistema nervoso central do rato

Este protocolo descreve a gravação intracelular in vivo de motoneurons lombares de rato com estimulação simultânea de corrente trans-espinhal. O método permite medir as propriedades da membrana e registrar disparos rítmicos de motoneurons antes, durante e depois da polarização anodal ou catódal da medula espinhal.

In Vivo Intracelular Gravação de Motoneurons vertebrais de rato identificados tipo durante estimulação de corrente direta trans-espinhal

O presente protocolo descreve a técnica cirúrgica para implantação de um arranjo de eletrodos no nervo vago abdominal em ratos, juntamente com métodos para testes eletrofisiológicos crônicos e estimulação com o dispositivo implantado.

Cirurgia de Implante para Estimulação do Nervo Vago Abdominal e Estudos de Gravação em Ratos Acordados

Este protocolo descreve uma técnica única usando uma abordagem transconjuntival para acessar o nervo óptico de rato para injeções.

Abordagem transconjuntival para injeção no nervo óptico de rato

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Protocolo de injeção direta do nervo vago para ratos

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