Name: Imagem de super-resolução do biofilme de Proteus mirabilis por microscopia de expansão (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Aprenda a técnica PmbExM para imagem de super-resolução de biofilmes de Proteus mirabilis por microscopia de expansão. Este método permite visualizar arquitetura celular e organização subcelular em comunidades microbianas complexas.

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<ol><li>Franklin, M. J., Chang, C., Akiyama, T., Bothner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+technologies+for+studying+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">New technologies for studying biofilms.</a> Microbiol Spectr. 3 (4), 10(2015).</li>
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<li>Kaplan, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+involved+in+the+synthesis+and+degradation+of+matrix+polysaccharide+in+Actinobacillus+actinomycetemcomitans+and+Actinobacillus+pleuropneumoniae+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Genes involved in the synthesis and degradation of matrix polysaccharide in Actinobacillus actinomycetemcomitans and Actinobacillus pleuropneumoniae biofilms.</a> J Bacteriol. 186 (24), 8213-8220 (2004).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>&alfa;-Amilase de Bacillus sp.</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>10070</td><td>Digestão de polissacarídeos</td></tr><tr><td>0,1% (p/v) solução aquosa de poli-L-lisina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920</td><td>Imobilização de amostras para imagens</td></tr><tr><td>de lamínulas de vidro de 12 mm</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CLS-1760</td><td>Componente da câmara de gelificação</td></tr><tr><td>Câmera C13440-20CU de 16 bits</td><td>Hamamatsu Photonics</td><td>Não disponível</td><td>Câmera digital CMOS para aquisição de imagens</td></tr><tr><td>Lamínulas de vidro de 24 mm x 50 mm</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CLS-1764</td><td>Manipulação/manuseio de amostras</td></tr><tr><td>Câmara de imagem impressa em 3D</td><td>Design</td> <td>interno-Opção</td> de <td>câmara de imagem</td></tr><tr><td>4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxil (4-hidroxi-TEMPO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>176141</td><td>Componente de solução gelificante</td></tr><tr><td>Placa de fundo de vidro de 6 poços com paredes pretas</td><td>CelVis</td><td>P06-1.5H-N Opção de</td><td>câmara de imagem</td></tr><tr><td>Ácido acético&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>818755</td><td>componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Acrilamida&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4058</td><td>Componente da solução de monômero</td></tr><tr><td>Persulfato de amônio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3678</td><td>Componente da solução de gelificação</td></tr><tr><td>Microscópio Axiovert 200</td><td>Zeiss</td><td>Não disponível</td><td>Microscópio confocal</td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8106</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>C-Apocromático 63x 1,2 NA objetiva de imersão em água</td><td>Zeiss</td><td>Não disponível</td><td>Objetiva de microscópio</td></tr><tr><td>Celulase de Aspergillus niger</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>22178</td><td>Digestão de polissacarídeos</td></tr><tr><td>Chamlide CMB 35 mm prato câmara de imagem magnética</td><td>Instrumento de célula viva</td><td>Não disponível</td><td>Opção de câmara de imagem</td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>472301</td><td>MA-NHS solução de estoque de reagente de ancoragem&nbsp;</td></tr><tr><td>Fosfato dissódico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3264</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td>Limpeza e esterilização</td></tr><tr><td>Ácido etilenodiaminotetracético</td><td>Merck</td><td>324503</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Poliestireno Falcon 24 placas de poços</td><td>Corning</td><td>351147</td><td>Plataforma de procedimentos gerais</td></tr><tr><td>FIJI Software</td><td>National Institutes of</td> <td>Health-Software de</td> <td>processamento de imagem</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7893</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Cloridrato de guanidina</td><td>Thermo Scientific</td><td>24115</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Huygens Software</td><td>Software científico de imagem de volume</td><td></td> para <td>restauração de imagem</td></tr><tr><td>Ácido clorídrico</td><td>Supelco</td><td>1.00317</td><td>Preparação de tampão</td></tr><tr><td>Papel de seda Kimwipes</td><td>Fisher Scientiffic</td><td>06-666</td><td>Remoção de excesso de água</td></tr><tr><td>Pinças de laboratório</td><td>Microscopia eletrônica Ciências</td><td>M5E</td><td>Manipulação/manuseio geral de amostras</td></tr><tr><td>Caldo Luria Bertani</td><td>Invitrogen</td><td>12795-027</td><td>Meio de crescimento de biofilme</td></tr><tr><td>Lyticase de Arthrobacter luteus</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>L4025</td><td>Digestão de polissacarídeos</td></tr><tr><td>Cloreto</td><td>de magnésio Sigma-Aldrich</td><td>D5652</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Ácido metacrílico Éster N-hidroxisuccinimidílico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>730300</td><td>Reagente de ancoragem</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>32213</td><td>Desidratação e armazenamento de amostras</td></tr><tr><td>MicrobeJ&nbsp;</td><td>-</td><td>-</td><td>Software de processamento de imagem</td></tr><tr><td>plugin Lâminas de vidro microscópicas</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CG-8221</td><td>Componente da câmara de gelificação</td></tr><tr><td>Fosfato monossódico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Mutanolisina de Streptomyces globisporus</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>M990</td><td>Digestão de peptidoglicano</td></tr><tr><td>N, N, N', N'-tetrametiletilenodiamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7024</td><td>Componente da solução gelificante</td></tr><tr><td>N,N&prime;-metilenobisacrilamida</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1533</td><td>Componente da solução de monômero</td></tr><tr><td>Nunc 40,4 mm placas de Petri com fundo de vidro</td><td>Thermo Fisher</td><td>12-567-400</td><td>Opção de câmara de imagem</td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td>Fixação de amostra</td></tr><tr><td>Tampão fosfato salino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>79383</td><td>Componente da solução de monômero, Lavagem, Tampão enzimático</td></tr><tr><td>Proteinase K de Engyodontium album</td><td>Invitrogen</td><td>25530-031</td><td>Digestão de proteínas</td></tr><tr><td>Proteus mirabilis ATCC 12453</td><td>Microbiológicos</td><td>0440P</td><td>Sujeito do estudo</td></tr><tr><td>Pincel pequeno e plano</td><td>Loja de ferragens local</td> <td>-</td> <td>Manipulação/manuseio de amostras</td></tr><tr><td>Acetato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>241245</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Acrilato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>408220</td><td>Componente de solução de monômero</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Cloreto</td> <td>de sódioSigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>Componente de solução de monómero, Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Hidróxido de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td>Limpeza de lâminas</td></tr><tr><td>de vidro Linha laser de estado sólido</td><td>Omicron</td><td>Não disponível</td><td>488, 568 e 647 nm Linha de laser de excitação</td></tr><tr><td>Coloração com ácido nucleico SYTO 61</td><td>Invitrogen</td><td>S11343</td><td>Corante fluorescente</td></tr><tr><td>Tris(hidroximetil)aminometano cloridrato</td><td>SAFC</td><td>108219</td><td>Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>Permeabilização de amostra, Componente tampão enzimático</td></tr><tr><td>Volocity 7.0.0 software de captura</td><td>Quorum</td><td></td> <td>Technologies-Microscoy software controlador de aquisição</td></tr><tr><td>Volocity ViewVox sistema de disco giratório</td><td>Perkin-Elmer</td><td>Não disponível</td><td>Sistema de disco giratório para confocal microscópio</td></tr><tr><td>Aglutinina de gérmen de trigo - ndash; Alexa Fluor 488 conjugado de lectina fluorescente</td><td>Invitrogen</td><td>W11261</td><td>Corante fluorescente</td></tr></tbody></table>

imagem de super-resolução do biofilme de proteus mirabilis por microscopia de expansão

Super-resolution Imaging of Proteus mirabilis Biofilm by Expansion Microscopy

O PmbExM expandiu o biofilme de P. mirabilis em 4,3 vezes e preservou a morfologia e a topologia 
A Figura 3A-D evidencia a ampliação física das células do biofilme de P. mirabilis e o aumento da resolução trazido pela técnica. Além disso, isso não foi observado apenas em regiões finas de biofilme, onde as células se organizam em um layout semelhante a uma monocamada, mas também em regi...

Imagem de super-resolução do biofilme de Proteus mirabilis por microscopia de expansão

Accessing detailed visual information and quantitative data from microbiological samples using conventional optical microscopy is limited by the ...

super-resolution-imaging-proteus-mirabilis-biofilm-expansion

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Biochemistry

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