Name: Um ensaio de Dose Infecciosa de Cultura de Tecidos de 50% em Tempo Real, Otimizado e Sem Marcação, usando Impedância para Quantificação Automatizada de Títulos Virais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Aprenda um ensaio TCID50 otimizado e sem marcação que utiliza impedância em tempo real para quantificação viral automatizada. Este método reduz o tempo de manipulação e permite análise de alto rendimento de efeitos citopáticos.

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<ol><li>Smither, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+plaque+assay+and+50%25+tissue+culture+infectious+dose+assay+as+methods+for+measuring+filovirus+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of the plaque assay and 50% tissue culture infectious dose assay as methods for measuring filovirus infectivity.</a> J Virol Methods. 193 (2), 565-571 (2013).</li>
<li>Pourianfar, H. R., Javadi, A., Grollo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+colorimetric-based+accurate+method+for+the+determination+of+enterovirus+71+titer%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Virol%22%5BJournal%5D)">A colorimetric-based accurate method for the determination of enterovirus 71 titer.</a> Indian J Virol. 23 (3), 303-310 (2012).</li>
<li>Hochdorfer, D., Businger, R., Hotter, D., Seifried, C., Solzin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated%2C+label-free+TCID50+assay+to+determine+the+infectious+titer+of+virus-based+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated, label-free TCID50 assay to determine the infectious titer of virus-based therapeutics.</a> J Virol Methods. 299, 114318(2022).</li>
<li>Lei, C., Yang, J., Hu, J., Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+Calculation+of+TCID50+for+quantitation+of+virus+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+Sin%22%5BJournal%5D)">On the Calculation of TCID50 for quantitation of virus infectivity.</a> Virol Sin. 36 (1), 141-144 (2021).</li>
<li>Giaever, I., Keese, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micromotion+of+mammalian+cells+measured+electrically%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Micromotion of mammalian cells measured electrically.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (17), 7896-7900 (1991).</li>
<li>Atienza, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+and+label-free+cell-based+assays+using+the+real-time+cell+electronic+sensing+system%5BTitle%5D)+AND+%22Assay+Drug+Dev+Technol%22%5BJournal%5D)">Dynamic and label-free cell-based assays using the real-time cell electronic sensing system.</a> Assay Drug Dev Technol. 4 (5), 597-607 (2006).</li>
<li>Cheung, C. Y., Leung, C. K., Peiris, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+of+the+real-time+and+label-free+cell+sensor+impedance+technology+to+transform+cell-based+infectivity+assays+for+influenza+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Influenza+Other+Respir+Viruses%22%5BJournal%5D)">Potential of the real-time and label-free cell sensor impedance technology to transform cell-based infectivity assays for influenza viruses.</a> Influenza Other Respir Viruses. 5 (Suppl 1), 151-154 (2011).</li>
<li>Ebersohn, K., Coetzee, P., Venter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+determining+virucidal+efficacy+of+a+chemical+disinfectant+using+an+electrical+impedance+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">An improved method for determining virucidal efficacy of a chemical disinfectant using an electrical impedance assay.</a> J Virol Methods. 199, 25-28 (2014).</li>
<li>Goh, V. S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+three+alternative+methods+to+the+plaque+reduction+neutralizing+assay+for+measuring+neutralizing+antibodies+to+dengue+virus+serotype+2%5BTitle%5D)+AND+%22Virology+J%22%5BJournal%5D)">Evaluation of three alternative methods to the plaque reduction neutralizing assay for measuring neutralizing antibodies to dengue virus serotype 2.</a> Virology J. 21 (1), (2024).</li>
<li>Crisostomo, L., Soriano, A. M., Mendez, M., Graves, D., Pelka, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+dynamics+of+adenovirus+5+gene+expression+in+normal+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Temporal dynamics of adenovirus 5 gene expression in normal human cells.</a> PLOS One. 14 (1), e0211192(2019).</li>
<li>Wang, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+cytopathic+effects+%28CPE%29+induced+by+influenza+virus+infection+using+deep+convolutional+neural+networks+%28CNN%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Differentiation of cytopathic effects (CPE) induced by influenza virus infection using deep convolutional neural networks (CNN).</a> PLoS Comput Biol. 16 (5), e1007883(2020).</li>
<li>Witkowski, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+impedance+measurement+as+a+new+tool+for+poxvirus+titration%2C+antibody+neutralization+testing+and+evaluation+of+antiviral+substances%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Cellular impedance measurement as a new tool for poxvirus titration, antibody neutralization testing and evaluation of antiviral substances.</a> Biochem Biophys Res Commun. 401 (1), 37-41 (2010).</li>
<li>Fang, Y., Ye, P., Wang, X., Xu, X., Reisen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+monitoring+of+flavivirus+induced+cytopathogenesis+using+cell+electric+impedance+technology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Real-time monitoring of flavivirus induced cytopathogenesis using cell electric impedance technology.</a> J Virol Methods. 173 (2), 251-258 (2011).</li>
<li>Marlina, S., Shu, M. -H., Abubakar, S., Zandi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+real-time+cell+analysing+%28RTCA%29+method+as+a+fast+and+accurate+screen+for+the+selection+of+chikungunya+virus+replication+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+%26+Vectors%22%5BJournal%5D)">Development of a real-time cell analysing (RTCA) method as a fast and accurate screen for the selection of chikungunya virus replication inhibitors.</a> Parasites & Vectors. 8 (1), (2015).</li>
<li>Charretier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+real-time+cell+analysis+method+for+determining+viral+infectious+titers+during+development+of+a+viral+vaccine+production+process%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Robust real-time cell analysis method for determining viral infectious titers during development of a viral vaccine production process.</a> J Virol Methods. 252, 57-64 (2018).</li>
<li>Lebourgeois, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+real-time+cell+analysis+%28RTCA%29+method+as+a+fast+and+accurate+method+for+detecting+infectious+particles+of+the+adapted+strain+of+Hepatitis+A+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development of a real-time cell analysis (RTCA) method as a fast and accurate method for detecting infectious particles of the adapted strain of Hepatitis A virus.</a> Front Cell Infect Microbiol. 8, (2018).</li>
<li>Suryadevara, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+cell+analysis%3A+A+high-throughput+approach+for+testing+SARS-CoV-2+antibody+neutralization+and+escape%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Real-time cell analysis: A high-throughput approach for testing SARS-CoV-2 antibody neutralization and escape.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101387(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,05% Tripsina 0,53 mM EDTA&nbsp; (1x)</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>12 reservatórios de reagentes do canal</td><td>Tecnologias VistaLab</td><td>3054-1011</td><td></td></tr><tr><td>Adenovírus-GFP</td><td>Vector Biolabs&nbsp;</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>Meio DMEM</td><td>ATCC</td><td>30-2002</td><td></td></tr><tr><td>E-Plate VIEW 96</td><td>Agilent</td><td>300601020</td><td></td></tr><tr><td>Soro fetal bovino</td><td>Avantor</td><td>97068-085</td><td></td></tr><tr><td>Célula Hek293A</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>&nbsp; R70507</td><td></td></tr><tr><td>Solução de penicilina-estreptomicina</td><td>HyClone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Soro tampão de fosfato (1x)</td><td>HyClone</td><td>SH30256.01</td><td></td></tr><tr><td>Seaplaque agarose</td><td>Lonza</td><td>50101</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence sistema RTCA eSight</td><td>Agilent</td><td>S2833AA</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence RTCA sistema MP</td><td>Agilent</td><td>380601040</td><td></td></tr></tbody></table>

um ensaio de dose infecciosa de cultura de tecidos de 50% em tempo real, otimizado e sem marcação, usando impedância para quantificação automatizada de títulos virais

A Streamlined, Label-Free Real-Time 50% Tissue Culture Infectious Dose (TCID50) Assay using Impedance for Automated Viral Titer Quantification

Um ensaio de Dose Infecciosa de Cultura de Tecidos de 50% em Tempo Real, Otimizado e Sem Marcação, usando Impedância para Quantificação Automatizada de Títulos Virais

Measuring the viral titer, the concentration of a virus in a sample, is a fundamental procedure in virology research. While essential, traditional methods ...

a-streamlined-label-free-real-time-50-tissue-culture-infectious-dose

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Neste vídeo, demonstramos um método alternativo para a detecção e titulação de vírus usando uma técnica de detecção de antígeno enzimático conhecido como um ensaio de imunoperoxidase. Aqui, vamos mostrar-lhe como coletar as amostras virais, preparar as células para testes, e, finalmente, o ensaio de imunoperoxidase utilizando diluições de série para determinar o título viral.

Titulação de coronavírus humanos Usando um ensaio de imunoperoxidase

Para fazer lentivírus, vetores de DNA são transfectadas em células humanas 293. Após a colheita e concentrando-se o sobrenadante, título de vírus é determinado pela expressão de fluorescência com um citômetro de fluxo.

Produção lentivírus

Este método descreve o uso de sistema de imagem de Infravermelhos corante baseada em para a detecção de A H1N1 no bronchioalveolar o lavado de fluido (BAL) de camundongos infectados em uma alta sensibilidade. Esta metodologia pode ser realizado em um 96 - ou 384-bem prato, requer &lt;volume de 10 uL de material de teste e tem o potencial para a triagem concomitante de agentes patogénicos múltiplos.

Alta capacidade método de detecção de vírus Influenza

Source: Fout, G. S., Cashdollar, J. L. EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. II. Total Culturable Virus Assay. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the use of a total culturable virus assay to quantify infectious viruses in water samples. It outlines host cell inoculation, observation of cytopathic effect, and statistical quantification of infectious virus concentration.

Quantifying Infectious Viruses in Water Samples Using an In Vitro Total Culturable Virus Assay

Neste vídeo, discutimos a correlação entre o CIT50 e a multiplicidade de infecções virais. As células infectadas pelo vírus apresentam efeitos citopáticos, causando sua morte e desprendimento do microeletrodo de ouro, o que, por sua vez, reduz a impedância.

Ensaio celular baseado em impedância para medir a multiplicidade de infecção do vírus influenza

Este artigo apresenta um método baseado na expressão de luciferase de alto rendimento para titular vários vírus de RNA e DNA usando manipuladores de líquidos automatizados e manuais.

De alta capacidade de Titulação de luciferase expressando recombinantes Vírus

Este estudo descreve uma   -Imagem baseada ensaio de micro-neutralização para analisar as relações antigênicas entre vírus. O protocolo emprega um digitalizador de mesa e tem quatro passos, incluindo titulação, a quantificação de titulação, neutralização, e quantificação de neutralização. O ensaio funciona bem com pdm09 corrente circulante vírus influenza A (H1N1), A (H3N2), e B vírus.

Optimização de um Micro-quantitativa Ensaio de neutralização

Relatado aqui é um protocolo para a quantificação de partículas virais infecciosas usando monitoramento em tempo real da impedância elétrica de células infectadas. Uma aplicação prática deste método é apresentada quantificando a decadência do vírus influenza A sob diferentes parâmetros físico-químicos imitando condições ambientais.

Monitorando a sobrevivência do vírus da influenza fora do hospedeiro usando análise celular em tempo real

Este protocolo mostra uma abordagem precisa e objetiva para visualizar as titulações virais usando violeta cristalina, comparando-a com microscopia óptica e coloração imunocitômica.

Uso de Crystal Violet para melhorar a leitura baseada em efeito citopático visual para titulação viral usando ensaios TCID50

O presente protocolo descreve a propagação do vírus Zika (ZIKV) em células Vero African green monkey kidney e a quantificação do ZIKV usando métodos de imunodetecção colorimétrica baseados em células nos formatos de 24 e 96 poços (alto rendimento).

Propagação de vírus e quantificação colorimétrica baseada em células

Aqui, demonstramos o uso da impedância elétrica baseada em células (CEI) como um método muito fácil e direto para estudar a infecção e replicação do vírus Zika em células humanas em tempo real. Além disso, o ensaio CEI é útil para a avaliação de compostos antivirais.

Plataforma de impedância elétrica baseada em células para avaliar inibidores do vírus Zika em tempo real

Aprenda um ensaio TCID50 otimizado e sem marcação que utiliza impedância em tempo real para quantificação viral automatizada. Este método reduz o tempo de manipulação e permite análise de alto rendimento de efeitos citopáticos.

Um ensaio de Dose Infecciosa de Cultura de Tecidos de 50% em Tempo Real, Otimizado e Sem Marcação, usando Impedância para Quantificação Automatizada de Títulos Virais (Vídeo) | JoVE Journal

Um ensaio de Dose Infecciosa de Cultura de Tecidos de 50% em Tempo Real, Otimizado e Sem Marcação, usando Impedância para Quantificação Automatizada de Títulos Virais

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