Name: Desenvolvimento de culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas em monocamadas e condições tridimensionais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Aprenda a desenvolver culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas em monocamadas e 3D para estudar os efeitos citotóxicos da toxina Shiga. Este modelo ajuda a investigar a síndrome urêmica hemolítica.

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<ol><li>Rivas, M., Chinen, I., Miliwebsky, E., Masana, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli-associated+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Risk factors for Shiga toxin-producing Escherichia coli-associated human diseases.</a> Microbiol Spectr. 2 (5), (2014).</li>
<li>Gianantonio, C. A., Vitacco, M., Mendilaharzu, F., Gallo, G. E., Sojo, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hemolytic-uremic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">The hemolytic-uremic syndrome.</a> Nephron. 11 (2), 174-192 (1973).</li>
<li>Alconcher, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolytic+uremic+syndrome+associated+with+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli+infection+in+Argentina%3A+update+of+serotypes+and+genotypes+and+their+relationship+with+severity+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Hemolytic uremic syndrome associated with Shiga toxin-producing Escherichia coli infection in Argentina: update of serotypes and genotypes and their relationship with severity of the disease.</a> Pediatr Nephrol. 36 (9), 2811-2817 (2021).</li>
<li>Alconcher, L. F., Lucarelli, L. I., Bronfen, S., Meni Battaglia, L., Balestracci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+evolution+of+kidney+function+in+patients+with+STEC-hemolytic+uremic+syndrome+followed+for+more+than+15+years%3A+unexpected+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Dynamic evolution of kidney function in patients with STEC-hemolytic uremic syndrome followed for more than 15 years: unexpected changes.</a> Pediatr Nephrol. 40 (1), 143-150 (2025).</li>
<li>Monteverde, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decrease+in+the+incidence+of+Shiga+toxin-related+hemolytic+uremic+syndrome+as+a+cause+of+kidney+transplantation+at+an+Argentine+Referral+Center%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Transplant%22%5BJournal%5D)">A decrease in the incidence of Shiga toxin-related hemolytic uremic syndrome as a cause of kidney transplantation at an Argentine Referral Center.</a> Pediatr Transplant. 27 (4), e14489(2023).</li>
<li>Sandvig, K., van Deurs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entry+of+ricin+and+Shiga+toxin+into+cells%3A+molecular+mechanisms+and+medical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Entry of ricin and Shiga toxin into cells: molecular mechanisms and medical perspectives.</a> EMBO J. 19 (22), 5943-5950 (2000).</li>
<li>Obrig, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli+Shiga+toxin+mechanisms+of+action+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli Shiga toxin mechanisms of action in renal disease.</a> Toxins (Basel). 2 (12), 2769-2794 (2010).</li>
<li>Karpman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+renal+cortical+cells+in+the+hemolytic-uremic+syndrome%3A+in+vivo+and+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of renal cortical cells in the hemolytic-uremic syndrome: in vivo and in vitro studies.</a> Infect Immun. 66 (2), 636-644 (1998).</li>
<li>Pistone Creydt, v, Silberstein, C., Zotta, E., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+effect+of+Shiga+toxin-2+holotoxin+and+its+B+subunit+on+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic effect of Shiga toxin-2 holotoxin and its B subunit on human renal tubular epithelial cells.</a> Microbes Infect. 8, 410-419 (2006).</li>
<li>Silberstein, C., Pistone Creydt, V., Gerhardt, E., Nuñez, P., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+water+absorption+in+human+proximal+tubular+epithelial+cells+in+response+to+Shiga+toxin-2%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of water absorption in human proximal tubular epithelial cells in response to Shiga toxin-2.</a> Pediatr Nephrol. 23, 1981-1990 (2008).</li>
<li>Márquez, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Escherichia+coli+subtilase+cytotoxin+and+Shiga+toxin+2+on+primary+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of Escherichia coli subtilase cytotoxin and Shiga toxin 2 on primary cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> PLoS One. 9, e87022(2014).</li>
<li>Márquez, L. B., Araoz, A., Repetto, H. A., Ibarra, F. R., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Shiga+toxin+2+on+cellular+regeneration+mechanisms+in+primary+and+three-dimensional+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Effects of Shiga toxin 2 on cellular regeneration mechanisms in primary and three-dimensional cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> Microb Pathog. 99, 87-94 (2016).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eliglustat+prevents+Shiga+toxin+2+cytotoxic+effects+in+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Eliglustat prevents Shiga toxin 2 cytotoxic effects in human renal tubular epithelial cells.</a> Pediatr Res. 91 (5), 1121-1129 (2022).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+stimulates+cell+proliferation+through+classic+estrogen+receptors+and+GPER-1+in+human+renal+tubular+epithelial+cell+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Estradiol stimulates cell proliferation through classic estrogen receptors and GPER-1 in human renal tubular epithelial cell primary cultures.</a> Biochem Biophys Res Commun. 512, 170-175 (2019).</li>
<li>Fernandez Miyakawa, M., Zabal, O., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+perfringens+epsilon+toxin+is+cytotoxic+for+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Exp+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Clostridium perfringens epsilon toxin is cytotoxic for human renal tubular epithelial cells.</a> Hum Exp Toxicol. 30, 275-282 (2011).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+application+of+transcriptomics+and+ceRNA+hypothesis%3A+ln+cRNA-00742%2FmiR-116+targets+CD74+to+mediate+vanadium-induced+mitochondrial+apoptosis+in+duck+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hazard+Mater%22%5BJournal%5D)">Cooperative application of transcriptomics and ceRNA hypothesis: ln cRNA-00742/miR-116 targets CD74 to mediate vanadium-induced mitochondrial apoptosis in duck liver.</a> J Hazard Mater. 480, 135904(2024).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+toxicity+in+the+liver+of+broiler+chicken%3A+insights+from+metabolomics+and+AMPK-mTOR+mediated+autophagy+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Poult+Sci%22%5BJournal%5D)">Copper toxicity in the liver of broiler chicken: insights from metabolomics and AMPK-mTOR mediated autophagy perspective.</a> Poult Sci. 103 (9), 104011(2024).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Caveolin-1+on+the+molybdenum+and+cadmium+exposure+induces+pulmonary+ferroptosis+and+fibrosis+in+the+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Role of Caveolin-1 on the molybdenum and cadmium exposure induces pulmonary ferroptosis and fibrosis in the sheep.</a> Environ Pollut. 334, 122207(2023).</li>
<li>Fujiki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockage+of+Akt+activation+suppresses+cadmium-induced+renal+tubular+cellular+damages+through+aggrephagy+in+HK-2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Blockage of Akt activation suppresses cadmium-induced renal tubular cellular damages through aggrephagy in HK-2 cells.</a> Sci Rep. 14, 14552(2024).</li>
<li>Joun, J. I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidative+effects+of+molybdenum+and+its+association+with+reduced+prevalence+of+hyperuricemia+in+the+adult+population%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Antioxidative effects of molybdenum and its association with reduced prevalence of hyperuricemia in the adult population.</a> PLoS One. 19 (8), e0306025(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Colagenase tipo I</td><td>Sigma Merck, St Louis, MO, EUA</td><td>637958</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento de crescimento de células endoteliais</td><td>Sigma Merck, St Louis, MO, EUA</td><td>E2759</td><td></td></tr><tr><td>Matriz de membrana basal Matrigel</td><td>BD Biosciences, EUA; Sigma Merck, St Louis, MO, EUA</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; Filtro de malha de poros M</td><td>BD Bioscience, MA, EUA</td><td>css010070</td><td></td></tr><tr><td>Meio RPMI 1640 com L-glutamina&nbsp;</td><td>Sigma Merck, St Louis, MO, EUA</td><td>R8758-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Hanks ' Solução salina balanceada&nbsp; Livre de Ca2+ e Mg2+</td><td>Gibco Invitrogen, NY, EUA</td><td>14175046</td><td></td></tr><tr><td>Solução de tripsina-EDTA</td><td>Sigma Merck, St Louis, MO, EUA</td><td>T4049</td><td></td></tr></tbody></table>

desenvolvimento de culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas em monocamadas e condições tridimensionais

Development of Human Renal Tubular Epithelial Cell Primary Cultures in Monolayers and Three-Dimensional Conditions

As culturas primárias HRTEC confluentes mostraram uma morfologia semelhante à observada à microscopia óptica (Figura 1). As células foram caracterizadas por imunofluorescência, conforme descrito em nossas publicações anteriores, usando anticorpos contra aquaporina 1 (AQP1) e PECAM CD31 9,12,13. Estudos de imunofluorescência mostraram que mais de 90% dos HRTEC foram positivos para AQP1, o que demonst...

Desenvolvimento de culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas em monocamadas e condições tridimensionais

Human renal tubular epithelial cell (HRTEC) primary cultures are isolated from kidneys removed from pediatric patients undergoing nephrectomies indicated ...

development-human-renal-tubular-epithelial-cell-primary-cultures

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Um sistema de cultura rotativa célula que permite que as células epiteliais de crescer sob condições fisiológicas, resultando em 3-D formação de agregados celulares é descrito. Os agregados gerado...

Cultura e Aplicações de rotação parede biorreator navio Derivado 3D Modelos de células epiteliais

Neste vídeo, demonstramos as etapas para isolar e purificar células epiteliais tubulares renais para uma ampla gama de estudos de biologia molecular e cultura de células.

Isolamento de células renais murinas: uma técnica para isolar e gerar cultura primária de células epiteliais tubulares renais

Este protocolo descreve a descelularização de rins de ratos Sprague Dawley por perfusão anterógrada de detergentes através da vasculatura, produzindo matrizes extracelulares renais acelulares que servem como modelos para repovoamento com células epiteliais renais humanas. A recelularização e o uso do ensaio de perfusão de resazurina para monitorar o crescimento são realizados em biorreatores de perfusão especialmente projetados.

Repovoamento celular epitelial e Preparação de Rodent Matriz Extracelular Andaimes para o desenvolvimento do tecido renal

Este protocolo descreve um método para isolar e cultivar rudimentos metanefricos de embriões de ratinho.

Dissecção e cultura do rim embrionário do rato

Este protocolo fornece uma abordagem econômica para isolar e caracterizar pilhas do rato primária renal tubular que podem posteriormente ser sub cultivadas para avaliar funções biológicas renal ex vivo, incluindo bioenergética mitocondrial.

Isolamento, caracterização e alto Throughput análise de fluxo extracelular de Mouse primária Renal Tubular as células epiteliais

Este trabalho descreve dois métodos para estudar o desenvolvimento de órgãos, uma melhor configuração de xenotransplante na membrana corioallantoica (CAM) a partir de embriões aviários que permite a vascularização de órgãos e organóides embrionários cultivados e uma nova direção fixa z método de cultura de órgãos com condições experimentais modificadas que permite imagens confocais de lapso de tempo de alta resolução.

Otimização da Cultura Organóide Renal e Organotípica para Vascularização, Desenvolvimento Estendido e Imagem Microscopia Aprimorada

Apresentado aqui é um protocolo quimicamente definido para a derivação de podocitos renais humanos de células-tronco pluripotentes induzidas com alta eficiência (&gt;90%) e independente de manipulações genéticas ou seleção de subpopulação. Este protocolo produz o tipo de célula desejada dentro de 26 dias e pode ser útil para testes de nefrocoxicidade e modelagem de doenças.

Diferenciação guiada de podocitos renais maduros de células-tronco pluripotentes induzidas humanas sob condições quimicamente definidas

As culturas tubuloides renais humanos representam um modelo in vitro valioso para estudar fisiologia renal e doenças. Os tubuloides podem ser estabelecidos a partir do tecido renal (saudável e doente), bem como da urina, este último representando uma fonte facilmente obtida e menos invasiva de material de pesquisa.

Geração de Tubuloides de Rim Humano a partir de tecido e urina

Aqui, apresentamos protocolos que detalham instruções para a implementação de culturas de células 3D usando matrizes de colágeno e colágeno-agarose em um sistema microfisiológico. Esses protocolos suportam a co-cultura de esferoides de túbulo proximal renal e carcinoma de células renais, simulando condições in vivo e permitindo a investigação avançada das interações das células cancerígenas renais.

Co-cultura microfluídica de epitélio renal saudável e tumoral para modelar a progressão do câncer renal

Apresentamos um protocolo otimizado para o processamento de rins humanos inteiros para isolar e cultivar células epiteliais primárias do túbulo proximal renal e a aplicação dessas células em uma plataforma microfluídica tridimensional e microfisiológica para recapitular o túbulo proximal renal.

Isolamento de células epiteliais primárias do túbulo proximal humano e seu uso na criação de um modelo microfisiológico do túbulo proximal renal

Aprenda a desenvolver culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas em monocamadas e 3D para estudar os efeitos citotóxicos da toxina Shiga. Este modelo ajuda a investigar a síndrome urêmica hemolítica.

Desenvolvimento de culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas em monocamadas e condições tridimensionais

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