Modelo murino de periodontite avançada induzida por ligadura de náilon no segundo molar superior

O escopo de nossa pesquisa é estudar os fatores celulares e moleculares que favorecem a periodontite, para os quais usamos um modelo murino de periodontite induzida por ligadura.

Pesquisas recentes estabeleceram a importância da inflamação. A disbiose e as doenças sistêmicas são fatores determinantes no desenvolvimento da periodontite.

A tecnologia recentemente utilizada na periodontia inclui modelos animais, alguns procuram diferentes moléculas, sequenciamento proteômico, citometria de fluxo e histologia, entre outros.

Os desafios experimentais atuais estão relacionados à compreensão da interação entre doenças sistêmicas e periodontite.

Usamos um modelo murino de periodontite por ligadura para demonstrar que as citocinas pró-inflamatórias A e S estão envolvidas no desenvolvimento da periodontite durante a gravidez.

[Narrador] Para começar, coloque um mouse anestesiado em uma mesa de trabalho voltada para cima com a cabeça voltada para o operador. Puxe suavemente cada perna sem tensão e prenda-as com fita micropore para evitar movimentos involuntários bruscos. Cubra o mouse com um cobertor ou gaze para manter o calor do corpo. Coloque uma extremidade de um elástico ortodôntico ao redor dos incisivos superiores e prenda a outra extremidade a um suporte superior sem aplicar tensão. Em seguida, coloque um segundo elástico ortodôntico ao redor dos incisivos inferiores e prenda-o a um suporte inferior usando um elástico. Agora insira os separadores de bochecha e mova cuidadosamente a língua para um lado para melhorar a visibilidade. Posicione o microscópio para visualizar os molares superiores usando a objetiva de menor ampliação. Uma vez localizado, maior ampliação para otimizar o conforto e o foco do operador. Quando a imagem estiver nítida, identifique o molar maior e proximal M1, o próximo molar M2 e o molar menor e distal M3. Use uma sutura de náilon 6-0 para a colocação da ligadura, pois causa menos danos mecânicos em comparação com suturas mais largas. Usando uma pinça de tecido, segure a ponta distal da sutura de náilon 6-0 e coloque-a na base da papila do lado palatino na distal de M2. Aplique uma leve pressão através da base do espaço palatal interproximal para avançá-lo em direção à superfície bucal. Quando a sutura cruzar, puxe-a pelo espaço interproximal em direção ao lado vestibular. Agora, coloque a ponta da sutura na base da área interproximal na superfície mesial de M2 do lado vestibular. Empurre-o suavemente para cruzar o espaço interproximal e passe-o de volta pelo espaço vestibular até o palatino. Puxe suavemente a sutura de náilon 6-0. Segure a ponta com uma pinça de tecido ajustada em torno de M2 e prenda a sutura usando três nós simples. Em seguida, corte a sutura com uma tesoura fina. Para soltar o mouse, primeiro remova o elástico ao redor dos incisivos inferiores e depois os separadores de bochechas. Em seguida, remova o elástico ao redor dos incisivos superiores e a fita micropore das pernas. Agora remova o mouse da mesa de trabalho e mantenha a língua de lado para manter as vias aéreas abertas e evitar bloqueios. Enrole o mouse em gaze ou pano e coloque-o virado para cima. Mantenha o animal aquecido, coberto com pano ou gaze e sob observação até que esteja completamente acordado. Aplique uma gota de hipromelose em cada olho até que o mouse possa piscar normalmente. Em seguida, devolva-o à sua gaiola normal. Para verificar a permanência da ligadura, pegue o mouse. segure a cabeça e o corpo com firmeza e use uma pinça de tecido para abrir a boca. Sob a luz da lâmpada, observe a sutura de náilon 6-0 ao redor de M2. Para a confirmação da formação de biofilme por histologia, colher os maxilos dos animais eutanasiados após 30 dias. Lave os tecidos em solução de cloreto de sódio a 0,9% e coloque-os em tubos de microcentrífuga rotulados. Fixe as amostras em solução de paraformaldeído a 4% por duas horas sob agitação. Em seguida, lave as amostras fixas com água da torneira por duas horas. Em seguida, descalcificar as amostras em 20 volumes de EDTA a 4% em pH 7,3 por 20 dias, trocando o EDTA a cada quatro dias. Em seguida, incorpore as amostras em parafina. Corte cinco seções de micrômetros da área M2 e core-as com hematoxilina e eosina. Observe as seções coradas em um microscópio óptico para descrever alterações no epitélio do sulco, fibras gengivais e periodontais, altura e integridade da crista alveolar. Meça a perda de inserção determinando a distância entre a junção cemento-esmalte e o ponto mais alto da crista óssea usando um programa de edição digital. Após a análise histométrica, analise os dados dos grupos controle e tratamento periodontal usando o teste U de Mann-Whitney. A periodontite induz perda de tecido em camundongos, inflamação, sangramento e formação de bolsa periodontal na margem gengival no dia 30, em contraste com o grupo controle. A análise histológica confirmou dano estrutural significativo no grupo TP, com presença de bolsas periodontais, descolamento de fibras e migração apical do epitélio. Perda de núcleos celulares na gengiva e osso dos lados vestibular e palatino também foi observada. Em contraste, o grupo CTL apresentou histologia saudável. A análise quantitativa revelou um aumento significativo da perda de inserção no grupo TP com perda do lado vestibular em aproximadamente 209 micrômetros e lado palatino em aproximadamente 254 micrômetros.