Name: Estudo da morte celular programada induzida por nanopartículas de cobre em bactérias (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-16T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Aprenda a avaliar a eficácia bactericida de nanopartículas de cobre contra Escherichia coli, Acinetobacter baumannii e Staphylococcus aureus. Este método revela o papel das espécies reativas de oxigênio e vias de morte celular programada na ação antimicrobiana.

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<ol><li>Anees Ahmad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bactericidal+activity+of+silver+nanoparticles%3A+A+mechanistic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Sci+Energy+Technol%22%5BJournal%5D)">Bactericidal activity of silver nanoparticles: A mechanistic review.</a> Mater Sci Energy Technol. 3, 756-769 (2020).</li>
<li>Zhang, Y., Shareena Dasari, T. P., Deng, H., Yu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+gold+nanoparticles+and+ionic+gold%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Sci+Health+C+Environ+Carcinog+Ecotoxicol+Rev%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of gold nanoparticles and ionic gold.</a> J Environ Sci Health C Environ Carcinog Ecotoxicol Rev. 33 (3), 286-327 (2015).</li>
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<li>Ma, X., Zhou, S., Xu, X., Du, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper-containing+nanoparticles%3A+Mechanism+of+antimicrobial+effect+and+application+in+dentistry-a+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Surg%22%5BJournal%5D)">Copper-containing nanoparticles: Mechanism of antimicrobial effect and application in dentistry-a narrative review.</a> Front Surg. 9, 905892(2022).</li>
<li>Draviana, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+and+charge+effects+of+metal+nanoclusters+on+antibacterial+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Size and charge effects of metal nanoclusters on antibacterial mechanisms.</a> J Nanobiotechnology. 21 (1), 428(2023).</li>
<li>Hasanuzzaman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+ROS+metabolism+in+plants+under+environmental+stress%3A+A+review+of+recent+experimental+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Regulation of ROS metabolism in plants under environmental stress: A review of recent experimental evidence.</a> Int J Mol Sci. 21 (22), ijms21228695(2020).</li>
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<li>Sai, D. L., Lee, J., Nguyen, D. L., Kim, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+photosensitive+ROS+for+advanced+photodynamic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Tailoring photosensitive ROS for advanced photodynamic therapy.</a> Exp Mol Med. 53 (4), 495-504 (2021).</li>
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<li>Allocati, N., Masulli, M., Di Ilio, C., De Laurenzi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Die+for+the+community%3A+An+overview+of+programmed+cell+death+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Die for the community: An overview of programmed cell death in bacteria.</a> Cell Death Dis. 6 (1), e1609(2015).</li>
<li>Kolodkin-Gal, I., Sat, B., Keshet, A., Engelberg-Kulka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+communication+factor+EDF+and+the+toxin-antitoxin+module+mazEF+determine+the+mode+of+action+of+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The communication factor EDF and the toxin-antitoxin module mazEF determine the mode of action of antibiotics.</a> PLoS Biol. 6 (12), e319(2008).</li>
<li>Lai, M. J., Huang, Y. W., Wijaya, J., Liu, B. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLai%2C+MJ+%22Copper+Overview%22">Copper Overview</a>. Fernández, G. D. Ch 4, IntechOpen. (2024).</li>
<li>Macomber, L., Imlay, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+iron-sulfur+clusters+of+dehydratases+are+primary+intracellular+targets+of+copper+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The iron-sulfur clusters of dehydratases are primary intracellular targets of copper toxicity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (20), 8344-8349 (2009).</li>
<li>Ramos-Zúñiga, J., Bruna, N., Pérez-Donoso, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+mechanisms+of+copper+nanoparticles+and+copper+surfaces+on+bacterial+cells+and+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Toxicity mechanisms of copper nanoparticles and copper surfaces on bacterial cells and viruses.</a> Int J Mol Sci. 24 (13), ijms241310503(2023).</li>
<li>Ihara, M., Shichijo, K., Takeshita, S., Kudo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wortmannin%2C+a+specific+inhibitor+of+phosphatidylinositol-3-kinase%2C+induces+accumulation+of+DNA+double-strand+breaks%5BTitle%5D)+AND+%22J+Radiat+Res%22%5BJournal%5D)">Wortmannin, a specific inhibitor of phosphatidylinositol-3-kinase, induces accumulation of DNA double-strand breaks.</a> J Radiat Res. 61 (2), 171-176 (2020).</li>
<li>Yang, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+and+interpretation+of+current+autophagy+inhibitors+and+activators%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Application and interpretation of current autophagy inhibitors and activators.</a> Acta Pharmacol Sin. 34 (5), 625-635 (2013).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+caspase+inhibitor+Z-VAD-FMK+alleviates+endotoxic+shock+via+inducing+macrophages+necroptosis+and+promoting+MDSCs-mediated+inhibition+of+macrophages+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The caspase inhibitor Z-VAD-FMK alleviates endotoxic shock via inducing macrophages necroptosis and promoting MDSCs-mediated inhibition of macrophages activation.</a> Front Immunol. 10, 1824(2019).</li>
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<li>Greene, N. P., Koronakis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+metal+resistance%3A+Coping+with+copper+without+cooperativity%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Bacterial metal resistance: Coping with copper without cooperativity.</a> mBio. 12 (3), e0065321(2021).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Acinetobacter baumannii Cepa Bouvet e Grimont&nbsp;</td><td>Coleção de Cultura de Tipo Americano (ATCC), Manassas, VA, EUA</td><td>17978</td><td>Bactérias para experimento de toxocidade CuNP</td></tr><tr><td>Bio-Rad iMark Microplate Reader</td><td>Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EUA</td><td>168-1130</td><td>Usado para medir a absorbância em ensaios de viabilidade bacteriana.</td></tr><tr><td>diacetato de 2',7'-diclorodihidrofluoresceína permeável por células&nbsp; (H2DCFDA)</td><td>Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, EUA</td><td>D6883 Usado</td><td>para detectar espécies reativas de oxigênio (ROS) em células bacterianas tratadas.</td></tr><tr><td>Nanopartículas de cobre (CuNPs) 25 nm</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA</td><td>774081</td><td>Usado para preparar solução estoque CuNP</td></tr><tr><td>Nanopartículas de cobre (CuNPs) 60-80 nm</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA</td><td>774103 Usado</td><td>para preparar solução estoque CuNP</td></tr><tr><td>Escherichia coli (Migula) Castellani e Chalmers</td><td>American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, EUA</td><td>25922</td><td>Bactérias para experimento de toxocidade CuNP</td></tr><tr><td>Citômetro de fluxo Gallios</td><td>Beckman Coulter, Brea, CA, EUA</td><td></td><td>Usado para análise de citometria de fluxo em vários experimentos, incluindo detecção de espécies reativas de oxigênio.</td></tr><tr><td>LB agar</td><td>FocusBio, Miaoli, Taiwan</td><td>LBA500</td><td>Usado para cultura de bactérias</td></tr><tr><td>Caldo Luria-Bertani (LB)</td><td>Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD, EUA</td><td>244620</td><td>Usado para cultura</td></tr><tr><td>de bactérias Necrosulfonamida (NSA)</td> <td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA</td><td>480073</td><td>Usado como modulador para pré-tratamento em estudos de vias de morte bacteriana.</td></tr><tr><td>Reagente de viabilidade celular PrestoBlue</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA</td><td>P50200</td><td>Usado para avaliar a viabilidade celular via fluorescência.</td></tr><tr><td>SBI-0206965 (SBI)</td><td>BioVision, Milpitas, CA, EUA</td><td>9580</td><td>Usado como modulador para pré-tratamento em estudos de vias de morte bacteriana.</td></tr><tr><td>Dodecil sulfato de sódio (SDS)</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA</td><td>L4509</td><td>Usado como dispersante para nanopartículas de cobre para reduzir a agregação.</td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, USA Bioresource Collection and Research Center (BCRC), Hsinchu, Taiwan</td><td>13567</td><td>Bactérias para experimento de toxocidade CuNP</td></tr><tr><td>Leitor de microplacas multimodo Varioskan LUX</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA</td><td>VLBLATGD2</td><td>Usado para medir a fluorescência em ensaios de viabilidade celular</td></tr><tr><td>Wortmannin (Wort)</td><td>Abcam, MA, EUA</td><td>ab120148</td><td>Usado como modulador para pré-tratamento em estudos de vias de morte bacteriana.</td></tr><tr><td>Z-VAD-FMK (Z-VAD)</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA</td><td>V116</td><td>Usado como modulador para pré-tratamento em estudos de vias de morte bacteriana.</td></tr></tbody></table>

estudo da morte celular programada induzida por nanopartículas de cobre em bactérias

Studying Copper Nanoparticle-Induced Programmed Cell Death in Bacteria

Atividades antimicrobianas de CuNPs de dois tamanhos em três patógenos Três patógenos oportunistas (E. coli, S. aureus e A. baumannii) foram usados para testar as atividades bactericidas de CuNPs. As bactérias foram tratadas com 0 μg/mL, 1 μg/mL, 5 μg/mL, 10 μg/mL, 50 μg/mL e 100 μg/mL de CuNPs de 20 nm ou 60 nm, e as atividades bactericidas foram determinadas usando a concentração bactericida mínima (CBM) derivada da contagem de colônias. Nossos resultados mostraram efeitos...

Estudo da morte celular programada induzida por nanopartículas de cobre em bactérias

Recently, concerns over multidrug-resistant pathogens and incurable infections have increased due to the overuse and misuse of antibiotics. Nanomaterials, ...

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Neste artigo, nós descrevemos um método utilizando multi-espectral citometria de fluxo de imagem para quantificar a internalização de nanopartículas polianidrido ou bactérias por células RAW 264.7.

Analisando internalização celular de nanopartículas e bactérias multi-espectral por Citometria de Fluxo Imagem

As nanopartículas, tais como pontos quânticos de semicondutores (QDs) pode ser usado para criar agentes fotoactiváveis ​​para aplicações anti-microbianos ou anti-cancro. Esta técnica mostra como a água-solubilizar telureto de cádmio (CdTe) QDs, conjugá-los a um antibiótico, e realizar um ensaio de inibição bacteriana baseada em curvas de crescimento e contagem de placa.

Solubilização e Bio conjugação de pontos quânticos e ensaios de toxicidade bacterianas por curva de crescimento e Contagem

Fonte: Zhang, Y., et al. Aplicação de Nanopartículas Fluorescentes ao Estudo da Remodelação do Sistema Endolisossômico por Bactérias Intracelulares. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra o uso de nanopartículas fluorescentes para visualizar a remodelação endolisossômica em células epiteliais humanas infectadas por bactérias intracelulares. Após a invasão bacteriana, os patógenos manipulam o citoesqueleto do hospedeiro e o sistema endolisossomal, formando vacúolos com projeções tubulares que...

Visualização mediada por nanopartículas da remodelação endolisossômica em células infectadas por bactérias

Pegue tubos com um meio contendo um composto de nanopartículas, engenheirado a partir de uma combinação de metais de transição e carbono.Introduza bactérias patogênicas Gram-positivas e Gram-negativas resistentes a antibióticos em tubos separados como amostras de teste.Inclua bactérias não tratadas como controle negativo e bactérias tratadas com antibióticos como controle positivo.Incube as amostras com sacudimento.Em bactérias Gram-negativas, a membrana externa porosa e a fina camada de...

Avaliação da atividade antimicrobiana de um composto de nanopartículas contra bactérias patogênicas

Ao contrário do que a observada para eucariotos, há uma escassez de estudos que despolarização detalhes membrana e concentração de íons mudanças nas bactérias, principalmente como seu pequeno tamanho faz com que os métodos convencionais de medição difícil. Aqui, os protocolos de detalhe para monitoramento de tais eventos no patógeno Gram-positivo significativo Streptococcus pneumoniae utilizando técnicas de fluorescência.

Acompanhamento da evolução das Membrane Polaridade, integridade de membrana e intracelulares Ion concentrações no<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Usando corantes fluorescentes

A água de sangria de produção (PBW) foi tratada com nanopartículas de óxido cúprico (CuO-NPs) e a toxicidade celular foi avaliada em células humanas cultivadas. O objetivo deste protocolo foi integrar a amostra ambiental nativa em um formato de cultura de células avaliando as mudanças na toxicidade devido ao tratamento com CuO-NP.

A remoção do Trace Elements por Óxido de Cupric nanopartículas de urânio<em&gt; In Situ</em&gt; Recuperação sangro água e seu efeito na viabilidade celular

Aqui apresentamos um protocolo para sintetizar novos, de alta relação de aspecto biocompósitos condições biológicas e em meio líquido. Os biocompósitos escala de nanómetros a micrómetros de diâmetro e de comprimento, respectivamente. Nanopartículas de cobre (CNPS) e sulfato de cobre combinados com a cistina são os componentes chave para a síntese.

Geração de escalável e de alto-Aspect Metallic nanocompósitos índices, em um Biológico Líquido Médio

Populações microbianas contêm heterogeneidade celular substancial, que pode ditar o comportamento geral. Análise sonda molecular através de citometria de fluxo pode determinar estados fisiológicos de células, no entanto a sua aplicação varia entre as espécies. Este estudo fornece um protocolo para determinar com precisão a mortalidade de células dentro de uma população cianobactéria, sem subestimar ou gravar resultados falsos positivos.

Molecular Probe Optimization para determinar mortalidade celular em um fotossintético organismo (<em&gt; Microcystis aeruginosa</em&gt;) Utilizando citometria de fluxo

As propriedades antimicrobianas de metais como cobre e prata foram reconhecidas há séculos. Este protocolo descreve a ablação por laser pulsada em líquidos, um método de síntese de nanopartículas metálicas que proporciona a capacidade de afinar as propriedades dessas nanopartículas para otimizar seus efeitos antimicrobianos.

Produção de nanopartículas metálicas por ablação a laser pulsada em líquidos: uma ferramenta para estudar as propriedades antibacterianas das nanopartículas

Aqui apresentamos um protocolo para estudar a taxa de iniciação de morte celular programada por imagens contínuas de folhas inoculadas após indução de morte celular.

Estudando a iniciação da morte celular usando um microscópio digital

Aprenda a avaliar a eficácia bactericida de nanopartículas de cobre contra Escherichia coli, Acinetobacter baumannii e Staphylococcus aureus. Este método revela o papel das espécies reativas de oxigênio e vias de morte celular programada na ação antimicrobiana.

Estudo da morte celular programada induzida por nanopartículas de cobre em bactérias

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