Name: Caracterização da automontagem reversível dependente de pH de colóides de ouro revestidos com beta-amiloide 1-40 (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprenda a caracterizar a automontagem reversível dependente de pH de colóides de ouro revestidos com beta-amiloide 1-40 usando espectroscopia SERS. Este método revela modos vibracionais críticos para a conformação proteica.

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5 minutes

1. Preparação de nanopartículas de ouro revestidas com Aβ 1-40
<ol>
	<li>Adicione um volume de 1 mL de água destilada deionizada a 1 mg de Aβ 1-40 liofilizado (MW: 4,2 kDa, 98% de pureza de HPLC) usando uma agulha de seringa. Misture a solução com um misturador de vórtice por aproximadamente 30 s e certifique-se de que nenhuma partícula sólida seja observada na solução à temperatura ambiente (RT; ~ 20 ° C).<ol>
		<li>Prepare todas as soluções de estoque usando água desionizada e destilada (~ 18 MΩ · cm).</li>
		<li>Identifique espectroscopicamente a concentração usando a absorção de tirosina a 275 nm32, que tem um coeficiente de extinção molecular ε275 de 1390 cm-1 · M-1.</li>
		<li>Armazenar soluções de estoque de Aβ 1-40 a -80 °C. (Ver Tabela de Materiais para os produtos comerciais Aβ 1-40.)</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Descongele a solução estoque de peptídeos aproximadamente 5 minutos antes da coleta de dados. Misture um volume de 8 μL da solução peptídica com 800 μL de partículas coloidais de ouro em um tubo de centrífuga de 15 mL. Adicione um volume de 4,2 mL de água destilada deionizada e, em seguida, vortex a amostra por 10 s 30,31,33,34.</li>
	<li>Fixe a concentração de peptídeos Aβ 1-40 em 1,8 nmol e varie a proporção de peptídeos Aβ 1-40. O número de colóides de ouro variou entre ~500:1 a ~2000:125.</li>
</ol>
2. Mudança de pH iterativa e monitoramento do deslocamento de banda SPR correspondente
<ol>
	<li>Defina a temperatura da solução em um determinado valor (por exemplo, 25 ° C) usando a unidade de controle de temperatura do espectrofotômetro ultravioleta-visível-infravermelho próximo (UV-Vis-NIR).</li>
	<li>Monitore o pH inicial da solução de amostra usando um medidor de pH e ajuste-o ligeiramente abaixo do pH 7. Coletar o espectro de absorção na faixa entre 400 nm e 1000 nm.</li>
	<li>Altere o pH da amostra para ~pH 4 (ou seja, pH 4,0 ± 0,3) adicionando volumes de 10 μL de HCl 0,1 M e colete o espectro de absorção entre 400 nm e 1000 nm.</li>
	<li>Altere o pH da amostra para ~pH 10 (ou seja, pH 10 ± 0,3) adicionando volumes de 10 μL de NaOH 0,1 M e colete o espectro de absorção entre 400 nm e 1000 nm.</li>
	<li>Alterar o pH entre pH 4 e pH 10 com HCl e NaOH 10 vezes e recolher continuamente o espectro de absorção a 25 ± 0,2 °C29,30. NOTA: Para todas as soluções de amostra, a densidade óptica do pico da banda SPR foi mantida em torno de 0,2. Espera-se um efeito tampão devido à solução tampão residual em uma solução. Assim, o valor final do pH foi determinado após a confirmação do equilíbrio. O valor do pH foi medido diretamente em uma célula de cubeta de amostra usando um microeletrodo de pH, que tem uma precisão de ±0,005 pH.</li>
	<li>Obtenha o conjunto de dados de comprimentos de onda do código padrão americano para intercâmbio de informações (ASCII) em função da absorbância. Extraia a posição média dos picos da banda usando o programa Peak Fit .<ol>
		<li>Plote o conjunto de dados para visualizar a densidade óptica em função do comprimento de onda (nm) usando a função Plot .</li>
		<li>Marque os comprimentos de onda de pico iniciais λ1, λ2 e λ3 selecionando suas posições aproximadas nos dados plotados e ajuste os dados usando a função RUN .</li>
		<li>Obtenha o gráfico contendo o pico central de cada (λi), XCi, com a área de cada banda (Ai).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Exporte as posições e áreas de pico extraídas para um programa de planilha e calcule a posição média de pico em um determinado pH.<ol>
		<li>Determine o fator de ponderação ai de cada centro de pico λi comparando a área da banda (Ai) com a área total de todas as bandas como: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq01.jpg" style="margin: auto;">.</li>
		<li>Extrair a posição <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> média do pico (pH) utilizando a Eqn. (1). 
		<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq03.jpg" style="margin: auto;">(1)</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Gere um gráfico de reversibilidade usando o seguinte processo:<ol>
		<li>Tabule as posições médias de pico, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">, em função de cada número de "operação", n como <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> vs. n. Faça com que o número da operação, n, seja 1 para a amostra antes da adição de ácido a ~ pH 7. Aumente o número de operação em 1 de cada vez, alterando o pH para ~pH4 com HCl ou pH para ~pH 10 com NaOH. Faça n ser par em uma condição ácida (ou seja, ~ pH 4) e ímpar para ser uma condição básica (ou seja, pH 10).</li>
		<li>Analise a posição de pico em cada n, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> (n) = λ(n), usando a fórmula30 
		<img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq04.jpg" style="margin: auto;">(2) NOTA: Represente uma posição de pico média inicial em n = 1 por A. Expresse os parâmetros B e C como o deslocamento da posição de pico dependente de n. Faça o parâmetro D como uma amplitude do fator de amortecimento, E, de repetição. Use a função seno para mostrar a ondulação da posição do pico em função de n.</li>
		<li>Transporte o conjunto de dados de (x, y) para o software Origin e plote.</li>
		<li>Forme a função personalizada dada na Eqn. (2) em Função de análise de ajuste de curva não linear. Digite os valores iniciais de A, B, C, D e E e clique em EXECUTAR para concluir o ajuste.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Imagem TEM<ol>
		<li>Faça as amostras MET dos colóides de ouro de 20 nm revestidos com Aβ 1-40 com grades de cobre revestidas com Formvar. Examinar as amostras com um MET operado a 80 kV.</li>
		<li>Colete imagens com uma ampliação nominal de 28.000x ou 71.000x em uma câmera digital CCD (AMT) modelo XR-40 de 4 megapixels. Colete as imagens TEM para ouro de 20 nm revestido com Aβ 1-40 em cada número de operação n = 1 (~pH 7), n = 2, 4, 6, 8 e 10 (pH 4) e n = 3, 5, 7 e 9 (pH 10).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Imagem Raman e investigação da agregação reversível
<ol>
	<li>Colocar 100 μL de solução num disco de mica (diâmetro de 1 cm) para cada amostra no número de operação n. Secar as amostras durante a noite antes da medição.</li>
	<li>Colete imagens de luz branca em cada número de operação n. Prepare a amostra separada em um disco de mica, pois o pH foi continuamente alterado entre ~ pH 4 e ~ pH 10 para cada número de operação n (Figura 3).</li>
	<li>Colete a imagem Raman em cada número de operação n com um laser de comprimento de onda de λ = 633 nm a 0,5 ± potência de 0,05 mW com resolução espacial de ~ 0,43 μm em uma grade composta por 100 × 100 pixels com um tempo de integração de 500 ms / espectro para a região entre ~ 200 cm-1 e ~ 2.800 cm-1 (Figura 4).</li>
	<li>Plote o espectro representativo para cada n alinhado em função de n e construa o espectro SERS tridimensional em função de n para Aβ1-40 revestido de ouro de 20 nm (Figura 5A). Utilize a vista superior do espectro SERS tridimensional como um mapa de contorno (Figura 5B) para extrair os modos específicos associados a uma condição de pH específica (ou seja, ~ pH 4 e ~ pH 10). Extraia quaisquer características espectrais aprimoradas para apenas npar ou apenas nímpar.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>O peptídeo beta amilóide 1-40 (A&beta; 1&ndash; 40 peptídeo)</td><td>r-Peptídeo (Bogart, GA, EUA)</td><td>A-1156-2</td><td></td></tr><tr><td>Câmera digital CCD</td><td>AMT</td><td>XR-40 4-megapixel CCD&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Água destilada deionizada do sistema de água Milli-Q-</td><td>Millipore Sigma (Burlington, MA, EUA)</td><td>Milli-Q IQ 7000</td><td></td></tr><tr><td>Freezer -86 oC</td><td>Thermo Scientific</td><td>Revco Chilly Willy&nbsp; ID da unidade da série RLE 187004 número de compilação 40.04</td><td></td></tr><tr><td>Colóide de ouro (10 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Califórnia, EUA)</td><td>15703-20</td><td></td></tr><tr><td>Colóide de ouro (100 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Califórnia, EUA)</td><td>15711-22</td><td></td></tr><tr><td>Colóide de ouro (15 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Califórnia, EUA)</td><td>15704-20</td><td></td></tr><tr><td>Colóide de ouro (20 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Califórnia, EUA)</td><td>15705-20</td><td></td></tr><tr><td>Colóide de Ouro (30 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Califórnia, EUA)</td><td>15706-21</td><td></td></tr><tr><td>Colóide de Ouro (40 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Califórnia, EUA)</td><td>15707-21</td><td></td></tr><tr><td>Colóide de Ouro (50 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Califórnia, EUA)</td><td>15708-21</td><td></td></tr><tr><td>Colóide de Ouro (60 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Califórnia, EUA)</td><td>15709-22</td><td></td></tr><tr><td>Colóide de ouro (80 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Califórnia, EUA)</td><td>15710-22</td><td></td></tr><tr><td>Discos de mica V1AFM de maior grau 10 mm</td><td>Ted Pella Inc.</td><td>#50</td><td></td></tr><tr><td>Solução Padrão de Ácido Clorídrico, 1.0 N</td><td>Fluka</td><td>Lote# SHBB4705V&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 318949-2L</td><td></td></tr><tr><td>Macro quartz quvette Light Path 10 mm</td><td>Fire Fly Science&nbsp;</td><td>Tipo1-MC-Path10mm</td><td></td></tr><tr><td>Micro eletrodo</td><td>de pH HORIBA</td><td>Modelo 9618S (MFG No. 9Y8E0050)</td><td></td></tr><tr><td>Programa de Ajuste de Pico</td><td>Origem (Northampton, MA, EUA)</td><td>OrigemPro2018b (64-bit) b9.5.5.409 (Acadêmico)</td><td></td></tr><tr><td>Solução tampão de pH 4.00&nbsp;</td><td>VWR</td><td>Cat No. 34170-127</td><td></td></tr><tr><td>pH 7.00 Solução Tampão</td><td>Fisher Chemical</td><td>SB107-4 Lote 191041</td><td></td></tr><tr><td>medidor de pH</td><td>HORIBA</td><td>Modelo F-72G (MFG No. B27M0017)</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de pipeta &nbsp; Maxi Tips 1&ndash; 5 mL</td><td>Fisher&nbsp; &nbsp;</td><td>02-707-467</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de Pipeta 10 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-135</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de Pipeta 1000 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-156</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de Pipeta 1&ndash; 200 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-143</td><td></td></tr><tr><td>Pipetter Fisher Marca Elite 0.5&ndash; 5 mL</td><td></td><td>Fisher QU05317</td><td></td></tr><tr><td>Pipetter Marca Fisher Elite 100&ndash; 1000 mL</td><td>Fisher</td><td>QU01672</td><td></td></tr><tr><td>Pipetter Marca Fisher Elite 10&ndash; 100 mL</td><td>Fisher</td><td>MU10985</td><td></td></tr><tr><td>Pipetter Marca Fisher Elite 1&ndash; Solução</td> de Hidróxido de Sódio <td>Fisher</td><td>MU08178</td><td></td>10 mL</tr><tr><td>1.0 M</td><td>Fluka</td><td>Lote#05096BPV&nbsp; &nbsp; 319511-2L</td><td></td></tr><tr><td>TEM</td><td>FEI Co</td><td>Morgagni modelo 268&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de PCR TempSursure, Tampas Planas, Natural&nbsp;</td><td>Polipropileno da USA Scientific</td><td></td><td>. Tubos individuais de parede fina de 0,2 mL com tampas planas foscas anexadas</td></tr><tr><td>Espectrofotômetro UV-Vis-NIR</td><td>Varian</td><td>CARY 5000 UV1106M074</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Raman Confocal WI Tec alpha300R</td><td>WITec-Oxford Instrument</td><td>XMB3000-3001</td><td></td></tr></tbody></table>

caracterização da automontagem reversível dependente de ph de colóides de ouro revestidos com beta-amiloide 1-40

Characterization of pH-Dependent Reversible Self-Assembly of Amyloid Beta 1-40-Coated Gold Colloids

Com a fixação de Aβ 1-40 na superfície das partículas nanocoloidais de ouro, a banda SPR em torno do máximo de absorção de 530 nm mudou significativamente para a posição de pico de ~ 650 nm quando a solução se tornou mais ácida (pH 4) 35 . Juntamente com as imagens TEM, identificamos que as características espectroscópicas observadas em pH 4 correspondem à formação dos agregados coloidais de ouro com conformação plausivelmente desdobrada e rede com os monômeros Aβ 1-40 desdobrados circundantes adsorvidos sobre a superfície do ouro30. Observamos que os monômeros Aβ 1-40 revertem para a conformação dobrada em condições básicas (pH 10), resultando em uma deformação dos agregados de maneira quase reversível. Esse processo quase reversível ficou evidente a partir da alternância do pico médio da banda (<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">(n)), que mudou entre um comprimento de onda mais curto e mais longo, e a morfologia dispersa versus agregada em imagens MET entre condições básicas (pH = 10) e ácidas (pH = 4). Foi observado anteriormente que uma porção do monômero Aβ 1-40 permanece desdobrada mesmo depois que a solução foi revertida para as condições básicas36. O vídeo 1 mostra a mudança de cor dependente do pH do colóide de ouro nu Aβ 1-40 e 20 nm.
Como comparação, foi realizada a investigação do pH do salto do colóide de ouro nu de 20 nm (Figura 5C e D). À medida que a operação de mudança de pH prosseguiu, ela mostrou o crescimento da clusterização dos colóides de ouro em imagens de banda SPR, imagens TEM, bem como imagens de luz branca. Curiosamente, havia várias linhas espectrais SERS dependendo de nímpar e npar. Por exemplo, em npar (pH ~ 4), a linha a 275 cm-1, que foi atribuída como a moda associada a Aun (n = 5, 6, 12, 16, 20, 58)37 ou modo de Au-Cl-ligante 38 foi intensamente observada. Por outro lado, para npar, a 1008 cm-1 C-N str foi observado39 e CH2 wag39, deformação CH2 40 foram extensivamente observados a 1291 cm-1.
Em contraste com a morfologia de agregação clara e reversível dependente do pH observada pela imagem de luz branca, houve diferenças relativamente sutis nas características espectrais no espectro SERS entre nímpar e npar. Como primeira aproximação, a densidade de linhas espectrais na região entre 250 cm-1 e 1750 cm-1 foi maior para nímpar do quen par. As linhas espectrais na região da impressão digital, 1250 cm-1 e 1750 cm-1 (bandas de amida I, II e III) para nímpares , mostraram características espectrais menos resolvidas, implicando um alargamento ou aumento nas densidades espectrais. Na Figura 6, um mapa de contorno fornecido na Figura 5B (Figura 6B) foi organizado com os sinais SERS em 761 cm-1 (vermelho) e 1395 cm-1 (azul), representando as ênfases em nímpar e npar, respectivamente (Figura 6C). Como um espectro SERS representativo para nímpar e npar, o espectro SERS em n = 7 (vermelho) e n = 4 (azul) é mostrado na parte superior (Figura 6A). Para mostrar a correspondência com o deslocamento da banda SPR para ouro de 20 nm revestido com Aβ1-40 , o gráfico de deslocamento da banda na Figura 3 é mostrado ao lado (Figura 6D).
Embora tenhamos dados preliminares sobre a atribuição completa do espectro SERS observado, notamos várias características notáveis de deslocamento Raman aqui. As linhas espectrais e (atribuições plausíveis) aprimoradas em nímpares estão principalmente na região inferior a 1000 cm-1: 394 cm-1 (Trp) 41,42,43, 761 cm-1 (His, Ala) 39,44,45,46,47, 875 cm-1 (deslocamento indol NH, alongamento CC de Met) 39, 974 cm-1 (Glu, C-COO- estiramento de Asp, modo associado ao citrato)39,48,49. O deslocamento Raman aprimorado em nainda mostrou características espectroscópicas significativas na região da impressão digital (Amida I, II e III): 1166 cm-1 (deformação N-H+ de Tyr)39,41, 1227 cm-1 (Ala-Pro-Gly, Amida III)39,50,51, 1395 cm-1 (COO- alongamento simétrico ou CH2- CH3- tesoura de Glu)39,48, 1585 cm-1 (estiramento do anel CC de Phe, estiramento assimétrico do carboxilato -Au, estiramento COO- do citrato, deformação do anel de benzeno)39,41,45,46,47,49,52, 1592 cm-1 (Phe, Tyr, C=C estiramento de Tyr, estiramento CC do anel em Phe, estiramento do anel de benzeno e COO- alongamento em Phe e Tyr, e alongamento assimétrico de OH) 39 , 41 , 48 , 50 , 51 e 1628 cm-1 (subpico de amida I distinto para estruturas intermoleculares de folha de β53, C = O e os modos vibracionais CN / NH acoplados da estrutura da proteína originada de estruturas paralelas do tipo folha de β, acúmulo de Aβ54 agregado, bobinas aleatórias, β voltas, β grampos de cabelo48. As sequências que aparecem para nímpar ou npar são mostradas na Figura 7. No geral, para nmesmo correspondendo à agregação reversível ou conformação desdobrada de Aβ 1-40, Phe/Tyr contendo anel benzênico, estiramento simétrico de COO-, CH 2- CH3- modo de tesoura de Glu e deformação -NH+ de Tyr foram significativamente envolvidos na mudança conformacional do peptídeo. Durante a desmontagem da agregação que foi observada quando os peptídeos adotaram a conformação dobrada correspondente aos modos proeminentes em nímpares, Glu, Asp, Met, His e Ala pareciam estar envolvidos.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig01.jpg"> 
Figura 1: A absorbância e morfologia dependente do pH. O espectro de absorção em pH 4 (A) e pH 10 (B) para nanopartículas de ouro revestidas com Aβ 1-40 (20 nm) e as imagens TEM correspondentes, esboços de agregação/partículas dispersas e imagens de soluções em frascos são mostrados. A é a conformação desdobrada de monômeros Aβ 1-40 sob condições ácidas, e B é a conformação dobrada sob condições básicas. Diagramas de monômeros Aβ 1-40 em cada conformação e morfologias de agregação/dispersão são mostrados ao lado das imagens MET. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig02.jpg"> 
Figura 2: Reversibilidade de automontagem dependente do tamanho nanométrico. O deslocamento da posição média do pico da banda SPR, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">, em função do número de operação, n, para todos os tamanhos testados de partículas coloidais de ouro. Os valores aproximados de pH e o estágio correspondente dos agregados mostrados na Figura 1 também são fornecidos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig03v2.jpg"> 
Figura 3: <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq05.jpg" style="margin: auto;"> e imagens TEM/luz branca em cada número de operação. O <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> número em função da operação, n, foi plotado em conjunto para Aβ 1-40 revestido de ouro de 20 nm (círculos fechados) e colóide de ouro de 20 nm (círculos abertos) e é mostrado com imagens representativas de TEM (A e C)/luz branca (B e D) em números de operação selecionados (n = 1, 2, 3, 7 e 8 marcados por setas decodificadas) para Aβ 1-40 revestido de ouro de 20 nm (A e B) e colóide de ouro de 20 nm (C e D). A fonte preta indica pH 7, a fonte azul indica pH 4 e a fonte vermelha indica pH 10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig04.jpg"> 
Figura 4: Luz branca representativa e imagem Raman. A imagem de luz branca, imagem Raman e espectro SERS para (A) n = 2 e (B) n = 3; i) imagem de luz branca em um amplo campo de visão, ii) imagem de luz branca na área onde a imagem Raman foi coletada (rotulada por um quadrado vermelho em i)), iii) a imagem Raman de dois componentes combinados, iv) imagem Raman do componente 1 e seu v) espectro SERS de iv), vi) imagem Raman do componente 2, e vii) espectro SERS de vi). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig05.jpg"> 
Figura 5: Mapa de contorno do espectro SERS para nímpar, npar e ntodos. (A) O mapa tridimensional do espectro SERS na região de 250 cm-1 e 1750 cm-1 em função de n para Aβ1-40 revestiu ouro de 20 nm com um mapa de contorno mostrado em (B) na parte superior. (C) O mapa tridimensional do espectro SERS na região de 250 cm-1 e 1750 cm-1 em função de n para ouro de 20 nm com um mapa de contorno mostrado em (D) na parte superior. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig06v2.jpg"> 
Figura 6: Mapa de contorno do SERS Spectrum. O mapa de contorno do espectro SERS em função de n (1-10). (A) Absorbância a 1395 cm-1 (azul) e 761 cm-1 (vermelho). (BD) O painel inferior mostra o espectro SERS e o painel direito mostra a amplitude da mudança de intensidade do sinal dos sinais SERS a cada n. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig06largev2.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig07v3.jpg"> 
Figura 7: Sequências notáveis de Aβ1-40. As sequências atribuídas a ter envolvimento significativo em nímpares (correspondendo à formação de conformação dobrada) são indicadas por setas vermelhas para baixo, e aquelas atribuídas a ter envolvimento significativo em npares (correspondendo à formação de conformação desdobrada) são indicadas por setas azuis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig07largev3.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Vídeo 1: Mudança de cor dependente do pH do colóide de ouro nu Aβ1-40 e 20 nm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/Movie%20Abeta-Gold%20Color%20Change.wmv" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>

Caracterização da automontagem reversível dependente de pH de colóides de ouro revestidos com beta-amiloide 1-40

The characterization of A&#946;1-40 coated over the nano-gold colloidal particle surfaces was conducted using surface plasmon resonance (SPR) spectroscopy ...

characterization-ph-dependent-reversible-self-assembly-amyloid-beta-1

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Aqui, relatamos um protocolo de purificação por HPLC personalizado que produz peptídeos beta-amilóide 42 (Aβ42) e beta-amilóide 40 (Aβ40) de alta pureza, capazes de formação de oligômeros. A beta-amiloide é um peptídeo hidrofóbico altamente propenso a agregação implicado na doença de Alzheimer. A natureza amiloidogênica do peptídeo torna sua purificação um desafio.

A purificação Protocolo Tailored HPLC que os rendimentos de alta pureza beta-amilóide 42 e beta-amilóide 40 Peptides, capaz de Formação Oligï¿½ero

Este protocolo descreve como preparar oligómeros Aβ de um peptídeo sintético em vitro e para avaliar a quantidade relativa de oligómero Aβ por um ponto de análise a mancha.

A11-positivo β-amiloide Oligomer preparação e avaliação utilizando Dot mancha análise

Um protocolo para a síntese de um 1,2-Ditiolano modificado de peptídeo e a caracterização das estruturas supramoleculares resultantes do peptide auto-montagem.

Síntese e caracterização de 1,2-Ditiolano modificado peptídeos auto-montagem

Aqui apresentados são dois métodos que podem ser usados individualmente ou em combinação para analisar o efeito da beta-amiloide na estrutura do coágulo de fibrina. Incluído é um protocolo para criar um em vitro coágulo de fibrina, seguido pelo coágulo turbidez e microscopia eletrônica métodos.

Análise de β-amiloide-induzida de anormalidades na estrutura do coágulo de fibrina por espectroscopia e microscopia eletrônica

Este método de purificação bioquímica com análise proteômica baseada em espectrometria de massa facilita a caracterização robusta de núcleos fibril amiloides, o que pode acelerar a identificação de alvos para prevenir a doença de Alzheimer.

Purificação Bioquímica e Caracterização Proteômica de Núcleos de Fibril Amiloides do Cérebro

As fibrilas amiloides são formadas por diversas proteínas, e as fibrilas resultantes compartilham uma estrutura de "β cruzados". Aqui descrevemos como amostras de fibrila amiloide podem ser preparadas para a difração de fibras de raios X e como os padrões podem ser analisados.

Amyloide e a Arquitetura Cross-Beta

Aprenda a caracterizar a automontagem reversível dependente de pH de colóides de ouro revestidos com beta-amiloide 1-40 usando espectroscopia SERS. Este método revela modos vibracionais críticos para a conformação proteica.

Caracterização da automontagem reversível dependente de pH de colóides de ouro revestidos com beta-amiloide 1-40

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