Name: Teste de furto do laboratório de segurança de príons (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Aprenda a realizar o teste de furto para detectar príons em superfícies laboratoriais usando RT-QuIC. Este método permite avaliar a eficácia da descontaminação e aumentar a segurança em ambientes de pesquisa.

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<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Bolton, D. C., McKinley, M. P., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+protein+that+purifies+with+the+scrapie+prion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of a protein that purifies with the scrapie prion.</a> Science. 218 (4579), 1309-1311 (1982).</li>
<li>Oesch, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+gene+encodes+scrapie+PrP+27-30+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A cellular gene encodes scrapie PrP 27-30 protein.</a> Cell. 40 (4), 735-746 (1985).</li>
<li>Caughey, B., Raymond, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie-associated+form+of+PrP+is+made+from+a+cell+surface+precursor+that+is+both+protease-+and+phospholipase-sensitive%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The scrapie-associated form of PrP is made from a cell surface precursor that is both protease- and phospholipase-sensitive.</a> J Biol Chem. 266 (27), 18217-18223 (1991).</li>
<li>Deleault, N. R., Harris, B. T., Rees, J. R., Supattapone, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+native+prions+from+minimal+components+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Formation of native prions from minimal components in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (23), 9741-9746 (2007).</li>
<li>Gajdusek, D. C., Zigas, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degenerative+disease+of+the+central+nervous+system+in+New+Guinea%3A+the+endemic+occurrence+of+%26%2334%3Bkuru%26%2334%3B+in+the+native+population%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Degenerative disease of the central nervous system in New Guinea: the endemic occurrence of &#34;kuru&#34; in the native population.</a> N Engl J Med. 257, 974-978 (1957).</li>
<li>Centers for Disease Control. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+degenerative+neurologic+disease+in+patients+who+received+pituitary-derived+human+growth+hormone%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Morb+Mortal+Wkly+Rep%22%5BJournal%5D)">Fatal degenerative neurologic disease in patients who received pituitary-derived human growth hormone.</a> MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 34, 359-361 (1985).</li>
<li>Duffy, P., Wolf, J., Collins, G., DeVoe, A. G., Streeten, B., Cowen, D. Letter: possible person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuffy%2C+P+%22N+Engl+J+Med%22">N Engl J Med</a>. 290 (12), 692-693 (1974).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iatrogenic+Creutzfeldt-Jakob+disease+at+the+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Iatrogenic Creutzfeldt-Jakob disease at the millennium.</a> Neurology. 55 (8), 1075-1081 (2000).</li>
<li>Huillard d'Aignaux, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incubation+period+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+in+human+growth+hormone+recipients+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Incubation period of Creutzfeldt-Jakob disease in human growth hormone recipients in France.</a> Neurology. 53 (6), 1197-1201 (1999).</li>
<li>Marzewski, D. J., Towfighi, J., Harrington, M. G., Merril, C. R., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+pituitary-derived+human+growth+hormone+therapy%3A+a+new+American+case%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following pituitary-derived human growth hormone therapy: a new American case.</a> Neurology. 38, 1131-1133 (1988).</li>
<li>Hannah, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+receipt+of+a+previously+unimplicated+brand+of+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after receipt of a previously unimplicated brand of dura mater graft.</a> Neurology. 56 (8), 1080-1083 (2001).</li>
<li>Shimizu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+with+florid-type+plaques+after+cadaveric+dura+mater+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease with florid-type plaques after cadaveric dura mater grafting.</a> Arch Neurol. 56 (3), 357-362 (1999).</li>
<li>Antoine, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+extracranial+dura+mater+embolization+for+a+nasopharyngeal+angiofibroma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after extracranial dura mater embolization for a nasopharyngeal angiofibroma.</a> Neurology. 48 (5), 1451-1453 (1997).</li>
<li>Esmonde, T., Lueck, C. J., Symon, L., Duchen, L. W., Will, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+and+lyophilised+dura+mater+grafts%3A+report+of+two+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease and lyophilised dura mater grafts: report of two cases.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 56, 999-1000 (1993).</li>
<li>Willison, H. J., Gale, A. N., McLaughlin, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+cadaveric+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following cadaveric dura mater graft.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 54, 940(1991).</li>
<li>Diringer, H., Braig, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+unconventional+viruses+in+dura+mater%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Infectivity of unconventional viruses in dura mater.</a> Lancet. 334, 439-440 (1989).</li>
<li>Peden, A. H., Head, M. W., Ritchie, D. L., Bell, J. E., Ironside, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+vCJD+after+blood+transfusion+in+a+PRNP+codon+129+heterozygous+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Preclinical vCJD after blood transfusion in a PRNP codon 129 heterozygous patient.</a> Lancet. 364 (9433), 527-529 (2004).</li>
<li>Will, R. G., Matthews, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+case-to-case+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Evidence for case-to-case transmission of Creutzfeldt-Jakob disease.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 45, 235-238 (1982).</li>
<li>el Hachimi, K. H., Chaunu, M. P., Cervenakova, L., Brown, P., Foncin, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+neurosurgical+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+with+analysis+of+donor+and+recipient%3A+agent+strains%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+III%22%5BJournal%5D)">Putative neurosurgical transmission of Creutzfeldt-Jakob disease with analysis of donor and recipient: agent strains.</a> C R Acad Sci III. 320 (4), 319-328 (1997).</li>
<li>Alper, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+agent+of+scrapie+replicate+without+nucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Does the agent of scrapie replicate without nucleic acid.</a> Nature. 214, 764-766 (1967).</li>
<li>Casassus, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((France+halts+prion+research+amid+safety+concerns%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">France halts prion research amid safety concerns.</a> Science. 373 (6554), 475-476 (2021).</li>
<li>Brandel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variant+Creutzfeldt-Jakob+disease+diagnosed+7.5+years+after+occupational+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Variant Creutzfeldt-Jakob disease diagnosed 7.5 years after occupational exposure.</a> N Engl J Med. 383 (1), 83-85 (2020).</li>
<li>Flechsig, E., Hegyi, I., Enari, M., Schwarz, P., Collinge, J., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+scrapie+by+steel-surface-bound+prions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Transmission of scrapie by steel-surface-bound prions.</a> Mol Med. 7 (10), 679-684 (2001).</li>
<li>Zobeley, E., Flechsig, E., Cozzio, A., Enari, M., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+scrapie+prions+bound+to+a+stainless+steel+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Infectivity of scrapie prions bound to a stainless steel surface.</a> Mol Med. 5 (4), 240-243 (1999).</li>
<li>Brown, P., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+scrapie+virus+after+3+years%27+interment%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Survival of scrapie virus after 3 years' interment.</a> Lancet. 337 (8736), 269-270 (1991).</li>
<li>Seidel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scrapie+agent+%28strain+263K%29+can+transmit+disease+via+the+oral+route+after+persistence+in+soil+over+years%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Scrapie agent (strain 263K) can transmit disease via the oral route after persistence in soil over years.</a> PLoS One. 2 (5), e435(2007).</li>
<li>Maddison, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+scrapie+prions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of scrapie prions.</a> J Virol. 84 (21), 11560-11562 (2010).</li>
<li>Pritzkow, S., Morales, R., Lyon, A., Concha-Marambio, L., Urayama, A., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+prion+disease+transmission+through+common+environmental+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Efficient prion disease transmission through common environmental materials.</a> J Biol Chem. 293 (9), 3363-3373 (2018).</li>
<li>Alper, T., Cramp, W., Haig, D., Clarke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+agent+of+scrapie+replicate+without+nucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Does the agent of scrapie replicate without nucleic acid.</a> Nature. 214 (90), 764-766 (1967).</li>
<li>Bernoulli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Danger+of+accidental+person-to-person+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+by+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Danger of accidental person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease by surgery.</a> Lancet. 309 (8009), 478-479 (1977).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Green, E. M., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chemicals%2C+heat%2C+and+histopathologic+processing+on+high-+infectivity+hamster-adapted+scrapie+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Effect of chemicals, heat, and histopathologic processing on high- infectivity hamster-adapted scrapie virus.</a> J Infect Dis. 145 (5), 683-687 (1982).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+disinfection+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Chemical disinfection of Creutzfeldt-Jakob disease virus.</a> N Engl J Med. 306, 1279-1282 (1982).</li>
<li>Dickinson, A. G., Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+scrapie+agent+to+decontamination%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Resistance of scrapie agent to decontamination.</a> N Engl J Med. 299, 1413-1414 (1978).</li>
<li>Hunter, G. D., Millson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+heat+stability+and+chromatographic+behavior+of+the+scrapie+agent%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Studies on the heat stability and chromatographic behavior of the scrapie agent.</a> J Gen Microbiol. 37, 251-258 (1964).</li>
<li>Pattison, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+the+scrapie+agent+to+formalin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Resistance of the scrapie agent to formalin.</a> J Comp Pathol. 75, 159-164 (1965).</li>
<li>Fraser, H., Farquhar, C., McConnell, I., Davies, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie+disease+process+is+unaffected+by+ionising+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Clin+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">The scrapie disease process is unaffected by ionising radiation.</a> Prog Clin Biol Res. 317, 653-658 (1989).</li>
<li>Yuan, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+chronic+wasting+disease+prions+recovered+from+environmentally+relevant+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Int%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of chronic wasting disease prions recovered from environmentally relevant surfaces.</a> Environ Int. 166, 107347(2022).</li>
<li>Simmons, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+determination+of+residual+prion+infectivity+from+prion-decontaminated+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive determination of residual prion infectivity from prion-decontaminated surfaces.</a> mSphere. 9, e00504-e00524 (2024).</li>
<li>Orru, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+pathological+seeds+of+alpha-synuclein%2C+tau+and+prion+protein+on+solid+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of pathological seeds of alpha-synuclein, tau and prion protein on solid surfaces.</a> PLoS Pathog. 20 (4), e1012175(2024).</li>
<li>Wilham, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+end-point+quantitation+of+prion+seeding+activity+with+sensitivity+comparable+to+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Rapid end-point quantitation of prion seeding activity with sensitivity comparable to bioassays.</a> PLoS Pathog. 6 (12), e1001217(2010).</li>
<li>Srivastava, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+quantitation+of+pathological+alpha-synuclein+in+patient+biospecimens+by+RT-QuIC+seed+amplification+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Enhanced quantitation of pathological alpha-synuclein in patient biospecimens by RT-QuIC seed amplification assays.</a> PLoS Pathog. 20 (9), e1012554(2024).</li>
<li>Hughson, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+prions+and+amyloid+seeds+with+hypochlorous+acid%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Inactivation of prions and amyloid seeds with hypochlorous acid.</a> PLoS Pathog. 12 (9), e1005914(2016).</li>
<li>Williams, K., Hughson, A. G., Chesebro, B., Race, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+chronic+wasting+disease+prions+using+sodium+hypochlorite%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inactivation of chronic wasting disease prions using sodium hypochlorite.</a> PLoS One. 14 (10), e0223659(2019).</li>
<li>Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoclaving+standards+for+Creutzfeldt-Jakob+disease+agent+%5Bletter%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Autoclaving standards for Creutzfeldt-Jakob disease agent [letter].</a> Ann Neurol. 22 (4), 557-558 (1987).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newer+data+on+the+inactivation+of+scrapie+virus+or+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus+in+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Newer data on the inactivation of scrapie virus or Creutzfeldt-Jakob disease virus in brain tissue.</a> J Infect Dis. 153 (6), 1145-1148 (1986).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Marca Fisher&nbsp; Cotonetes de espuma PurSwab</td><td>Catálogo da marca Fisher</td><td>#14-960-3E</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q IQ 7005 Sistema de água ultrapura</td> Mini-centrífuga <td>MilliporeSigma</td><td>Q7005T0C</td><td></td></tr>, <tr><td>6000 rpm</td><td>Southern Labware</td><td>MLX-306</td><td></td></tr><tr><td>Leitor de placas Omega</td><td>BMG Labtech</td><td>FLUOstar Leitor</td><td></td>de placas Omega</tr><tr><td>Q700 sonicator</td><td>QSonica</td><td>Q700-110</td><td></td></tr><tr><td>Proteína de príon de hamster recombinante</td><td>MNPRO</td><td>MNPROteína-Hamster</td><td>hamster sírio, aminoácidos 90-231</td></tr><tr><td>Savant speedvac&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>SPD1030-230</td><td></td></tr><tr><td>Nanoesferas de Sílica (50 nm)</td><td>nano Composix&nbsp;</td><td>SISN50-25M</td><td></td></tr></tbody></table>

teste de furto do laboratório de segurança de príons

Prion Safety Laboratory Swipe Test

Descrição escrita dos resultados positivos e negativos (incluindo controles positivos/negativos em placas e swab)
Os swabs de controle negativo são incluídos no swab de vigilância para monitorar a potencial contaminação por príons que pode ser introduzida durante o processo de swab, extração e concentração. A primeira placa RT-QuIC realizada para uma determinada vigilância mensal deve incluir os controles de swab positivo e negativo. Os controlos negativos bem sucedidos não ultrapassam o limiar de fluorescência positivo (figura 6A). Esse resultado indicaria que a contaminação não foi introduzida durante os procedimentos experimentais. Extratos de swab de controle positivo bem-sucedidos exibiriam semeadura positiva em todos os poços replicados para uma determinada amostra (swabs de controle positivo foram contaminados com o homogeneizado cerebral de cepa de encefalopatia de vison transmissível adaptado a hamster Hyper (HY TME). A inclusão de uma série de diluições de controlo positivo permite determinar a sensibilidade da detecção de priões para um dado ensaio (figura 6A).
Ao examinar amostras de extrato de swab de superfície, as superfícies que não apresentam semeadura acima do limite de fluorescência positivo predeterminado podem ser consideradas príon negativo (Figura 6B). Por outro lado, os extratos de swab de superfície contaminados com príons mostrarão capacidades de semeadura acima do limite de fluorescência positivo, embora a razão do ponto máximo (MPR) e o tempo de fluorescência possam variar em comparação com o controle positivo da placa incluído (Figura 6B). A capacidade do método de avaliar a desinfecção adequada é destacada pelas superfícies contaminadas com príon tratadas com alvejante, que agora não conseguem semear RT-QuIC (Figura 6B).
É importante ressaltar que, embora nosso laboratório defina uma amostra positiva como uma amostra que ultrapassa o limite de fluorescência positiva definido em pelo menos metade dos poços replicados, é necessário que cada laboratório defina seus próprios padrões. A taxa de formação de amilóide (RAF) e o tempo de fluorescência também podem ser usados para ajudar a estabelecer limites de positividade específicos do laboratório.
Observamos resultados de artefatos de superfície que ultrapassam o limiar de fluorescência positivo, mas com curvas cinéticas alteradas e após um tempo anormalmente longo para fluorescência em comparação com amostras de controle positivo (Figura 6C). Esses resultados devem ser interpretados com cautela, pois podem ser causados pela presença de poeira ou produtos químicos residuais presentes em uma superfície. Esses achados destacam a necessidade de limpeza geral do laboratório, bem como critérios para diferenciar entre semeadura verdadeiro positivo e falso positivo.
O descarte de resíduos sólidos e líquidos de risco biológico deve ser feito seguindo as diretrizes atuais de descarte de risco biológico de uma determinada instituição. As técnicas comuns de desinfecção de príons incluem tratamento com hidróxido de sódio, hipoclorito de sódio (alvejante) ou autoclavagem a 134 °C por 18 min 43,44,45,46.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig01.jpg"> 
Figura 1: Visão geral esquemática do teste de furto do laboratório de segurança de príons. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig02.jpg"> 
Figura 2: Exemplo de layout do site de swab. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig03.jpg"> 
Figura 3: O projeto de experimento de amostra para controles de swab incluiu teste de swipe de laboratório de segurança de príon. (A) Layout de amostra para controles de extrato de swab negativo e positivo. (B) Os controles de extrato de swab negativo e positivo devem ser ressuspensos com 50 μL de H2O. Deve ser gerada uma diluição de 10 vezes do extracto de esfregaço ressuspenso diluindo-o numa solução de diluição tecidual. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig04.jpg"> 
Figura 4: Projeto de experimento de amostra para extratos de swab de superfície do teste de furto de laboratório de segurança de príons. (A) Layout da amostra para extratos de swab de superfície. (B) As amostras de extrato de swab de superfície devem ser ressuspensas com 20 μL de solução de diluição de tecido. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig05.jpg"> 
Figura 5: Teste mensal de furto de laboratório de segurança de príons. Fluxograma usado para interpretar os resultados e determinar a resposta apropriada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig06.jpg"> 
Figura 6: Experimento de swab de superfície representativo. (A) Placa de controle de swab de superfície contendo controles de extrato de swab negativo em triplicata (DPBS, homogeneizado de cérebro de hamster não infectado 10-4 e 10-10) e controles de extrato de swab positivo em triplicata (homogeneizado cerebral HY 10-3). (B) Extratos de swab representativos para superfícies de bancada, vidro e aço inoxidável (SS) que foram esfregadas antes da contaminação, após a contaminação com HY 10-3 e após o tratamento com alvejante de superfícies contaminadas. (C) Comparação de rastreamento de fluorescência de homogeneizado cerebral não infectado 10-4, homogeneizado cerebral HY 10-3 e o extrato de swab da bancada revestido com uma fina película de poeira. Os controles de placa negativa para os painéis A e B incluem um branco (solução de diluição de tecido) e um homogeneizado de cérebro de hamster não infectado 10-4. O painel B inclui a adição de homogeneizado cerebral não infectado 10-4 e o controle positivo da placa do homogeneizado cerebral HY 10-3. Um limiar de fluorescência positivo (ilustrado por uma linha tracejada vermelha) foi determinado como sendo 2. A razão do ponto máximo (MPR) relatada é a fluorescência máxima dividida pela leitura inicial de fluorescência obtida pelo leitor de placas. Cada ponto representa uma réplica técnica do poço para um determinado tipo de amostra. A média e o desvio padrão são apresentados. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Tabela 1: Exemplo de formulário de documentação mensal do local de swab. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Table%201.xlsx" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>
Figura suplementar 1: Modelo de layout do site de swabbing. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%201.pdf" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
Figura suplementar 2: Formulário de documentação mensal do local de swabbing. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%202.pdf" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>

Teste de furto do laboratório de segurança de príons

Transmission of iatrogenic prion disease has occurred from contaminated neurosurgical tools, transplant materials, and occupational exposure to ...

Research

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Immunology and Infection

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