Name: Análise do fluxo metabólico ex vivo em macrófagos esplênicos e cardíacos e monócitos da medula óssea (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 26 s
Description: Aprenda análise de fluxo metabólico ex vivo em macrófagos esplênicos e cardíacos e monócitos da medula óssea. Este método combina extração celular precisa com abordagens genéticas in vivo para estudar imunometabolismo no infarto do miocárdio.

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<ol><li>Ma, Y., Mouton, A. J., Lindsey, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+macrophage+biology+in+the+steady-state+heart%2C+the+aging+heart%2C+and+following+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac macrophage biology in the steady-state heart, the aging heart, and following myocardial infarction.</a> Transl Res. 191, 15-28 (2018).</li>
<li>Mouton, A. J., Li, X., Hall, M. E., Hall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity%2C+hypertension%2C+and+cardiac+dysfunction%3A+Novel+roles+of+immunometabolism+in+macrophage+activation+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Obesity, hypertension, and cardiac dysfunction: Novel roles of immunometabolism in macrophage activation and inflammation.</a> Circ Res. 126 (6), 789-806 (2020).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dimethyl+fumarate+preserves+left+ventricular+infarct+integrity+following+myocardial+infarction+via+modulation+of+cardiac+macrophage+and+fibroblast+oxidative+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Dimethyl fumarate preserves left ventricular infarct integrity following myocardial infarction via modulation of cardiac macrophage and fibroblast oxidative metabolism.</a> J Mol Cell Cardiol. 158, 38-48 (2021).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+in+glucose+metabolism+reflect+polarization+in+resident+and+monocyte-derived+macrophages+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Temporal changes in glucose metabolism reflect polarization in resident and monocyte-derived macrophages after myocardial infarction.</a> Front Cardiovasc Med. 10, 1136252(2023).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+improves+left+ventricular+function+but+not+macrophage-mediated+inflammation+following+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism improves left ventricular function but not macrophage-mediated inflammation following myocardial infarction.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 327 (3), C571-C586 (2024).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+macrophage+polarization+over+the+myocardial+infarction+time+continuum%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Mapping macrophage polarization over the myocardial infarction time continuum.</a> Basic Res Cardiol. 113 (4), 26(2018).</li>
<li>XF software. Agilent Seahorse Analytics. , Agilent Technologies, Inc. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485">https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485</a> (2025).</li>
<li>Matsuura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+suppresses+glucose+uptake+and+glycolysis+in+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Diabetes suppresses glucose uptake and glycolysis in macrophages.</a> Circ Res. 130 (5), 779-781 (2022).</li>
<li>Alexander, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bmal1+integrates+mitochondrial+metabolism+and+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Bmal1 integrates mitochondrial metabolism and macrophage activation.</a> Elife. 9, e54090(2020).</li>
<li>Wan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-34a+regulates+macrophage-associated+inflammation+and+angiogenesis+in+alcohol-induced+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol+Commun%22%5BJournal%5D)">miR-34a regulates macrophage-associated inflammation and angiogenesis in alcohol-induced liver injury.</a> Hepatol Commun. 7 (4), e0089(2023).</li>
<li>Nomura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+oxidation+in+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fatty acid oxidation in macrophage polarization.</a> Nat Immunol. 17 (3), 216-217 (2016).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolytic+reprogramming+in+macrophages+and+MSCs+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolytic reprogramming in macrophages and MSCs during inflammation.</a> Front Immunol. 14, 1199751(2023).</li>
<li>Desousa, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+ATP+production+rates+using+the+Seahorse+XF+Analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Calculation of ATP production rates using the Seahorse XF Analyzer.</a> EMBO Rep. 24 (10), e56380(2023).</li>
<li>Lewis, A. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+immunometabolic+cardiac+inflammation+imaging+using+hyperpolarized+magnetic+resonance%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Noninvasive immunometabolic cardiac inflammation imaging using hyperpolarized magnetic resonance.</a> Circ Res. 122 (8), 1084-1093 (2018).</li>
<li>Walls, J., Romero, M. Assessing T cell bioenergetic poise and spare respiratory capacity using extracellular flux analysis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalls%2C+J+%22Agilent+Technologies+application+note%22">Agilent Technologies application note</a>. , 5994-4494 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Microesferas Anti-CD11b UltraPure, camundongo</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-126-725</td><td></td></tr><tr><td>Microesferas Anti-Ly6G UltraPure, camundongo</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-120-337</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase tipo II</td><td>Worthington</td><td>NC9522060</td><td></td></tr><tr><td>Dnase tipo I</td><td>MillPore Sigma</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS Octo Dissociator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-427</td><td></td></tr><tr><td>Tubos C GentleMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>Tubos de dissociação celular MACS&nbsp;</td></tr><tr><td>Solução salina balanceada Hank</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-025-076</td><td></td></tr><tr><td>LS Colunas Magnéticas</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MS Colunas Magnéticas&nbsp;</td>Kit de Isolamento de Monócitos <td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Medula Óssea, camundongo</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-629</td><td>inclui 1 mL de coquetel de anticorpos de biotina de monócitos, 2 mL de microesferas anti-biotina, 1 mL de reagente bloqueador FcR</td></tr><tr><td>Separador OctoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-108</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de pré-separação (30 &micro; m)</td> <td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>Separador QuadroMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-051</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Lise de Glóbulos Vermelhos (10x)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-183</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 Analisador</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 FluxPak</td><td>Agilent</td><td>103792-100</td><td>18 cartuchos de sensor Pro, 18 microplacas Pro Cell Cutlure, 1 frasco de solução calibrante Seahorse XF</td></tr><tr><td>Kit de teste de estresse de glicólise Seahorse XF</td><td>Agilent</td><td>103020-100</td><td>6 bolsas de uso único, cada uma com glicose, oligomicina e 2-desoxi-D-glicose</td></tr><tr><td>Kit de teste de estresse mitocondrial Seahorse XF</td><td>Agilent</td><td>103015-100</td><td>6 bolsas de uso único, cada uma com oligomicina, FCCP e rotenona/antimicina A</td></tr><tr><td>Meio Seahorse XF RPMI, pH 7,4, 500 mL</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td>sem vermelho de fenol, bicarbonato, glicose, piruvato ou glutamina</td></tr></tbody></table>

análise do fluxo metabólico ex vivo em macrófagos esplênicos e cardíacos e monócitos da medula óssea

Analyzing Ex Vivo Metabolic Flux in Splenic and Cardiac Macrophages and Bone Marrow Monocytes

O número típico de células obtidas dos diferentes tecidos depende do tamanho, idade e sexo do animal. Para um camundongo macho adulto (ou seja, 16 semanas de idade, ~ 30 g), o baço pode produzir 3,0-4,0 × 106 macrófagos, enquanto a medula óssea (duas tíbias e dois fêmures) normalmente produz 1,0-1,5 × 106 monócitos (Figura 2A). O coração infartado normalmente produz números altos também, dependendo do dia após o IM 4,5,6<sup class="xre...

Análise do fluxo metabólico ex vivo em macrófagos esplênicos e cardíacos e monócitos da medula óssea

Metabolic reprogramming is a hallmark of monocyte/macrophage activation and polarization between pro- and anti-inflammatory states. For example, ...

analyzing-ex-vivo-metabolic-flux-splenic-cardiac-macrophages-bone

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Os monócitos são os principais reguladores da imunidade inata e desempenham um papel crítico na renovação do sistema fagocítico mononuclear periférico e em caso de inflamação. Este manuscrito descreve o procedimento de imagem em tempo real da medula óssea da calvária de camundongos para estudar o mecanismo de mobilização de monócitos.

Acompanhando Rato Medula Óssea monócitos<em&gt; In Vivo</em

A reprogramação metabólica é uma característica e pré-requisito para a polarização de macrófagos M1 e M2. Este manuscrito descreve um ensaio para a medição de parâmetros fundamentais de glicólise e função mitocondrial em macrófagos derivados da medula óssea de camundongos. Esta ferramenta pode ser aplicada para investigar como fatores específicos afetam o metabolismo e o fenótipo do macrófago.

Caracterização metabólica de Polarizada M1 e M2 macrófagos da medula óssea derivadas usando análises em tempo real do fluxo extracelular

O estudo do metabolismo está se tornando cada vez mais relevante para a pesquisa imunológica. Aqui, apresentamos um método otimizado para medir a glicólise e a respiração mitocondrial em esplenócitos de camundongos e linfócitos T e B.

Um protocolo otimizado para analisar glicólise e respiração mitocondrial nos linfócitos

Este protocolo apresenta um método simples e eficiente de isolar, identificar e quantificar as células imunes que residem no miocárdio de ratos durante o estado estacionário ou inflamação. O protocolo combina digestão enzimática e mecânica para a geração de uma suspensão de célula única que pode ser mais analisada por citometria de fluxo.

Isolamento e identificação de células do sistema imunológico Extravascular do coração

Aqui nós apresentamos um protocolo para análise de seu estado metabólico e o isolamento de células leucêmicas da medula óssea de pacientes de leucemia. Avaliação do perfil metabólico das células de leucemia primária poderia contribuir para melhor caracterizar a demanda de células primárias e poderia levar a medicina mais personalizada.

Avaliação do perfil metabólico das células de leucemia primária

As células progenitoras de tronco hematopoiético (HSPCs) transitam de um estado quiescente para um estado de diferenciação devido à sua plasticidade metabólica durante a formação sanguínea. Aqui, apresentamos um método otimizado para medir a respiração mitocondrial e a glicolíse dos HSPCs.

Análise do metabolismo hematopoiético da pilha do progenitor da haste

O método aqui apresentado resume protocolos otimizados para avaliação de bioenergésicos celulares em haste hematopoiéticas não aderentes e células progenitoras primitivas (HSPCs) utilizando o analisador de fluxo extracelular para medir a taxa de acidificação extracelular (ECAR) e a taxa de consumo de oxigênio (OCR) dos HSPCs em tempo real.

Avaliação de Bioenergésicos Celulares em Tronco Hematopoiético de Camundongos e Células Progenitoras Primitivas usando o Analisador de Fluxo Extracelular

Aqui, descrevemos um protocolo simples para o isolamento e coloração de células murinas da medula óssea para fenótipo de células-tronco hemopoéticas e progenitoras, juntamente com células-tronco endoteliais e mesenquimais de nicho de suporte. Um método para enriquecer células localizadas em áreas endosteal e medula óssea central também é incluído.

Análise por Citometria de Fluxo de Medula Óssea Purina, Células-Tronco e Progenitoras Hematopoéticas e Células de Nicho Estromal

Usando um modelo explantado ex vivo , pequenos pedaços da porção rostral do tecido adiposo branco visceral de camundongos magros são cultivados por 7 a 10 dias, permitindo a indução e o estudo da inflamação do tecido adiposo conforme ocorre durante a alimentação rica em gordura.

Um modelo de camundongo ex vivo para inflamação do tecido adiposo com dieta rica em gordura

Toxoplasma gondii se converte em uma forma de cisto em resposta ao estresse ambiental, que pode ser imitada em modelos de cultura de tecidos. Este vídeo demonstra técnicas para examinar a formação de parede do cisto, ativando derivadas da medula óssea macrófagos ou alterar o pH de crescimento médio em células de fibroblastos.

Toxoplasma gondii Formação parede do cisto no Activated derivadas da medula óssea macrófagos e Condições Bradyzoite

Aprenda análise de fluxo metabólico ex vivo em macrófagos esplênicos e cardíacos e monócitos da medula óssea. Este método combina extração celular precisa com abordagens genéticas in vivo para estudar imunometabolismo no infarto do miocárdio.

Análise do fluxo metabólico ex vivo em macrófagos esplênicos e cardíacos e monócitos da medula óssea

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