Name: Previsão da significância do anticorpo eritrocitário usando o ensaio de monócitos-macrófagos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:40:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: Aprenda o ensaio de monócitos-macrófagos para prever a significância de aloanticorpos eritrocitários em medicina transfusional. Este método melhora a sensibilidade em relação ao ensaio tradicional de monocamada.

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<ol><li>Tong, T. N., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monocyte+monolayer+assay+to+evaluate+Fc%CE%B3+receptor-mediated+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Use of a monocyte monolayer assay to evaluate Fcγ receptor-mediated phagocytosis.</a> J Vis Exp. (119), e55039(2017).</li>
<li>Tong, T. N., Cen, S., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocyte+monolayer+assay%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">The monocyte monolayer assay: Past, present and future.</a> Transfus Med Rev. 33 (1), 24-28 (2019).</li>
<li>Frias Boligan, K., Sandhu, G., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+evaluate+the+potential+clinical+significance+of+antibodies+to+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods to evaluate the potential clinical significance of antibodies to red blood cells.</a> Curr Protoc. 2 (8), e504(2022).</li>
<li>Lemay, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+case+of+severe+acute+hemolytic+transfusion+reaction+caused+by+anti-Sc2%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The first case of severe acute hemolytic transfusion reaction caused by anti-Sc2.</a> Transfusion. 58 (11), 2506-2512 (2018).</li>
<li>Tong, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+a+monocyte+monolayer+assay+in+the+assessment+of+intravenous+immunoglobulin-associated+hemolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The utility of a monocyte monolayer assay in the assessment of intravenous immunoglobulin-associated hemolysis.</a> Transfusion. 60 (12), 3010-3018 (2020).</li>
<li>Srivastava, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCAR%3A+the+high-prevalence+antigen+013.008+in+the+Scianna+blood+group+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">SCAR: the high-prevalence antigen 013.008 in the Scianna blood group system.</a> Transfusion. 61 (1), 246-254 (2021).</li>
<li>Branch, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentially+clinically+significant+anti-Dib+identified+by+monocyte+monolayer+assay+before+transfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Potentially clinically significant anti-Dib identified by monocyte monolayer assay before transfusion.</a> Transfusion. 61 (1), 331-332 (2021).</li>
<li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+monocytes+to+M1%2FM2+macrophages%3A+Phenotypical+vs.+functional+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">From monocytes to M1/M2 macrophages: Phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514(2014).</li>
<li>Mills, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M1+and+M2+macrophages%3A+Oracles+of+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">M1 and M2 macrophages: Oracles of health and disease.</a> Crit Rev Immunol. 32 (6), 463-488 (2012).</li>
<li>Atri, C., Guerfali, F. Z., Laouini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+human+macrophage+polarization+in+inflammation+during+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of human macrophage polarization in inflammation during infectious diseases.</a> Int J Mol Sci. 19 (6), 1801(2018).</li>
<li>Bertani, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+M1%2FM2-polarized+human+macrophages+by+label-free+hyperspectral+reflectance+confocal+microscopy+and+multivariate+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Classification of M1/M2-polarized human macrophages by label-free hyperspectral reflectance confocal microscopy and multivariate analysis.</a> Sci Rep. 7, 8965(2017).</li>
<li>Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Cohn, C., Delaney, M., Johnson, S. T., Katz, L. M., Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCohn%2C+C+%22Technical+Manual%22">Technical Manual</a>. , 21st Ed, American Association for the Advancement of Blood and Biotherapeutics. Maryland, USA. (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1X PBS, pH 7.4, sem Ca2+/Mg2+Wisent</td> <td>Bioproducts&nbsp;</td><td>311-425-CL</td><td>Armazene a 4 graus ou temperatura ambiente&nbsp;</td></tr><tr><td>AccutaseTM</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>Solução de desprendimento de células</td> <td>7920</td></tr><tr><td>ACK Lysis Buffer&nbsp;</td><td>Tecnologias STEMCELL&nbsp;</td><td>07850, 07800</td><td>Armazenar a 4 graus</td></tr><tr><td>Anti-Globulina Humana</td><td>NOVACLONE, Immunocor.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>NOVACLONE Anti-IgG para testes de IAT&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-Rh(D) (WinRho. SDF CDN)</td><td>Saol Therapeutics&nbsp;</td><td>1003092</td><td>Qualquer fonte comercial de globina imune ao Rh será suficiente&nbsp;</td></tr><tr><td>Raspador de Células</td><td>UofT Medstore</td><td>83.395</td><td>desprendimento de células&nbsp;</td></tr><tr><td>Filtro de Células 70uM nylon</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>filtro de células&nbsp;</td></tr><tr><td>Corrediça da câmara Nunc. Lab-TekTM II com Tampa, Lâmina de Vidro RS Estéril&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>154534</td><td>corrediças de câmara para MMA&nbsp;</td></tr><tr><td>Lamínulas&nbsp;</td><td>VWR</td><td>48393-081</td><td>24 x 50 mm</td></tr><tr><td>Cytiva Ficoll Paque Plus, densidade 1.077 g/L</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>17-1440-03</td><td>separação de PBMCS de sangue total; meio de gradiente de densidade</td></tr><tr><td>Elvanol Meio de montagem</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Dulbecco' s PBS (D-PBS) sem Ca2+/Mg2+, 15% (p/v) de resina polivinílica e 30% (v/v) de glicerina.</td></tr><tr><td>Sangue total fresco (tubo ACD) ou revestimento Buffy</td><td>Canadian Blood Services</td><td></td><td>Pode descansar em temperatura ambiente por até 36 horas&nbsp;</td></tr><tr><td>Tecnologias de células-tronco GM-CSF recombinantes humanas</td><td></td><td>78015.1</td><td>Citocina para polarização de macrófagos M1</td></tr><tr><td>Tecnologias de células estaminais IFN-gama recombinantes</td><td>humanas&nbsp;</td><td>78020</td><td>Citocina para polarização de macrófagos M1</td></tr><tr><td>Tecnologias de células TRONCO IL-4 Recombinantes Humanas</td><td>&nbsp;</td><td>78045.1</td><td>Citocina para polarização de macrófagos M2</td></tr><tr><td>Tecnologias de células-tronco M-CSF recombinantes humanas</td><td></td><td>78057.1</td><td>Citocina para polarização de macrófagos M2</td></tr><tr><td>ID-CellStab</td><td>Bio-Rad</td><td>005650 05740</td><td>Solução de armazenamento/estabilização de células hemácias&nbsp;</td></tr><tr><td>Meio de Isolamento&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>PBS Ca2+ e Mg2+ livre + FBS 2% + 1mM EDTA</td></tr><tr><td>Lipopolisaaracide (LPS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L3024-5MG</td><td>Citocina para polarização de macrófagos M1</td></tr><tr><td>Metanol (100%)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Fixação de lâminas&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit de Isolamento de Monócitos STEM-cells EasySep Kit de Enriquecimento de Monócitos Humanos sem Depleção de CD16&nbsp;</td><td>Tecnologias STEMCELL&nbsp;</td><td>19058</td><td>Isolamento de monócitos de PBMCs</td></tr><tr><td>Poli-D-isina&nbsp;</td><td>UofT Medstore&nbsp;</td><td>P6407</td><td>Solução de fixação de células&nbsp;</td></tr><tr><td>Rh(D) positivo R2R2 RBCs</td><td>Canadian Blood Services</td><td>N/A</td><td>Também comercialmente disponível</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>350-000-CL</td><td>suplementado com 10% de FBS inativado pelo calor, 1 mM de suplemento GlutaMAX, 1 mM de HEPES e 1% de penicilina/estreptomicina. Armazene a 4 graus.&nbsp;</td></tr><tr><td>Solução de Trypan Blue</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15250061</td><td>Solução de contagem de células&nbsp;</td></tr></tbody></table>

previsão da significância do anticorpo eritrocitário usando o ensaio de monócitos-macrófagos

Prediction of Red Blood Cell Antibody Significance Using the Monocyte-Macrophage Assay

Os resultados da Figura 1 são consistentes com a literatura e indicam uma polarização bem-sucedida dos macrófagos de seu estado M0 para seu estado M1/M2 subsequente. Macrófagos M1 e M2 foram cultivados por 8 dias (6 dias com fatores de crescimento e 2 dias de polarização), e hemácias opsonizadas anti-D ou anti-k foram testadas (Figura 2). Os macrófagos M2 demonstram um alto índice fagocítico em comparação com os M1s com hemácias opsonizadas por ...

Previsão da significância do anticorpo eritrocitário usando o ensaio de monócitos-macrófagos

Derived from monocytes in the bone marrow, macrophages are large, innate immune cells that play a major role in clearing dead cells, debris, tumor cells, ...

prediction-red-blood-cell-antibody-significance-using-monocyte

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo mostra um ensaio de monocamada de monócitos utilizando monócitos primários do sangue periférico para avaliar a fagocitose mediada por receptor Fcγ com glóbulos vermelhos R2R2 opsonizados por anticorpos poli D.

Um ensaio para estudar a fagocitose induzida pelo receptor Fcγ em monocamadas de monócitos

Macrófagos derivados de monócitos são importantes células do sistema imune inato. Aqui, descrevemos um fácil de...

Um<em&gt; In vitro</em&gt; Modelo para estudar a heterogeneidade de diferenciação de macrófagos humanos e Polarização

Este protocolo descreve o uso de espectrometria de massa MALDI-TOF de células inteiras em células eucarióticas. Aqui, ilustramos a precisão dessa técnica analisando os múltiplos estados de ativação dos macrófagos em resposta ao seu microambiente.

De células inteiras MALDI-TOF espectrometria de massa é um método rápido e preciso para analisar os diferentes modos de ativação de macrófagos

Aqui nós descrevemos dois ensaios para medir a ativação do complemento induzida por anticorpos contra células vermelhas do sangue. A vantagem principal sobre os ensaios actuais é a sua natureza quantitativa e fácil de interpretar.

Métodos para a detecção quantitativa de anticorpos induzida pela ativação do complemento no Glóbulos Vermelhos

Apresenta-se um protocolo simples e eficiente para a geração de macrófagos humanos. Casacos de Buffy são processados ​​por dupla centrifugação em gradiente de densidade e monócitos isolados são então diferenciado para macrófagos em revestidos de teflon de cultura de células de sacas. Isso maximiza o rendimento de macrófagos e facilita a colheita de células para experiências posteriores.

Isolamento de monócitos humanos por duas vezes centrifugação em gradiente e sua diferenciação de macrófagos em revestidos de teflon Cultura de Células Bags

O ensaio de monocamada de monócitos (MMA) é um ensaio in vitro que utiliza monócitos primários isolados obtidos de sangue total periférico de mamíferos para avaliar a fagocitose mediada pelo receptor Fcγ (FcγR).

Uso de um monócito monocamada Ensaio para Avaliar a fagocitose mediada pelo receptor Fcy

Este protocolo fornece uma análise das subpopulações de macrófagos no sistema nervoso central do mouse adulto por citometria de fluxo e é útil para o estudo de marcadores múltiplos expressos por essas células.

Análise de Microglia e Macropagos derivados de Monócitos do Sistema Nervoso Central por Citometria de Fluxo

Aqui nós apresentamos um protocolo para caracterizar subconjuntos de monócitos por citometria de fluxo de sangue total. Isso inclui como portão os subconjuntos e avaliar sua expressão de marcadores de superfície de estrutura de tópicos e dando um exemplo da avaliação da expressão de marcadores M2 (anti-inflamatório) e M1 (inflamatória).

Caracterização de subconjuntos de monócitos humanos por sangue total Flow Cytometry Analysis

Aqui nós apresentamos um protocolo para quantificar a atividade Quimiotáticos de monócitos do sangue em modelos do rato, para avaliar os efeitos de intervenções nutritivas, farmacológicas e genéticas no monocyte do sangue e para caracterizar os macrófagos derivados do sangue dos monócitos em modelos de mouse usando o monocyte-chemoattractant protein-1 (MCP-1)-carregado porão membrana-derivado gel plugs.

Quantificação da atividade quimiotática de monócitos in vivo e caracterização de macrófagos derivados de monócitos sanguíneos

O uso de reagentes de referência para ensaio de liberação de citocinas permite perfis de segurança in vitro mais reprodutíveis e padronizados de anticorpos monoclonais imunoterapêuticos. Aqui, descrevemos como os ensaios de liberação de citocinas podem ser usados juntamente com um painel de reagentes de referência para prever a segurança de alguns anticorpos monoclonais terapêuticos.

Usando reagentes de referência para confirmar a robustez dos ensaios de liberação de citocinas para a previsão da segurança do anticorpo monoclonal

Monócitos e macrófagos são células imunes muito plásticas e reprogramáveis, cruciais para a saúde e a doença. Eles sentem e respondem a uma ampla gama de estímulos adotando programas de diferenciação e fenótipos específicos. Padronizamos um modelo in vitro para estudar a polarização e reprogramação de macrófagos, fornecendo uma ferramenta valiosa para pesquisa.

Modelo de reprogramação de macrófagos derivados de monócitos humanos para ensaios in vitro

Aprenda o ensaio de monócitos-macrófagos para prever a significância de aloanticorpos eritrocitários em medicina transfusional. Este método melhora a sensibilidade em relação ao ensaio tradicional de monocamada.

Previsão da significância do anticorpo eritrocitário usando o ensaio de monócitos-macrófagos

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