Name: Isolamento rápido de vesículas extracelulares derivadas do leite materno humano (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T12:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: Aprenda a isolar vesículas extracelulares do leite materno humano com filtração rápida, método mais eficiente que a ultracentrifugação. Esta técnica reduz o tempo de isolamento e mantém alta concentração de partículas para aplicações terapêuticas.

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<ol><li>Galley, J. D., Besner, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+breast+milk-derived+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of breast milk-derived extracellular vesicles.</a> Nutrients. 12 (3), 745(2020).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk-derived+exosomes+attenuate+cell+death+in+intestinal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Human breast milk-derived exosomes attenuate cell death in intestinal epithelial cells.</a> Innate Immun. 24 (5), 278-284 (2018).</li>
<li>Hock, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+milk-derived+exosomes+promote+intestinal+epithelial+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Breast milk-derived exosomes promote intestinal epithelial cell growth.</a> J Pediatr Surg. 52 (5), 755-759 (2017).</li>
<li>Alexander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-delivered+microRNAs+modulate+the+inflammatory+response+to+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin.</a> Nat Commun. 6, 7321(2015).</li>
<li>Lasser, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+saliva%2C+plasma%2C+and+breast+milk+exosomes+contain+RNA%3A+Uptake+by+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Human saliva, plasma, and breast milk exosomes contain RNA: Uptake by macrophages.</a> J Transl Med. 9, 9(2011).</li>
<li>Chan, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+interferon+sensing+unlocks+dormant+adipocyte+inflammatory+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Type I interferon sensing unlocks dormant adipocyte inflammatory potential.</a> Nat Commun. 11 (1), 2745(2020).</li>
<li>Miyake, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk+exosomes+attenuate+intestinal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Surg+Int%22%5BJournal%5D)">Human breast milk exosomes attenuate intestinal damage.</a> Pediatr Surg Int. 36 (2), 155-163 (2020).</li>
<li>Gao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+isolating+methods+for+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Recent developments in isolating methods for exosomes.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 1100892(2022).</li>
<li>Patel, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+exosome+isolation+methods+using+culture+supernatant+for+optimum+yield%2C+purity+and+downstream+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of exosome isolation methods using culture supernatant for optimum yield, purity and downstream applications.</a> Sci Rep. 9 (1), 5335(2019).</li>
<li>Gandhi, J., Naik, M. N., Mishra, D. K., Joseph, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+of+Aspergillus+flavus+endophthalmitis-derived+extracellular+vesicles+in+an+in+vivo+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Mycol%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling of Aspergillus flavus endophthalmitis-derived extracellular vesicles in an in vivo murine model.</a> Med Mycol. 60 (9), myac064(2022).</li>
<li>Palinski, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+purinergic+receptor+p2x4+regulates+neoangiogenesis+induced+by+microvesicles+from+sarcoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Lysosome purinergic receptor p2x4 regulates neoangiogenesis induced by microvesicles from sarcoma patients.</a> Cell Death Dis. 12 (9), 797(2021).</li>
<li>Tantengco, O. aG., Radnaa, E., Shahin, H., Kechichian, T., Menon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross+talk%3A+Trafficking+and+functional+impact+of+maternal+exosomes+at+the+feto-maternal+interface+under+normal+and+pathologic+statesdagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Cross talk: Trafficking and functional impact of maternal exosomes at the feto-maternal interface under normal and pathologic statesdagger.</a> Biol Reprod. 105 (6), 15621576(2021).</li>
<li>Caruso Bavisotto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomal+hsp60%3A+A+potentially+useful+biomarker+for+diagnosis%2C+assessing+prognosis%2C+and+monitoring+response+to+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Exosomal hsp60: A potentially useful biomarker for diagnosis, assessing prognosis, and monitoring response to treatment.</a> Expert Rev Mol Diagn. 17 (9), 815-822 (2017).</li>
<li>Feng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latest+trend+of+milk-derived+exosomes%3A+Cargos%2C+functions%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">Latest trend of milk-derived exosomes: Cargos, functions, and applications.</a> Front Nutr. 8, 747294(2021).</li>
<li>Li, P., Kaslan, M., Lee, S. H., Yao, J., Gao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+exosome+isolation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Progress in exosome isolation techniques.</a> Theranostics. 7 (3), 789-804 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>(H+L) Anti-mouse conjugado com HRP</td><td>Bio-Rad</td><td>1721011</td><td></td></tr><tr><td>(H+L) Anti-coelho conjugado com HRP</td><td>Bio-Rad</td><td>1706515</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de seringa 0,20</td><td>Fisherbrand</td><td>09-719C</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de célula μm 0,70</td><td>Corning</td><td>431751</td><td></td></tr><tr><td>Tris HCL de 1,5 m</td><td>Fabricado internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 15 mL</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Conjunto de extensão de filtro de 16 polegadas</td><td>B-BRAUN</td><td>FE2012F</td><td></td></tr><tr><td>1M Tris HCL</td><td>Teknova</td><td>T1068</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 50 mL</td><td>Falcon</td><td>353070</td><td></td></tr><tr><td>Buffer de Amostra Reduzida 5x</td><td>Termo Científica</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>Acilamida</td><td>Fisher Scientifc&nbsp;</td><td>BP1410-1</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Gibco</td><td>15290-018</td><td></td></tr><tr><td>Câmera AMT NanoSprint43 Mark-II</td><td>AMT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Anti</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD63</td><td>Novusbio</td><td>NBP2-32830</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD9</td><td>Invitrogen</td><td>10626D</td><td></td></tr><tr><td>APS</td><td>Termo Científica</td><td>17874</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Ensaio de Proteína BCA</td><td>Pierce</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Beckman</td><td>Beckman coulter&nbsp;</td><td>344059</td><td></td></tr><tr><td>BrightStar ECL Quimioluminescente</td><td>Alkali Scientific</td><td>XR92</td><td></td></tr><tr><td>FBS Exossomo Esgotado</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0464480</td><td></td></tr><tr><td>Buffer de Bloqueio Rápido</td><td>Pierce</td><td>37575</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino</td><td>Tecnologias de Vida</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Hsp70</td><td>Invitrogen</td><td>MA3-006</td><td></td></tr><tr><td>Insulina humana</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrogénio</td><td>Fisher Scientific</td><td>H325-500</td><td></td></tr><tr><td>IEC-6&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1592</td><td></td></tr><tr><td>JEOL 1400 FLASH TEM</td><td>JEOL USA Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buffer de amostra que reduz marcadores de faixa</td><td>Termo Científica</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>Leite em pó</td><td>Bioworld</td><td>30620074-1</td><td></td></tr><tr><td>Nanosight NS 300</td><td>Malvern Instruments Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrana de nitrocelulose</td><td>Tecnologias de vida</td><td>88018</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho de descarga PELCO easiGlow</td><td>Ted Pella</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini comprimidos inibidores de protease</td><td>Pierce</td><td>A32955</td><td></td></tr><tr><td>Buffer RIPA</td><td>Pierce</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Fisher Scientifc&nbsp;</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Fisher Scientifc&nbsp;</td><td>BP2436-200</td><td></td></tr><tr><td>Frasco T-25</td><td>Termo Científica</td><td>156367</td><td></td></tr><tr><td>TBS</td><td>Fabricado internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0801</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina EDTA</td><td>Gibso</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Termo Científica</td><td>J20605-AP</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento rápido de vesículas extracelulares derivadas do leite materno humano

Rapid Isolation of Human Breast Milk-Derived Extracellular Vesicles

Isolamento rápido de vesículas extracelulares derivadas do leite materno humano

Extracellular vesicles (EVs), nanosized particles approximately 20-1000 nm in size, are rapidly garnering attention for their therapeutic potential. ...

rapid-isolation-of-human-breast-milk-derived-extracellular-vesicles

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fonte: Watson, D. C., et.al. Isolamento e purificação escaláveis de vesículas extracelulares de Escherichia coli e outras bactérias. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra o isolamento e a concentração de vesículas extracelulares (EVs) derivadas da membrana externa de bactérias geneticamente modificadas. O processo envolve a cultura das bactérias para liberar EVs, seguido por etapas sequenciais de centrifugação e filtração para remover células e detritos. Finalmente, a ultrafiltração é usada...

Isolamento e Enriquecimento de Vesículas Extracelulares Derivadas da Membrana Externa de Bactérias

Source: DeMarino, C., et al. Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the separation of EVs from virions and other contaminants by density gradient centrifugation, followed by capture and concentration with hydrogel nanoparticles. Washed fractions are then ready for downstream identification of those enriched in EVs.

Separation and Enrichment of Extracellular Vesicles in the Presence of Virions

Este protocolo detalha um método para isolar vesículas extracelulares (SVE), pequenas partículas membranoso liberados a partir de células, a partir de tão pouco como 10 amostras de soro ul. Esta abordagem evita a necessidade de ultracentrifugação, exige apenas alguns minutos de tempo de ensaio, e permite o isolamento de VE a partir de amostras de volumes limitados.

Os dispositivos à base de papel para o Isolamento e Caracterização de Extracelular Vesículas

Este protocolo descreve métodos para purificar, quantificar e caracterizar vesículas extracelulares (EVs) / exossomos de células epiteliais mamárias não aderentes / mesenquimatosas e para utilizá-las para transferir a capacidade de formação de glândula mamária para células epiteliais mamárias luminal. EVs / exosomas derivados de células epiteliais mamárias semelhantes a tronco podem transferir esta propriedade celular para células que ingerem EVs / exossos.

Transferência de capacidade de formação de glândulas mamárias entre células epiteliais basais mamárias e células luminal mamárias através de vesículas / exossos extracelulares

Aqui, descrevemos dois protocolos de isolamento de vesículas extracelulares, centrifugação de ultrafiltração e ultracentrifugação com centrifugação gradiente de densidade, para isolar vesículas extracelulares de amostras de fluido de lavagem broncoalveolar murino. As vesículas extracelulares derivadas do líquido de lavagem broncoalveolar murino por ambos os métodos são quantificadas e caracterizadas.

Isolamento das vesículas extracelulares de fluido broncoalveolar murino, usando uma técnica de centrifugação de ultrafiltração

Um procedimento passo a passo é descrito para a imobilização sem rótulo de exosomas e vesículas extracelulares de amostras líquidas e sua imagem por microscopia de força atômica (AFM). As imagens de AFM são usadas para estimar o tamanho das vesículas na solução e caracterizar outras propriedades biofísicas.

Imagens de vesículas extracelulares por microscopia de força atômica

Este protocolo isola vesículas extracelulares (EVs) longe de virions com alta eficiência e rendimento através da incorporação de precipitação EV, ultracentlee gradiente de densidade, e captura de partículas para permitir um fluxo de trabalho simplificado e uma redução de partida requisitos de volume, resultando em preparações reprodutíveis para uso em todas as pesquisas EV.

Purificação de preparações de vesículas extracelulares de alto rendimento longe do vírus

O protocolo aqui demonstra que as vesículas extracelulares podem ser adequadamente separadas de meios de cultura celular condicionados usando cromatografia de exclusão de tamanho.

Cromatografia de Exclusão de Tamanho para Separação de Vesículas Extracelulares de Meios de Cultura Celular Condicionada

Este protocolo demonstra como isolar pequenas vesículas extracelulares de células-tronco mesenquimais derivadas do cordão umbilical humano (hUC-MSC-sEVs) com uma configuração simples de bancada em escala laboratorial. A distribuição de tamanho, concentração de proteínas, marcadores de sEVs e morfologia de hUC-MSC-sEVs isolados são caracterizados por análise de rastreamento de nanopartículas, ensaio de proteína BCA, western blot e microscópio eletrônico de transmissão, respectivamente.

Um Método Simples de Filtração de Bancada para Isolar Pequenas Vesículas Extracelulares de Células-Tronco Mesenquimais Humanas

Este estudo descreve um método para isolar e purificar vesículas extracelulares bacterianas (BEVs) enriquecidas de fezes humanas via centrifugação por gradiente de densidade (DGC), identifica as características físicas dos BEVs a partir da morfologia, tamanho de partícula e concentração, e discute as potenciais aplicações da abordagem DGC em pesquisa clínica e científica.

Isolamento e Purificação de Vesículas Extracelulares Bacterianas de Fezes Humanas Utilizando Centrifugação por Gradiente de Densidade

Aprenda a isolar vesículas extracelulares do leite materno humano com filtração rápida, método mais eficiente que a ultracentrifugação. Esta técnica reduz o tempo de isolamento e mantém alta concentração de partículas para aplicações terapêuticas.

Isolamento rápido de vesículas extracelulares derivadas do leite materno humano

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