Name: Depleção rápida de macrófagos renais usando a ferramenta de ablação de células CD59/Intermedilisina humana (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: Aprenda a depleção seletiva de macrófagos renais usando intermedilysina em camundongos CD59. Este método permite estudar a regeneração celular e a restauração da vigilância imune após lesão renal aguda.

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<ol><li>Epelman, S., Lavine, K. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+functions+of+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Origin and functions of tissue macrophages.</a> Immunity. 41 (1), 21-35 (2014).</li>
<li>Nelson, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+renal+mononuclear+phagocytic+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The renal mononuclear phagocytic system.</a> J Am Soc Nephrol. 23 (2), 194-203 (2012).</li>
<li>Wang, Y., Harris, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in renal disease.</a> J Am Soc Nephrol. 22 (1), 21-27 (2011).</li>
<li>Islamuddin, M., Qin, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+macrophages+and+NLRP3+inflammasomes+in+kidney+diseases+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">Renal macrophages and NLRP3 inflammasomes in kidney diseases and therapeutics.</a> Cell Death Discov. 10 (1), 229(2024).</li>
<li>Ricardo, S. D., van Goor, H., Eddy, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+diversity+in+renal+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Macrophage diversity in renal injury and repair.</a> J Clin Invest. 118 (11), 3522-3530 (2008).</li>
<li>Mily, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+of+M1+and+M2+Human+Monocyte-Derived+Cells+and+Analysis+with+Flow+Cytometry+upon+Mycobacterium+tuberculosis+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Polarization of M1 and M2 Human Monocyte-Derived Cells and Analysis with Flow Cytometry upon Mycobacterium tuberculosis Infection.</a> J Vis Exp. (163), e61807(2020).</li>
<li>Huen, S. C., Cantley, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+Renal+Injury+and+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in Renal Injury and Repair.</a> Annu Rev Physiol. 79, 449-469 (2017).</li>
<li>Tang, P. M., Nikolic-Paterson, D. J., Lan, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%3A+versatile+players+in+renal+inflammation+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages: versatile players in renal inflammation and fibrosis.</a> Nat Rev Nephrol. 15 (3), 144-158 (2019).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+fate%2C+dynamics+and+niches+of+renal+macrophages+of+bone+marrow+or+embryonic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Distinct fate, dynamics and niches of renal macrophages of bone marrow or embryonic origins.</a> Nat Commun. 11 (1), 2280(2020).</li>
<li>Chew, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+resident+macrophages+have+distinct+subsets+and+multifunctional+roles%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol%22%5BJournal%5D)">Kidney resident macrophages have distinct subsets and multifunctional roles.</a> Matrix Biol. 127, 23-37 (2024).</li>
<li>Cheung, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+macrophage+subpopulations+occupy+distinct+microenvironments+in+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Resident macrophage subpopulations occupy distinct microenvironments in the kidney.</a> JCI Insight. 7 (20), 161078(2022).</li>
<li>Epelman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+and+adult-derived+resident+cardiac+macrophages+are+maintained+through+distinct+mechanisms+at+steady+state+and+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Embryonic and adult-derived resident cardiac macrophages are maintained through distinct mechanisms at steady state and during inflammation.</a> Immunity. 40 (1), 91-104 (2014).</li>
<li>Feng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre-inducible+human+CD59+mediates+rapid+cell+ablation+after+intermedilysin+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Cre-inducible human CD59 mediates rapid cell ablation after intermedilysin administration.</a> J Clin Invest. 126 (6), 2321-2333 (2016).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+conditional+targeted+ablation+of+cells+expressing+human+CD59+in+transgenic+mice+by+intermedilysin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid conditional targeted ablation of cells expressing human CD59 in transgenic mice by intermedilysin.</a> Nat Med. 14 (1), 98-103 (2008).</li>
<li>Giddings, K. S., Zhao, J., Sims, P. J., Tweten, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD59+is+a+receptor+for+the+cholesterol-dependent+cytolysin+intermedilysin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Human CD59 is a receptor for the cholesterol-dependent cytolysin intermedilysin.</a> Nat Struct Mol Biol. 11 (12), 1173-1178 (2004).</li>
<li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+learning-dependent+synapse+formation+through+brain-derived+neurotrophic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia promote learning-dependent synapse formation through brain-derived neurotrophic factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li>
<li>Cao, Q., Harris, D. C., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+kidney+injury%2C+inflammation%2C+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Macrophages in kidney injury, inflammation, and fibrosis.</a> Physiology. 30 (3), 183-194 (2015).</li>
<li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+macrophages+in+fibrosis+of+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">The role of macrophages in fibrosis of chronic kidney disease.</a> Biomed Pharmacother. 177, 117079(2024).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Versatile+cell+ablation+tools+and+their+applications+to+study+loss+of+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Versatile cell ablation tools and their applications to study loss of cell functions.</a> Cell Mol Life Sci. 76 (23), 4725-4743 (2019).</li>
<li>Yashchenko, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cx3cr1+kidney+resident+macrophage+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cx3cr1 kidney resident macrophage heterogeneity.</a> Front Immunol. 14, 1082078(2023).</li>
<li>Duffield, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+and+immunologic+inflammation+of+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages and immunologic inflammation of the kidney.</a> Semin Nephrol. 30 (3), 234-254 (2010).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+macrophage+phenotypes+contribute+to+kidney+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair.</a> J Am Soc Nephrol. 22 (2), 317-326 (2011).</li>
<li>Wynn, T. A., Vannella, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+Tissue+Repair%2C+Regeneration%2C+and+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages in Tissue Repair, Regeneration, and Fibrosis.</a> Immunity. 44 (3), 450-462 (2016).</li>
<li>Guo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+proximal+tubular+epithelial+cells+and+other+interstitial+cells+in+tubulointerstitial+fibrosis+after+renal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between proximal tubular epithelial cells and other interstitial cells in tubulointerstitial fibrosis after renal injury.</a> Front Endocrinol. 14, 1256375(2023).</li>
<li>Guillot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+acid-activated+macrophages+promote+biliary+epithelial+cell+proliferation+through+integrin+%CE%B1v%CE%B26+upregulation+following+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Bile acid-activated macrophages promote biliary epithelial cell proliferation through integrin αvβ6 upregulation following liver injury.</a> J Clin Invest. 131 (9), 132305(2021).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+Death+Preferentially+Induces+Liver+Injury+and+Inflammation+Through+the+Activation+of+Chemokine+%28C-C+Motif%29+Receptor+2-Positive+Macrophages+and+Lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Adipocyte Death Preferentially Induces Liver Injury and Inflammation Through the Activation of Chemokine (C-C Motif) Receptor 2-Positive Macrophages and Lipolysis.</a> Hepatology. 69 (5), 1965-1982 (2019).</li>
<li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Atp6v1g3-Cre+mice+for+investigation+of+intercalated+cells+and+the+collecting+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Generation of Atp6v1g3-Cre mice for investigation of intercalated cells and the collecting duct.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 325 (6), F770-F778 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,45 &micro; Filtro de seringa M</td><td>Millipore</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>4-15% TGX Géis de Proteína Sem Manchas</td><td>Bio-Rad</td><td>4568084</td><td></td></tr><tr><td>6X Buffer de carregamento</td><td>Pescador</td><td>50-103-6570</td><td></td></tr><tr><td>70% de etanol</td><td>WWR Ciência da Vida</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Tampão de lise ACK (cloreto de amônio-potássio)</td><td>Gibco</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>Grânulos de resina Affinity</td><td>Millipore</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>Solução de ampicilina sódica</td><td>Pesquisa Zymo</td><td>A1001-5</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD11b-PE-Cy7 (Clone M1/70)</td><td>Invitrogen</td><td>25-0112-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD16/32 (Fc&gamma; RIII/II, Clone 93)</td><td>eBiociência</td><td>48-0161-80</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD45-e450 (Clone 30-F11)</td><td>eBiociência</td><td>48-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-F4/80-BV605 (clone BM8)</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>123133</td><td></td></tr><tr><td>Anti-hCD59-PE (Clone OV9A2)</td><td>Invitrogen</td><td>12-0596-42</td><td></td></tr><tr><td>Corante Aqua Live/Dead</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; L34957A</td><td></td></tr><tr><td>Contas (resina)</td><td>Millipore</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>Benzonase Nuclease</td><td>Millipore</td><td>70664-10KUN</td><td></td></tr><tr><td>Reagente de extração de proteína BugBuster</td><td>Millipore</td><td>70584-4</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga para microtubos</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga para tubos</td><td>Thermo Científico</td><td>75-001-241</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase tipo IV</td><td>Corporação Bioquímica Worthington</td><td>LS004188</td><td></td></tr><tr><td>Óleo de milho</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8267</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonuclease (DNAse) I</td><td>Corporação Bioquímica Worthington</td><td>LS002007</td><td></td></tr><tr><td>Coluna de resina Detoxi-Gel</td><td>Millipore</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco' s solução salina tamponada com fosfato)</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de EDTA</td><td>BD</td><td>365974</td><td></td></tr><tr><td>FBS (soro fetal bovino)</td><td>Gibco</td><td>10082-139</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Pescador</td><td>BP229-1</td><td></td></tr><tr><td>HBSS (Hank' s Solução salina balanceada)</td><td>Gibco</td><td>24020117</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (Isopropil &beta;-D-1-tiogalactopiranosídeo)&nbsp;</td><td>Millipore-Sigma</td><td>206-703-0</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>VET um</td><td>502017</td><td></td></tr><tr><td>LB mídia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRFortômetro de fluxo de orquestra</td><td>BD Biociências</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MES [ácido 2-(N-morfolino)etanossulfónico]</td><td>Pescador</td><td>50-488-796</td><td></td></tr><tr><td>MOPS [ácido propanossulfónico 3-(N-morfolino)]</td><td>Pescador</td><td>50-213-522</td><td></td></tr><tr><td>Mídia de gradiente de densidade Percoll</td><td>Cytiva</td><td>17089101</td><td></td></tr><tr><td>Bomba peristáltica</td><td>Fisher Científico</td><td></td><td>Descontinuado agora, use alternativa</td></tr><tr><td>PFA (Paraformaldeído)</td><td>Thermo Científico</td><td>I28800</td><td></td></tr><tr><td>Coluna de purificação</td><td>Millipore</td><td>UFC900308</td><td></td></tr><tr><td>Solução de rLysozyme</td><td>Novagen</td><td>20C71110</td><td></td></tr><tr><td>Banho-maria com agitação</td><td>Thermo Científico</td><td>TSSB15</td><td></td></tr><tr><td>Kit de diálise Slide-A-Lyzer</td><td>Thermo</td><td>66107</td><td></td></tr><tr><td>Desoxicolato de sódio</td><td>Pescador</td><td>BP349-100</td><td>Feito na hora ou menos de um mês</td></tr><tr><td>Filtro de células estéreis (40 &mu; m)</td><td>Fisher Científico</td><td>22-363-547</td><td></td></tr><tr><td>Tamoxifeno</td><td>Sigma Aldrich</td><td>6734</td><td></td></tr><tr><td>Filtro ultracentrífugo</td><td>Millipore</td><td>UFC900308</td><td></td></tr><tr><td>Água ultrapura</td><td>Thermo</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>Misturador de vórtice</td><td>Fisher Científico</td><td>2215365</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-ME (&beta;-mercaptoetanol)</td><td>Pescador</td><td>BP176-100</td><td></td></tr></tbody></table>

depleção rápida de macrófagos renais usando a ferramenta de ablação de células cd59/intermedilisina humana

Rapid Depletion of Renal Macrophages Using Human CD59/Intermedilysin Cell Ablation Tool

A purificação da ILY recombinante His-Tag seguiu o mesmo protocolo descrito anteriormente em14. ILY foi expresso com sucesso em células E. coli BL21 (DE3), transformadas com um plasmídeo que codifica o gene ILY de Streptococcus intermedius. Após a indução com IPTG, a superexpressão da proteína alvo foi evidente. Após a expressão, ILY foi purificada usando cromatografia de afinidade níquel-NTA, explorando uma etiqueta His C-terminal para ligação específica. A pureza e o peso molec...

Depleção rápida de macrófagos renais usando a ferramenta de ablação de células CD59/Intermedilisina humana

Renal macrophages (RMs) are essential for kidney health, orchestrating immune surveillance, tissue homeostasis, and responses to injury. Previously, we ...

rapid-depletion-renal-macrophages-using-human-cd59intermedilysin-cell

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Os macrófagos desempenham um papel central na homeostase e patologia em muitos tecidos. O protocolo apresentado aqui descreve métodos para esgotar...

Depleção e reconstituição de macrófagos em Ratos

Os macrófagos são células plasmáticas do sistema hematopoiético que desempenham um papel crucial na imunidade protetora e na homeostase. Neste relatório , descrevemos técnicas otimizadas in vitro para caracterizar fenotípica e funcionalmente macrófagos reguladores infiltrantes de enxerto que se acumulam no órgão transplantado em condições tolerogênicas.

Caracterização funcional de macrófagos regulatórios que inibem a imunidade reativa ao enxerto

Técnicas confiáveis e eficientes para o isolamento de células imunes renais são necessárias para aplicações a jusante. Isso requer a marcação de anticorpos de superfície de um pequeno número de células imunes renais. Aqui, descrevemos um método conciso para isolamento de células imunes renais que aparentemente atinge esse objetivo.

Extração Eficiência confiável e alta de rim células imunes

Este manuscrito descreve um protocolo detalhado para fenotípica e análise quantitativa de macrófagos residentes de rins de ratos por citometria de fluxo. As células marcadas resultantes podem também ser utilizados para outras aplicações, incluindo a separação de células, a análise da expressão do gene ou estudos funcionais, aumentando, assim, a informação obtida no modelo experimental.

Caracterização fenotípica dos macrófagos a partir de rim de rato por Citometria de Fluxo

Este protocolo permite que um pesquisador isolar e caracterizar residente em tecido marca de macrófagos em vários tecidos inflamados, extraídos de modelos induzida por dieta de distúrbios metabólicos.

Isolamento, caracterização e purificação dos macrófagos dos tecidos afetados pela inflamação obesidade

Aqui, descrevemos uma abordagem de microscopia de folha clara para visualizar o infiltrado de leucócitos CD45 + cardíacos em um modelo murino de miocardite fulminante asséptica, que é induzida pelo tratamento de toxina diftônica intratraqueal de ratos CD11c.DTR.

Visualização Quantitativa de Infiltrado de Leucócitos em um Modelo Murino de Miocardite Fulminante por Microscopia de Folha de Luz

Este protocolo fornece uma abordagem econômica para isolar e caracterizar pilhas do rato primária renal tubular que podem posteriormente ser sub cultivadas para avaliar funções biológicas renal ex vivo, incluindo bioenergética mitocondrial.

Isolamento, caracterização e alto Throughput análise de fluxo extracelular de Mouse primária Renal Tubular as células epiteliais

Aqui, nós apresentamos um protocolo para preparar timócitos apoptóticos e macrófagos peritoneais e para analisar a eficiência do macrófagos e do bloqueio inibidor-negociado específico do engulfment apoptóticas dos timócitos. Este protocolo tem uma aplicação larga no afastamento Cell-negociado de outras partículas que incluem grânulos e bactérias artificiais.

Análise experimental do engulfment do Thymocyte de apoptotic por macrófagos

Aqui nós apresentamos um protocolo mecânico da dissociação para isolar ràpida macrófagos do gânglio dorsal da raiz para o fenotipagem e a análise funcional.

Isolação rápida de macrófagos dorsal do gânglio da raiz

Dados os modelos limitados de xenoenxerto disponíveis para estudar as interações entre CART humano e células mieloides, estabelecemos modelos in vitro e in vivo para entender os impactos dos macrófagos humanos nas células CART. Os resultados podem ser potencialmente generalizados para avaliar os papéis dos macrófagos no microambiente tumoral e testar imunoterapias direcionadas a macrófagos.

Estudando interações entre células mieloides e células T CAR in vitro e in vivo

Usando um modelo explantado ex vivo , pequenos pedaços da porção rostral do tecido adiposo branco visceral de camundongos magros são cultivados por 7 a 10 dias, permitindo a indução e o estudo da inflamação do tecido adiposo conforme ocorre durante a alimentação rica em gordura.

Um modelo de camundongo ex vivo para inflamação do tecido adiposo com dieta rica em gordura

Aprenda a depleção seletiva de macrófagos renais usando intermedilysina em camundongos CD59. Este método permite estudar a regeneração celular e a restauração da vigilância imune após lesão renal aguda.

Depleção rápida de macrófagos renais usando a ferramenta de ablação de células CD59/Intermedilisina humana

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