Name: Administração de anestésicos voláteis a larvas de peixe-zebra para observação comportamental (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 55 s
Description: Aprenda a administrar anestésicos voláteis em larvas de peixe-zebra para experimentos comportamentais em câmara fechada. Este método acessível utiliza Danio rerio para estudar farmacologia anestésica sem equipamentos caros.

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<ol><li>Wasilczuk, A. Z., Maier, K. L., Kelz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+as+a+model+organism+for+assessing+anesthetic+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">The mouse as a model organism for assessing anesthetic sensitivity.</a> Methods Enzymol. 602, 211-228 (2018).</li>
<li>Shortal, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+brain+target-controlled+infusion+of+propofol+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and validation of brain target-controlled infusion of propofol in mice.</a> PLoS One. 13, 1-14 (2018).</li>
<li>Halbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yolk+sac+of+zebrafish+embryos+as+backpack+for+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Yolk sac of zebrafish embryos as backpack for chemicals.</a> Environ Sci Technol. 54 (16), 10159-10169 (2020).</li>
<li>Bedell, V. M., Meng, Q. C., Pack, M. A., Eckenhoff, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vertebrate+model+to+reveal+neural+substrates+underlying+the+transitions+between+conscious+and+unconscious+states%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A vertebrate model to reveal neural substrates underlying the transitions between conscious and unconscious states.</a> Sci Rep. 10, 1-10 (2020).</li>
<li>Stetter, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+anesthesia+in+amphibians%3A+Comparison+of+five+application+methods%5BTitle%5D)+AND+%22In+American+Association+of+Zoo+Veterinarians%22%5BJournal%5D)">Isoflurane anesthesia in amphibians: Comparison of five application methods.</a> In American Association of Zoo Veterinarians. , Puerto Vallarta, Mexico. 255-257 (1996).</li>
<li>Woll, K. A., Eckenhoff, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+to+identify+anesthetic+ligands+using+Xenopus+laevis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening to identify anesthetic ligands using Xenopus laevis tadpoles.</a> Methods Enzymol. 602, 177-187 (2018).</li>
<li>Meyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zur+Theorie+der+Alkoholnarkose%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Exp+Pathol+Pharmakol%22%5BJournal%5D)">Zur Theorie der Alkoholnarkose.</a> Arch Exp Pathol Pharmakol. 46, 338-346 (1901).</li>
<li>Downes, H., Courogen, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+effects+of+anesthetics+in+tadpole+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Contrasting effects of anesthetics in tadpole bioassays.</a> J Pharmacol Exp Ther. 278, 284-296 (1996).</li>
<li>Kalueff, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+comprehensive+catalog+of+zebrafish+behavior+1.0+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond.</a> Zebrafish. 10, 70-86 (2013).</li>
<li>Abramova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+pregnanolone+glutamate+and+its+metabolites+on+GABAA+and+NMDA+receptors+and+zebrafish+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of pregnanolone glutamate and its metabolites on GABAA and NMDA receptors and zebrafish behavior.</a> ACS Chem Neurosci. 14, 1870-1883 (2023).</li>
<li>Germann, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+behavioral+effects+of+GABAergic+low-and+high-efficacy+neuroactive+steroids+in+the+zebrafish+larvae+assay%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Comparison of behavioral effects of GABAergic low-and high-efficacy neuroactive steroids in the zebrafish larvae assay.</a> ACS Chem Neurosci. 15, 909-915 (2024).</li>
<li>Hoyt, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photomotor+responses+in+zebrafish+and+electrophysiology+reveal+varying+interactions+of+anesthetics+targeting+distinct+sites+on+gamma-aminobutyric+acid+type+A+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Photomotor responses in zebrafish and electrophysiology reveal varying interactions of anesthetics targeting distinct sites on gamma-aminobutyric acid type A receptors.</a> Anesthesiology. 137, 568(2022).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+locomotor+activities+of+zebrafish+larvae+under+the+influence+of+various+neuroactive+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Characterization of the locomotor activities of zebrafish larvae under the influence of various neuroactive drugs.</a> Annals Trans Med. 6, 173(2018).</li>
<li>McCarroll, M. N., Gendelev, L., Kinser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+behavioural+profiling+identifies+GABA+and+serotonin+receptor+ligands+related+to+sedation+and+paradoxical+excitation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Zebrafish behavioural profiling identifies GABA and serotonin receptor ligands related to sedation and paradoxical excitation.</a> Nat Commun. 10, 4078(2019).</li>
<li>Plasencia, D. M., Rodgers, L. H., Knighton, A. R., Eckenhoff, R. G., White, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonism+of+propofol+anesthesia+by+alkyl-fluorobenzene+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antagonism of propofol anesthesia by alkyl-fluorobenzene derivatives.</a> Sci Rep. 14, 15943(2024).</li>
<li>Dash, S. N., Lipika, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flight+for+fish+in+drug+discovery%3A+A+review+of+zebrafish-based+screening+of+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Lett%22%5BJournal%5D)">Flight for fish in drug discovery: A review of zebrafish-based screening of molecules.</a> Biology Lett. 19, 20220541(2023).</li>
<li>Nelson, J. C., Michael, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+behavior+as+a+gateway+to+nervous+system+assembly+and+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Zebrafish behavior as a gateway to nervous system assembly and plasticity.</a> Development. 149, 177998(2022).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sevoflurane+postconditioning+ameliorates+cerebral+hypoxia%2Freoxygenation+injury+in+zebrafish+involving+the+Akt%2FGSK-3%CE%B2+pathway+activation+and+the+microtubule-associated+protein+2+promotion%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Sevoflurane postconditioning ameliorates cerebral hypoxia/reoxygenation injury in zebrafish involving the Akt/GSK-3β pathway activation and the microtubule-associated protein 2 promotion.</a> Biomed Pharmacother. 175, 116693(2024).</li>
<li>Abdallah, S. J., Thomas, B. S., Jonz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquatic+surface+respiration+and+swimming+behaviour+in+adult+and+developing+zebrafish+exposed+to+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Aquatic surface respiration and swimming behaviour in adult and developing zebrafish exposed to hypoxia.</a> J Exp Biol. 218, 1777-1786 (2015).</li>
<li>Targ, A. G., Yasuda, N., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solubility+of+I-653%2C+sevoflurane%2C+isoflurane%2C+and+halothane+in+plastics+and+rubber+composing+a+conventional+anesthetic+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Solubility of I-653, sevoflurane, isoflurane, and halothane in plastics and rubber composing a conventional anesthetic circuit.</a> Anesth Analg. 69, 218-225 (1989).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-selective+Anesthetic+insensitivity+of+zebrafish+lacking+%CE%B3-aminobutyric+acid+Type+A+receptor+%CE%B23+subunits%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Drug-selective Anesthetic insensitivity of zebrafish lacking γ-aminobutyric acid Type A receptor β3 subunits.</a> Anesthesiology. 131, 1276-1291 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Microplacas de vidro de 96 poços</td><td>Zinsser América do Norte</td><td>3600500</td><td>"Essas microplacas de vidro são feitas de vidro borossilicato especial de alta pureza e resistente à temperatura e as superfícies são polidas com ácido. As placas são retangulares na área de microplaca SBS padrão (85 x 127 mm). Essas microplacas de reator de vidro são projetadas principalmente para uso com aplicações químicas e são resistentes a temperaturas de até 530&deg; C. Eles podem ser autoclavados. Eles são usinados a partir de uma folha de vidro homogênea e apresentam geometria e forma uniformes para fornecer temperaturas consistentes de poço a poço (dentro de 0,2 graus C típicos)."</td></tr><tr><td>Frascos de 2,0 mL transparentes, grande abertura, rosca de 9 mm&nbsp;</td><td>Ciências da Vida Chemglass</td><td>CV-1150-1232</td><td>"Com uma abertura 40% maior, esses frascos são projetados especificamente para funcionar em amostradores automáticos de braço robótico. Eles também incorporam o design exclusivo do frasco de degrau que centraliza com precisão uma inserção de volume limitado no gargalo do frasco. "</td></tr><tr><td>Fita Dupla Face 3M 9490LE</td><td>AbbVie Inc</td><td>24WG90</td><td>"A Fita Dupla Face 3M 9490LE com Adesivo de Laminação 3M 300LSE fornece alta resistência de união para a maioria das superfícies, incluindo muitos plásticos de baixa energia superficial, como polipropileno e tintas revestidas a pó. O adesivo acrílico também oferece excelente adesão a superfícies levemente contaminadas com óleo normalmente usado em peças de máquinas. A fita dupla face 3M 9490LE oferece o recurso adicional do Adesivo de Laminação 3M 300MP em um lado para fornecer excelente resistência de união a uma variedade de materiais de espuma e tecido (6 pol x 5 jardas)"</td></tr><tr><td>Câmara de Observação DanioVision</td><td>Noldus</td><td>DVOC-0041</td><td>"O DanioVision é um sistema completo, projetado para o teste de alto rendimento de larvas de peixe-zebra em placas de vários poços. Inclui a Câmara de Observação e o renomado software de rastreamento de vídeo EthoVision XT."</td></tr><tr><td>Unidade de controle de temperatura DanioVision</td><td>Noldus</td><td>DVTCU-0011</td><td>"A Unidade de Controle de Temperatura DanioVision é um sistema de fluxo: a água flui uniformemente sob a placa do poço na temperatura de sua escolha. A temperatura é a mesma em toda a placa do poço.</td></tr><tr><td>Software Ethovision XT16</td><td>Noldus</td><td>NSE-EV-BASE</td><td>"O EthoVision XT é o software de rastreamento de vídeo mais amplamente aplicado que rastreia e analisa o comportamento, o movimento e a atividade de qualquer animal, marca registrada da Noldus"</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Cuidados Intensivos Piramal</td><td>NDC # 66794-017-10</td><td>Líquido para inalação, um anestésico inalatório não inflamável e não explosivo, contendo 100 mL de isoflurano. Armazenado em temperatura ambiente controlada 20&ordm; para 25&ordm; C</td></tr><tr><td>Primer Adesivo Instantâneo Scotch-Weld AC79 Transparente</td><td>3M</td><td>"62-3916-0860-1 (ID do produto) C2103N (lote)"</td><td>"O Primer Adesivo Instantâneo 3M Scotch-Weld AC79 foi projetado para uso em elastômeros de baixa energia superficial difíceis de colar, como EPDM, silicone e outras borrachas. A preparação e a aplicação da superfície são diretas e o primer adesivo é de secagem rápida para manter os trabalhos em andamento rapidamente."</td></tr><tr><td>Folhas de silicone com 0,5 mm de espessura</td><td>vários fornecedores</td><td>N/A</td><td>Folhas de silicone translúcidas foram compradas de vários fornecedores</td></tr><tr><td>Brayer de Borracha Dura Pop-in Speedball com Estrutura de Plástico, 4 Polegadas"</td><td>Speedball</td><td>793728</td><td>"O Speedball Pop-In Hard Brayer tem um rolo que se solta para facilitar a limpeza. Plástico, estrutura de uma peça com rolo destacável de 4 polegadas de largura. Feito de borracha de goma natural pura com acabamento retificado. O brayer de borracha dura tem 4 polegadas de largura com uma estrutura de plástico resistente e é ótimo para aplicação de cola"</td></tr><tr><td>Tampas de rosca SureSTART de 9 mm, nível 2 Aplicações de alto rendimento, Tipo: Tampa de rosca AVCS PP preto, Silicone branco/PTFE vermelho Septos de 1,0 mm</td><td>Thermo Científico</td><td>6ASC9ST1B</td><td>"Use as tampas de rosca Thermo Scientific SureSTART de 9 mm com frascos de rosca com abertura de 9 mm. As tampas de nível 2 de desempenho são fabricadas e testadas para garantir baixo sangramento, robustez e reprodutibilidade dos resultados para análises de GC-MS e LC-MS de rotina. Escolha entre tampas de polipropileno com septos de silicone/PTFE multiuso de vários valores de dureza projetados para reduzir os problemas de agulha do amostrador automático. Nossas tampas AVCS incorporam a tecnologia Advanced Vial Closure System para garantir a compressão ideal da vedação ao fechar um frasco."</td></tr><tr><td>Ultane Sevoflurano</td><td>AbbVie Inc</td><td>NDC # 0074-4456-04</td><td>Líquido Volátil para Inalação, é embalado em frascos de cor âmbar contendo 250 mL de sevoflurano. Armazenado a temperatura ambiente controlada 15&ordm; a 30&ordm; C</td></tr><tr><td>Frascos de Cintilação Líquida Wheaton, Tampas Anexadas a Frascos, Vidro, Folha de Metal / Polpa, 24-400, 20 mL&nbsp;</td><td>DWK Ciências da Vida</td><td>986561</td><td>Frascos de cintilação de 20 mL convertidos de tubos de vidro borossilicato Tipo I, PET ou HDPE. Disponível com tampa anexada.</td></tr></tbody></table>

administração de anestésicos voláteis a larvas de peixe-zebra para observação comportamental

Administration of Volatile Anesthetics to Zebrafish Larvae for Behavioral Observation

Comparação com a observação tradicional de poço aberto Para avaliar se o selamento adesivo tem algum efeito sobre o movimento espontâneo, foi feita uma comparação entre os controles em poços abertos e selados. Como visto na Figura 2A, nenhuma diferença estatisticamente significativa no movimento foi observada entre esses grupos para a duração padrão de ~ 30 minutos usada nos experimentos descritos neste artigo. Reconhecendo que outros paradigmas experimentais podem precis...

Administração de anestésicos voláteis a larvas de peixe-zebra para observação comportamental

This study describes a unique method for administering volatile anesthetics, such as isoflurane and sevoflurane, to larval zebrafish during behavioral ...

administration-volatile-anesthetics-to-zebrafish-larvae-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Demonstramos injeção intraperitoneal em peixe-zebra adulto. Usamos a 10 mL NanoFil micro controlado por um controlador MICRO4 e III UltraMicroPump. Esta demonstração inclui o uso de água fria como um anestésico.

Injeção intraperitoneal em Zebrafish Adulto

Source: Morsch, M.,  et. al., Triggering Cell Stress and Death Using UV Laser Confocal Microscopia Convencional. J. Vis. Exp. (2017) Neste vídeo, exploramos a técnica de ablação a laser UV de alta intensidade para direcionar e estudar com precisão neurônios individuais em peixes-zebra transgênicos. Demonstramos como preparar, imobilizar e visualizar respostas neuronais, destacando a dinâmica celular da lesão e recuperação.

Ablação seletiva a laser de neurônio único em uma larva de peixe-zebra usando um microscópio confocal

Fonte: Schramm, P. et al. Imagem in vivo de tecido cerebral totalmente ativo em larvas e juvenis de peixe-zebra acordados por remoção de crânio e pele. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra a imagem in vivo de neurônios cerebelares em larvas transgênicas de peixe-zebra, que expressam proteínas fluorescentes em neurônios de Purkinje. O processo envolve anestesiar as larvas, imobilizá-las em agarose e remover cuidadosamente a pele pigmentada para aumentar a penetração da luz e a intensidade da...

Imagem in vivo do cérebro larval de peixe-zebra para visualização de neurônios cerebelares

Um método simples para gravar os potenciais de campo extracelulares no larval do peixe-zebra é descrita prosencéfalo. O método proporciona um...

Prosencéfalo gravação eletrofisiológico em larval Zebrafish

O nosso laboratório desenvolveu um novo sistema de imagem automatizado de alto débito, que é útil para a detecção de vários comportamentos diferentes em larvas de peixe-zebra de 7 dias de idade. O sistema pode ser utilizado para detectar alterações subtis no comportamento após as larvas foram expostas a agentes tóxicos ambientais ou de produtos farmacêuticos.

Automatizados análises comportamentais de alto rendimento em larvas do peixe

Manipulações direcionadas para causar estresse direcionado ou morte em células individuais têm sido relativamente difíceis de realizar. Aqui, uma abordagem de ablação com resolução de célula única para estressar e matar seletivamente células individuais em cultura de células e animais vivos é descrita com base em um laser UV confocal padrão.

Provocando estresse celular e morte utilizando convencional UV laser microscopia confocal

Aqui, apresentamos um método confiável, minimamente invasivo e econômico para registrar e interpretar eletrocardiogramas em zebrafish adulto anestesiado ao vivo.

Eletrocardiografia de superfície vivo para zebrafish adulto

Este artigo descreve um método para montar embriões frágeis do zebrafish para a microscopia confocal prolongada do tempo-lapso. Este método de baixo custo é fácil de executar usando pratos regulares de microscopia com fundo de vidro para imagens em qualquer microscópio invertido. A montagem é realizada em camadas de agarose em diferentes concentrações.

Um método de montagem em camadas para a microscopia confocal de lapso de tempo prolongado de embriões zebrafish inteiros

A ablação a laser é uma tecnologia amplamente aplicável para estudar a regeneração em sistemas biológicos. O protocolo apresentado descreve o uso de um microscópio confocal padrão de varredura a laser para ablação a laser e imagens subsequentes de lapso de tempo de células interneuromast regeneradoras na linha lateral do zebrafish.

Ablação e Regeneração a laser baseada em microscópio confocal em células interneuromast baseadas em zebrafish

Aqui apresentamos um método para a imagem do cérebro embrionário de zebrafish in vivo upto larval e juvenil estágios. Este procedimento microinvasivo, adaptado a partir de abordagens eletrofisiológicas, fornece acesso a detalhes celulares e subcelulares de neurônio maduro e pode ser combinado com estudos optogenéticos e neurofarmaológicos para caracterização da função cerebral e intervenção medicamentosa.

In vivo Imagem de Tecido Cerebral Totalmente Ativo em Larvas de Zebrafish Acordados e Juvenis por Remoção de Crânio e Pele

Aqui, apresentamos um protocolo detalhado para examinar a atividade neural em regiões cerebrais de peixes-zebra transgênicos que expressam indicadores de cálcio GCaMP usando microscopia confocal.

In vivo Imagem de fluorescência confocal da atividade neural induzida por estimulação sensorial em peixes-zebra larvais parcialmente contidos

Aprenda a administrar anestésicos voláteis em larvas de peixe-zebra para experimentos comportamentais em câmara fechada. Este método acessível utiliza Danio rerio para estudar farmacologia anestésica sem equipamentos caros.

Administração de anestésicos voláteis a larvas de peixe-zebra para observação comportamental

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