Name: Células estromais heteromulticelulares em culturas 3D sem andaimes de células epiteliais cancerígenas para impulsionar a invasão (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: Explore métodos de cultura 3D sem andaimes para estudar interações heterocelulares em câncer de mama e pâncreas. Esta técnica reproduz microambientes tumorais in vivo para investigar metástase e resistência terapêutica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>de Visser, K. E., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolving+tumor+microenvironment%3A+From+cancer+initiation+to+metastatic+outgrowth%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The evolving tumor microenvironment: From cancer initiation to metastatic outgrowth.</a> Cancer Cell. 41 (3), 374-403 (2023).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+The+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: The next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li>
<li>Anderson, N. M., Simon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">The tumor microenvironment.</a> Curr Biol. 30 (16), R921-R925 (2020).</li>
<li>Baghban, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+microenvironment+complexity+and+therapeutic+implications+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Tumor microenvironment complexity and therapeutic implications at a glance.</a> Cell Commun Signal. 18 (1), 59(2020).</li>
<li>Sahai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+advancing+our+understanding+of+cancer-associated+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">A framework for advancing our understanding of cancer-associated fibroblasts.</a> Nat Rev Cancer. 20 (3), 174-186 (2020).</li>
<li>Erdogan, B., Webb, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+fibroblasts+modulate+growth+factor+signaling+and+extracellular+matrix+remodeling+to+regulate+tumor+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated fibroblasts modulate growth factor signaling and extracellular matrix remodeling to regulate tumor metastasis.</a> Biochem Soc Trans. 45 (1), 229-236 (2017).</li>
<li>Iozzo, R. V., Sanderson, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteoglycans+in+cancer+biology%2C+tumour+microenvironment+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Proteoglycans in cancer biology, tumour microenvironment and angiogenesis.</a> J Cell Mol Med. 15 (5), 1013-1031 (2011).</li>
<li>Amersfoort, J., Eelen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulation+by+endothelial+cells+-+partnering+up+with+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunomodulation by endothelial cells - partnering up with the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 22 (9), 576-588 (2022).</li>
<li>Balani, S., Nguyen, L. V., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+process+of+human+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Modeling the process of human tumorigenesis.</a> Nat Commun. 8 (1), 15422(2017).</li>
<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Wang, E., Xiang, K., Zhang, Y., Wang, X. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+%28PDOs%29+and+PDO-derived+xenografts+%28PDOXs%29%3A+New+opportunities+in+establishing+faithful+pre-clinical+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Cent%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids (PDOs) and PDO-derived xenografts (PDOXs): New opportunities in establishing faithful pre-clinical cancer models.</a> J Natl Cancer Cent. 2 (4), 263-276 (2022).</li>
<li>Kamb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+wrong+with+our+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">What's wrong with our cancer models.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (2), 161-165 (2005).</li>
<li>Tuveson, D., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+modeling+meets+human+organoid+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer modeling meets human organoid technology.</a> Science. 364 (6444), 952-955 (2019).</li>
<li>Zitvogel, L., Pitt, J. M., Daillère, R., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+in+oncoimmunology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models in oncoimmunology.</a> Nat Rev Cancer. 16 (12), 759-773 (2016).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models+in+cancer+therapy%3A+technologies+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models in cancer therapy: technologies and applications.</a> Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 160(2023).</li>
<li>Ben-David, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenografts+undergo+mouse-specific+tumor+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenografts undergo mouse-specific tumor evolution.</a> Nat Genet. 49 (11), 1567-1575 (2017).</li>
<li>Byrne, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrogating+open+issues+in+cancer+precision+medicine+with+patient-derived+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Interrogating open issues in cancer precision medicine with patient-derived xenografts.</a> Nat Rev Cancer. 17 (4), 254-268 (2017).</li>
<li>Ivanics, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+cryopreservation+and+reanimation+outcomes+are+dependent+on+cryoprotectant+type%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft cryopreservation and reanimation outcomes are dependent on cryoprotectant type.</a> Lab Invest. 98 (7), 947-956 (2018).</li>
<li>Biju, T. S., Priya, V. V., Francis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+three-dimensional+cell+culture+in+therapeutics+and+diagnostics%3A+an+updated+review%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Deliv+and+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Role of three-dimensional cell culture in therapeutics and diagnostics: an updated review.</a> Drug Deliv and Transl Res. 13 (9), 2239-2253 (2023).</li>
<li>Urzì, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+cultures%3A+The+bridge+between+in+vitro+and+in+vivo+models%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell cultures: The bridge between in vitro and in vivo models.</a> Int J Mol Sci. 24 (15), 12046(2023).</li>
<li>Cacciamali, A., Villa, R., Dotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+cell+cultures%3A+Evolution+of+an+ancient+tool+for+new+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">3D cell cultures: Evolution of an ancient tool for new applications.</a> Front Physiol. 13, 836480(2022).</li>
<li>Abuwatfa, W. H., Pitt, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-based+3D+cell+culture+models+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Scaffold-based 3D cell culture models in cancer research.</a> J Biomed Sci. 31 (1), 7(2024).</li>
<li>Yakavets, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+co-culture+3D+breast+cancer+model+for+investigation+of+fibrosis+induced+by+external+stimuli%3A+optimization+study%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Advanced co-culture 3D breast cancer model for investigation of fibrosis induced by external stimuli: optimization study.</a> Sci Rep. 10 (1), 21273(2020).</li>
<li>Mohammadrezaei, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+and+elucidating+the+post-printing+behavior+of+3D+printed+cancer+cells+in+hydrogel+structures+by+integrating+in-vitro+and+in-silico+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Predicting and elucidating the post-printing behavior of 3D printed cancer cells in hydrogel structures by integrating in-vitro and in-silico experiments.</a> Sci Rep. 13 (1), 1211(2023).</li>
<li>Kuen, J., Darowski, D., Kluge, T., Majety, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+cell%2Ffibroblast+co-culture+induces+M2+like+macrophages+that+influence+therapeutic+response+in+a+3D+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer cell/fibroblast co-culture induces M2 like macrophages that influence therapeutic response in a 3D model.</a> PLOS ONE. 12 (7), e0182039(2017).</li>
<li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics+2022%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics 2022: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).</li>
<li>Kennecke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+behavior+of+breast+cancer+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Metastatic behavior of breast cancer subtypes.</a> J Clin Oncol. 28 (20), 3271-3277 (2010).</li>
<li>Neve, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+collection+of+breast+cancer+cell+lines+for+the+study+of+functionally+distinct+cancer+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A collection of breast cancer cell lines for the study of functionally distinct cancer subtypes.</a> Cancer Cell. 10 (6), 515-527 (2006).</li>
<li>Pingitore, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+multilineage+3D+spheroids+as+a+model+of+liver+steatosis+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Human multilineage 3D spheroids as a model of liver steatosis and fibrosis.</a> Int J Mol Sci. 20 (7), 1629(2019).</li>
<li>Bar-Ephraim, Y. E., Kretzschmar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+immunological+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Organoids in immunological research.</a> Nat Rev Immunol. 20 (5), 279-293 (2020).</li>
<li>Beerkens, A. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+OXPHOS+inhibitor-mediated+alleviation+of+hypoxia+using+high-throughput+live+cell-imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metab%22%5BJournal%5D)">Characterizing OXPHOS inhibitor-mediated alleviation of hypoxia using high-throughput live cell-imaging.</a> Cancer Metab. 12 (1), 13(2024).</li>
<li>Feaster, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel+mattress%5BTitle%5D)+AND+%22Cir+Res%22%5BJournal%5D)">Matrigel mattress.</a> Cir Res. 117 (12), 995-1000 (2015).</li>
<li>Huang, Z., Yu, P., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+triple-negative+breast+cancer+MDA-MB-231+cell+spheroid+model%5BTitle%5D)+AND+%22Onco+Targets+Ther%22%5BJournal%5D)">Characterization of triple-negative breast cancer MDA-MB-231 cell spheroid model.</a> Onco Targets Ther. 13, 5395-5405 (2020).</li>
<li>Nam, S., Khawar, I. A., Park, J. K., Chang, S., Kuh, H. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+context-dependent+interaction+between+cancer+and+stellate+cells+in+hetero-type+multicellular+spheroids+of+pancreatic+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Cellular context-dependent interaction between cancer and stellate cells in hetero-type multicellular spheroids of pancreatic tumor.</a> Biochem Biophys Res Commun. 515 (1), 183-189 (2019).</li>
<li>Monteiro, M. V., Gaspar, V. M., Ferreira, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+3D+in+vitro+tumor+models+for+screening+cell+aggregation+mediated+drug+response%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Hydrogel 3D in vitro tumor models for screening cell aggregation mediated drug response.</a> Biomater Sci. 8 (7), 1855-1864 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubos de Centrífuga de Polipropileno de 15 mL&nbsp; &nbsp;</td><td>Falcão&nbsp;</td><td>14-959-53A&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Microplaca de Fundo em U, 96-Well, Tratada</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>12566432&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Superfície tratada para cultura de células em prato de 100 mm&nbsp;</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>130182&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Incubadoras de CO2 de 170 L</td><td>VWR</td><td>VWR51014991(10810902)</td><td></td></tr><tr><td>200 Barreiras Autovedantes Pontas de Pipetas</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-682-255</td><td></td></tr><tr><td>500 mL DMEM/Hams F-12, [+] L-glutamina</td><td>Corning</td><td>10-090-CV</td><td></td></tr><tr><td>1000 Barreiras Autovedantes Pontas de Pipetas</td><td>Molecular Biology Products Inc.</td><td>2179HR</td><td></td></tr><tr><td>Animal-Free Recombinante Humano EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>Repetidor de Pipeta Automatizado E3x</td><td>Eppendorf</td><td>4987000410</td><td></td></tr><tr><td>Solução de membrana de porão</td><td>Huntsman Cancer Institute&nbsp;</td><td>https://healthcare.utah.edu/huntsmancancerinstitute/</td><td></td></tr> <tr><td>Armadura de Laboratório de Banho de Contas</td><td>&nbsp;</td><td></td><td></td>74300706</tr><tr><td>Biorender&nbsp;</td><td>Biorender</td><td>Biorender.com&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Gabinetes de Fluxo Laminar de Biossegurança</td><td>Incubadora Automatizada Thermo Scientific</td><td>300590389</td><td></td></tr><tr><td>BioSpa 8</td><td>A Agilent&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td>23082120</tr><tr><td>Contador de Células&nbsp;</td>Lâminas <td>de Câmara de Contagem de</td> Células <td>AMQAF2000</td><td></td>Invitrogen</tr><tr><td></td><td>Thermo Scientific</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker Vermelho Profundo&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>C34565&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>13100675</tr><tr><td>Subunidade B da Toxina da Cólera</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9903-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Combitips avançado, Estéril, 5.0 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-683-714</td><td></td></tr><tr><td>Citação 10&nbsp; Leitor de Imagens</td><td>Agilent&nbsp;</td><td></td><td></td>2105245</tr><tr><td>Inibidor de tripsina definido&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>R007100&nbsp;</td><td>inibidor de tripsina de soja em 1x PBS</td></tr><tr><td>Soro de Cavalo Doador, 500 mL, Origem dos Estados Unidos</td><td>Corning</td><td>35-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>10-013-CV&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Software Excel&nbsp;</td><td>Microsoft Office 365&nbsp;</td><td></td><td></td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</tr><tr><td>Soro Fetal Bovino</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>26140079&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino, qualificado, origem americana</td><td>Thermo Scientific</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin Sulfate, Líquido</td><td>Corning</td><td>30-005-CR</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução de hidrocortisona,50 &micro; M, filtrado estéril, BioXtra</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6909-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Image J Software&nbsp;</td><td>Fiji</td><td>https://imagej.net/ij/</td><td></td></tr> <tr><td>Solução de insulina humana</td><td>Lupa Sigma-Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>01-182-392&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de Microcentrífuga</td><td>Costar&nbsp;</td><td>3621&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Olympus</td><td>CKX53SF</td><td></td></tr><tr><td>Mini Lightbox&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>361044708&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sondas Moleculares CellTracker Blue CMAC Dye&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>C2110&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sondas Moleculares CellTracker Corante Laranja CMRA&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>C34551&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Penicilina-Estreptomicina</td><td>Cytiva</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Penicilina-Estreptomicina&nbsp;</td><td>Cytiva&nbsp;</td><td>SV30010&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de Contraste de Fase&nbsp;</td><td>Eco</td><td></td><td></td>RVSF1000</tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>SH3025601&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de Pipeta</td><td>Corning</td><td>4099</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta 100 &ndash; 1,000 &micro; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta 20 &ndash; 200 &micro; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>Prism&nbsp;</td><td>Software GraphPad</td><td>https://www.graphpad.com/features</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 com L-glutamina e 25 mM HEPES</td><td>Corning</td><td>10-041-CV</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica, 10 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>170356N</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica, 25 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>170357N</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica, 5 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>170355N</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Azul de Tripano, 0,4%&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>25900CI&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA, 0,25%&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>25053CI&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

células estromais heteromulticelulares em culturas 3d sem andaimes de células epiteliais cancerígenas para impulsionar a invasão

Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion

Neste estudo, desenvolvemos um sistema de cultura celular para gerar esferoides 3D heteromulticelulares constituídos por células epiteliais e estromais com morfologia semelhante a organoides. Os esferoides foram estabelecidos por plaqueamento de 2.000 células epiteliais em condições de monocultura. Em condições de co-cultura de dois tipos de células, os esferoides foram estabelecidos por plaqueamento de 1.000 células epiteliais e 1.000 células estromais. Em condições de co-cultura de três tipos de células, os esferoides foram estabelecidos por plaqueamento de 1.000 células epiteliais e dois tipos diferentes de células estromais de 500 células de cada tipo de célula. A montante do estabelecimento do esferóide, as células podem ser coradas com corantes rastreadores de células fluorescentes que permitem monitorar a organização espacial celular. Após 24 h de formação inicial de esferoides, as aplicações a jusante incluem perturbações farmacológicas, imagens e coleta de amostras. A imagem de lapso de tempo é útil para avaliar mudanças no comportamento e morfologia do esferóide, incluindo área e circularidade (Figura 1A). 24 h após o reforço, os esferoides podem ser incorporados em um ambiente de andaime, e a imagem de lapso de tempo pode ser usada para avaliar o início de estruturas invasivas do esferóide (Figura 1B). A coleta de amostras de esferoides heteromulticelulares tem muitas aplicações, incluindo perfis genômicos e proteômicos nos níveis global e de célula única por meio de técnicas experimentais, como sequenciamento de RNA, sequenciamento de RNA de célula única, sequenciamento proteômico e imunofluorescência cíclica.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig01.jpg"> 
Figura 1: Representação esquemática do processo de cultura de células 3D e possíveis aplicações. (A) A suspensão celular de células epiteliais com células estromais não epiteliais é pipetada em placas de fixação ultrabaixa 3D para formar esferoides. Os esferoides são fotografados por microscopia de campo claro a cada 24 h durante 96 h. As linhagens celulares podem ser coradas com corantes rastreadores de células fluorescentes para microscopia de campo amplo a jusante antes de induzir a formação de esferóides ou podem ser perturbadas farmacologicamente após a formação de esferoides. Parâmetros esferóides como morfologia, área, circularidade e organização podem ser analisados. (B) Esferóides de células epiteliais e epiteliais com células estromais são formados usando o protocolo de A. Os esferoides foram estabelecidos por plaqueamento de 2.000 células epiteliais em condições de monocultura. Em condições de co-cultura de dois tipos de células, os esferoides foram estabelecidos por plaqueamento de 1.000 células epiteliais e 1.000 células estromais. Em condições de co-cultura de três tipos de células, os esferoides foram estabelecidos por plaqueamento de 1.000 células epiteliais e dois tipos diferentes de células estromais de 500 células de cada tipo de célula. Após 24 h, uma solução de extrato de membrana basal semelhante a um andaime é sobreposta e as imagens são capturadas em microscopia de campo claro a cada 24 h por 120 h. (C) Culturas 3D heteromulticelulares estabelecidas sem andaimes e baseadas em andaimes podem ser usadas para uma variedade de aplicações a jusante, como imunofluorescência cíclica, sequenciamento de RNA de célula única e proteômica de célula única. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Os esferoides de monocultura MCF10A, MCF10Ca1h e BT-474 mantêm um fenótipo esférico compacto por até 96 h após o plaqueamento. Quando co-cultivados com células endoteliais microvasculares EA.hy926, fibroblastos BJ-5ta e / ou células semelhantes a monócitos THP-1, os esferoides desenvolveram protrusões celulares na periferia, que se tornaram mais pronunciadas em 96 h ( Figura 2A-C ). É importante ressaltar que essas saliências, fenômenos de brotamento e compactação dos esferoides representam variações da organização celular do esferóide cancerígeno e das células estromais co-cultivadas que se correlacionaram com a invasividade 3D após a adição de um hidrogel baseado em membrana basal como o Matrigel. A morfologia de brotamento variou de agregados de células sólidas a soltas, assemelhando-se à morfologia organoide. Em contraste, os esferóides de monocultura MDA-MB-468 apareceram como grandes agregados de células soltas. No entanto, quando as células MDA-MB-468 foram co-cultivadas com EA.hy926, BJ-5ta e / ou THP-1, elas formaram esferóides compactos ( Figura 2D ).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig02.jpg"> 
Figura 2: A gama de arquiteturas e morfologias adotadas por combinações de células estromais não epiteliais em combinação quando combinadas com células tumorais epiteliais / não tumorais em culturas 3D sem andaimes. Imagens representativas de campo claro de (A) MCF10A, (B) MCF10Ca1h, (C) BT-474, (D) esferóides MDA-MB-468 em monocultura ou em condições de co-cultura com fibroblastos estromais BJ-5ta / células endoteliais microvasculares Ea.hy926 ou células semelhantes a monócitos Ea.hy926 / THP-1 ou células BJ-5ta / THP-1 em 96 h. Cada esferóide foi formado pelo plaqueamento de 2.000 células. Esferoides em condições de monocultura foram formados usando 2.000 células epiteliais. Os esferoides em condições de co-cultura foram formados usando 1.000 células epiteliais e dois tipos diferentes de células estromais de 500 células. A formação de estruturas semelhantes a organoides agregadas ou brotamento foi iniciada em condições de co-cultura esferóide 24 h após o plaqueamento em células epiteliais MCF10A, MCF10Ca1h e BT-474. A compactação de células MDA-MB-468 foi observada em condições de co-cultura de esferóides 25 h após o plaqueamento. Barras de escala = 100 μm. Abreviatura: hpp = horas após o revestimento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Às 72 h após o plaqueamento, as células MCF10A, MCF10Ca1h e BT-474 co-cultivadas com EA.hy926 e THP-1, ou com BJ-5ta e THP-1, exibiram um aumento significativo na área esferoide em comparação com os esferoides epiteliais em monocultura. MCF10Ca1h também mostrou um aumento significativo na área esferóide quando co-cultivado com EA.hy926 e BJ-5ta. O início de estruturas de brotamento em esferoides co-cultivados levou a uma diminuição significativa na circularidade dos esferóides para MCF10A, MCF10Ca1h e BT-474 co-cultivados com EA.hy926 e THP-1, ou com BJ-5ta e THP-1. Efeitos semelhantes foram observados para BT-474 co-cultivado com EA.hy926 e BJ-5ta ( Figura 3A, B ). Em contraste, as células MDA-MB-468 co-cultivadas com EA.hy926 e BJ-5ta, EA.hy926 e THP-1, ou BJ-5ta e THP-1, mostraram uma diminuição significativa na área esferóide em comparação com os esferoides MDA-MB-468 em monocultura; no entanto, não houve efeito na circularidade (Figura 3A, B).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig03.jpg"> 
Figura 3: Gráficos de análise de área e circularidade de culturas monocultivadas e heteromulticelulares estromais 3D livres de andaimes 72 h após o plaqueamento. (A) Área média (cm2) e (B) circularidade média de MCF10A, MCF10Ca1h, BT-474 e MDA-MB-468 em culturas esferoides estromais monocultivadas e heteromulticelulares 72 h após o plaqueamento. Os dados comunicados são representativos de, pelo menos, três réplicas biológicas independentes e são comunicados como médias técnicas de replicação ± SEM, salvo indicação em contrário. *, **, *** ou **** representam valores de p &lt; 0,05, 0,01, 0,001 ou 0,0001, respectivamente, salvo indicação em contrário. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
A aplicação de corante rastreador celular a células epiteliais tumorigênicas BT-474 e células estromais antes do estabelecimento do esferóide demonstrou que as células estromais, incluindo EA.hy926 e BJ-5ta, formaram as estruturas de brotamento no perímetro dos esferoides BT474 centrais (Figura 4, Vídeo Suplementar S1, Vídeo Suplementar S2, Vídeo Suplementar S3 e Vídeo Suplementar S4). Às 48 h após o plaqueamento, imagens individuais de fluorescência de campo amplo de esferoides co-cultivados com fibroblastos revelam que os esferoides de fibroblastos co-localizaram-se com células endoteliais, mas não co-localizaram com os esferoides BT-474. Uma minoria de células endoteliais também foi encontrada para co-localizar com esferoides BT-474 em condições de co-cultura. Isso sugere que o arranjo das células estromais dentro do esferóide está correlacionado com uma morfologia semelhante a um organoide.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig04.jpg"> 
Figura 4: Imagens estáticas de fluorescência de campo amplo de células estromais e BT-474 tingidas diferencialmente em culturas 3D heteromulticelulares 48 h após o plaqueamento. Os esferóides BT-474 são corados com corante fluorescente rastreador de células azul. Os fibroblastos BJ-5ta são corados com corante rastreador de células laranja, representado na cor vermelha. As células endoteliais Ea.hy926 são coradas com corante rastreador de glóbulos vermelhos profundos, representado na cor verde. Cada esferóide foi formado pelo plaqueamento de 2.000 células. Esferoides em condições de monocultura foram formados usando 2.000 células epiteliais. Esferoides em condições de co-cultura (BT-474 / BJ-5ta, BT-474 / Ea.hy926) foram formados usando 1.000 células epiteliais e 1.000 células estromais. Esferoides em condições de co-cultura dupla (BT-474 / BJ-5ta / Ea.hy926) foram formados usando 1.000 células epiteliais e 500 células de cada tipo de célula estromal. As figuras são representativas de pelo menos três réplicas biológicas. Barra de escala = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura.</a>
Para avaliar a relevância biológica de nosso modelo de esferóide organoide, os esferoides foram revestidos com solução de extrato de membrana basal 24 h após o plaqueamento. Os esferoides BT-474 em monocultura não apresentaram propriedades invasivas 120 h após o plaqueamento. No entanto, os esferoides BT-474 co-cultivados com BJ-5ta ou EA.hy926 desenvolveram estruturas na periferia do esferóide, que invadiram o ambiente da solução de extrato de membrana basal do andaime. O número e o comprimento dessas saliências foram significativamente aumentados em esferoides BT-474 co-cultivados com BJ-5ta e EA.hy926 por 48 h a 120 h após o plaqueamento (Figura 5, Vídeo Suplementar S5, Vídeo Suplementar S6, Vídeo Suplementar S7 e Vídeo Suplementar S8).
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig05.jpg"> 
Figura 5: Imagens estáticas de campo claro de células BT-474 em culturas 3D heteromulticelulares com sobreposição de solução de extrato de membrana basal 5 dias após a sobreposição. Cada esferóide foi formado pelo plaqueamento de 2.000 células. A solução de extrato de membrana basal foi sobreposta sobre esferoides 24 h após o plaqueamento. Esferoides em condições de monocultura foram formados usando 2.000 células epiteliais. Esferoides em condições de co-cultura (BT-474/BJ-5ta e BT-474/Ea.hy926) foram formados usando 1.000 células epiteliais e 1.000 células estromais. Esferoides em condições de co-cultura dupla (BT-474 / BJ-5ta / Ea.hy926) foram formados usando 1.000 células epiteliais e 500 células de cada tipo de célula estromal. (A) Estruturas invasivas que se projetam do esferóide cancerígeno embutido na solução de extrato de membrana basal podem ser observadas em condições de co-cultura. (B) Qualificação da contagem de protrusão invasiva no tempo 48 hpp. (C) Qualificação do comprimento da protrusão invasiva no tempo 48 hpp. As figuras são representativas de pelo menos três réplicas biológicas. Barra de escala = 200 μm. Abreviatura: hpp = horas após o revestimento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Vídeo Suplementar S1: Esferóide de monocultura BT-474 com corante azul rastreador de células. As células BT-474 (2.000) foram ressuspensas em uma microplaca de 96 poços de fixação ultrabaixa em forma de U para formar esferoides. Uma sobreposição de imagens de fluorescência de campo claro e campo amplo foi capturada ao longo de 48 h. Abreviatura: ULA = fixação ultrabaixa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%201.1.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>
Vídeo Suplementar S2: Esferóides BT-474 co-cultivados com fibroblastos BJ-5ta. Os fibroblastos BT-474 (1.000) e 1.000 BJ-5ta foram ressuspensos em placas ULA para formar esferoides. As células BT-474 foram incubadas com corante azul rastreador celular e fibroblastos BJ-5ta com corante laranja rastreador celular. Uma sobreposição de imagens de fluorescência de campo claro e campo amplo (azul = BT-474, vermelho = BJ-5ta) foi capturada ao longo de 48 h. Abreviatura: ULA = fixação ultrabaixa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%201.2.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>
Vídeo Suplementar S3: Esferoides BT-474 co-cultivados com células endoteliais Ea.hy926. As células endoteliais BT-474 (1.000) e 1.000 Ea.hy926 foram ressuspensas em placas ULA para formar esferoides. As células BT-474 foram incubadas com corante azul rastreador celular e células endoteliais Ea.hy926 com corante vermelho escuro rastreador celular. Uma sobreposição de imagens fluorescentes de campo claro e campo amplo (azul = BT-474, verde = Ea.hy926) foi capturada ao longo de 48 h. Abreviatura: ULA = fixação ultrabaixa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%201.3.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>
Vídeo suplementar S4: Esferóides BT-474 co-cultivados com fibroblastos BJ-5ta e células endoteliais Ea.hy926. BT-474 (1.000), 500 fibroblastos BJ-5ta e 500 células endoteliais Ea.hy926 foram ressuspensas em placas ULA para formar esferoides. As células BT-474 foram incubadas com corante azul rastreador celular. Os fibroblastos BJ-5ta e as células endoteliais Ea.hy926 foram incubados com corante laranja rastreador celular e corante vermelho escuro, respectivamente. Uma sobreposição de imagens fluorescentes de campo claro e campo amplo (azul = BT-474, vermelho = BJ-5ta, verde = Ea.hy926) foi capturada ao longo de 48 h. Abreviatura: ULA = fixação ultrabaixa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%201.4.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>
Vídeo Suplementar S5: Esferóide de monocultura BT-474 em solução de extrato de membrana basal. As células BT-474 (2.000) foram ressuspensas em placas ULA para formar esferoides, e os esferoides foram incorporados em uma solução de membrana basal 24 h após o plaqueamento. As imagens de campo claro foram tiradas ao longo de 60 h. Abreviatura: ULA = fixação ultrabaixa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%202.1.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>
Vídeo suplementar S6: Esferóides BT-474 co-cultivados com fibroblastos BJ-5ta em solução de extrato de membrana basal. Os fibroblastos BT-474 (1.000) e 1.000 BJ-5ta foram ressuspensos em placas ULA para formar esferoides, e os esferoides foram incorporados em uma solução de extrato de membrana basal 24 h após o plaqueamento. As imagens de campo claro foram tiradas ao longo de 60 h. Abreviatura: ULA = fixação ultrabaixa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%202.2.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>
Vídeo suplementar S7: Esferoides BT-474 co-cultivados com células endoteliais Ea.hy926 em solução de extrato de membrana basal. As células endoteliais BT-474 (1.000) e 1.000 Ea.hy926 foram ressuspensas em placas ULA para formar esferoides, e os esferoides foram incorporados em uma solução de extrato de membrana basal 24 h após o plaqueamento. As imagens de campo claro foram tiradas ao longo de 60 h. Abreviatura: ULA = fixação ultrabaixa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%202.3.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>
Vídeo suplementar S8: Esferóides BT-474 co-cultivados com fibroblastos BJ-5ta e células endoteliais Ea.hy926 em solução de extrato de membrana basal. BT-474 (1.000), 500 fibroblastos BJ-5ta e 500 células endoteliais Ea.hy926 foram ressuspensas em placas ULA para formar esferoides, e os esferoides foram incorporados em uma solução de extrato de membrana basal 24 h após o plaqueamento. As imagens de campo claro foram tiradas ao longo de 60 h. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%202.4.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>

Células estromais heteromulticelulares em culturas 3D sem andaimes de células epiteliais cancerígenas para impulsionar a invasão

Breast cancer is the second leading cause of cancer-related death among women in the U.S. Organoid models of solid tumors have been shown to faithfully ...

heteromulticellular-stromal-cells-scaffold-free-3d-cultures

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Um método simples é descrita para analisar os efeitos da fibroblastos de tecido em associadas células epiteliais. A combinação deste método eo tridimensional de cultura de tecido pode facilitar a análise das células após o isolamento a partir de 3D. A técnica é aplicável a células de diferentes potencial maligno, permitindo estudo sistemático dos efeitos de estroma associado ao tumor em células tumorais.

Isolamento de células epiteliais mamárias de tridimensional Mixed-célula esferoidal co-cultura

Heterotípica tridimensional<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelagem de Estroma-epitelial de ovário Interações durante o início e progressão do câncer

Este vídeo descreve a técnica de utilização de uma matriz nativa para estudar a invasão de células tumorais. A técnica usada neste ensaio fornece a capacidade de avaliar as interações epitelial-mesenquimais em um ambiente 3D sem a necessidade de uma matriz sintética ou estranha.

Ensaio de invasão de células tumorais: um método baseado em matriz nativa 3D in vitro para avaliar as interações epitelial-mesenquimais

Engenharia de tecidos da matriz nativa derivada de fibroblastos é uma ferramenta emergente para gerar um substrato do estroma que suporta a proliferação de células epiteliais e de diferenciação. Aqui, um protocolo de aplicação desta metodologia para avaliar o impacto de diferentes tipos de células do estroma em biologia de células tumorais é apresentado.

Engenharia de Tecidos de tumor estromal Microenvironment com Aplicação a invasão Cancer Cell

Este artigo proporciona metodologias detalhadas para a utilização de ensaios tridimensionais (3D), para quantificar a invasão das células do cancro da mama. Especificamente, vamos discutir os procedimentos necessários para a criação de tais ensaios, quantificação e análise de dados, bem como métodos para analisar a perda da integridade da membrana que ocorre quando as células invadem.

Quantificação de cancro da mama invasiva das células usando um modelo (3D) tridimensional

Aqui apresentamos um protocolo de co-cultura em três dimensões, que é útil para investigar interações multicelulares e modulação dependente de matriz extracelular do comportamento das células cancerígenas. Neste modelo experimental, as células cancerígenas são cultivadas em géis de colágeno incorporados com fibroblastos associados ao câncer humano.

Tridimensional modelo de co-cultura para Interaction Tumor estromal-

Este método avalia a invasão de células cancerígenas de esferóides em uma matriz 3D circundante.  Os esferoides são gerados através do método de cultura de gota suspensa e, em seguida, incorporados em uma matriz composta de materiais de membrana basal e colágeno tipo I.  A invasão dos esferóides é posteriormente monitorada.

A Cancer Cell Spheroid Ensaio para avaliar a invasão em um ambiente 3D

As células cancerígenas são incorporadas em um gel de colágeno e, em seguida, ensanduichadas em um gel de fibrina acelular para gerar um sistema de cultura 3D no qual a invasividade e a formação de tumores satélites podem ser monitoradas.

Tridimensional Cultura Ensaio para Explorar Cancer Invasividade celular e formação de tumor Satélite

Um novo modelo esferoide tridimensional baseado na interação heteroplípica das células tumorais e fibroblastos estrômios é estabelecido. Aqui, apresentamos cocultura de células tumorais e fibroblastos estrômicos, imagens de lapso de tempo e microscopia confocal para visualizar a formação de esferoides. Este modelo tridimensional oferece uma plataforma pertinente para estudar interações tumor-stroma e testar a terapêutica do câncer.

Um novo modelo esferoide de tumor 3D modulado por fibrosa estromal para estudar a interação tumoral-stroma e a descoberta de drogas

A abordagem apresentada avalia simultaneamente a invasão de células cancerígenas em ensaios esferoides 3D e citotoxicidade de células T. Esferoides são gerados em um elenco multi-microwell livre de andaimes. A cocultura e a incorporação na matriz de colágeno tipo I são realizadas dentro do mesmo dispositivo que permite monitorar a invasão de células cancerígenas e a citotoxicidade mediada por células T.

Monitoramento da invasão celular cancerígena e citotoxicidade de células T na cultura 3D

A invasão é um fenômeno biológico importante no desenvolvimento e progressão do câncer. Esse processo é influenciado por células não neoplásicas e componentes do microambiente tumoral. O objetivo deste estudo é descrever um método alternativo para análise da invasão de células tumorais in vitro usando culturas tridimensionais (3D).

Estratégia alternativa para analisar a invasão celular in vitro de culturas 3D

Explore métodos de cultura 3D sem andaimes para estudar interações heterocelulares em câncer de mama e pâncreas. Esta técnica reproduz microambientes tumorais in vivo para investigar metástase e resistência terapêutica.

Células estromais heteromulticelulares em culturas 3D sem andaimes de células epiteliais cancerígenas para impulsionar a invasão (Vídeo) | JoVE Journal

Células estromais heteromulticelulares em culturas 3D sem andaimes de células epiteliais cancerígenas para impulsionar a invasão

Explorar mais vídeos