Name: Isolamento de células epiteliais primárias do túbulo proximal humano e seu uso na criação de um modelo microfisiológico do túbulo proximal renal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Aprenda a isolar células epiteliais primárias do túbulo proximal renal humano e cultivá-las em plataforma microfisiológica tridimensional. Este método permite avaliar transporte de fármacos e nefrotoxicidade com maior precisão preditiva.

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<ol><li>Bertram, J. F., Douglas-Denton, R. N., Diouf, B., Hughson, M. D., Hoy, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+nephron+number%3A+implications+for+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Human nephron number: implications for health and disease.</a> Pediatr Nephrol. 26 (9), 1529-1533 (2011).</li>
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<li>Becker, G. J., Hewitson, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+chronic+kidney+disease%3A+useful+but+not+perfect%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Animal models of chronic kidney disease: useful but not perfect.</a> Nephrol Dial Transplant. 28 (10), 2432-2438 (2013).</li>
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<li>Weber, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+microphysiological+model+of+human+kidney+proximal+tubule+function%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Development of a microphysiological model of human kidney proximal tubule function.</a> Kidney Int. 90 (3), 627-637 (2016).</li>
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<li>Imaoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bridging+the+gap+between+in+silico+and+in+vivo+by+modeling+opioid+disposition+in+a+kidney+proximal+tubule+microphysiological+system%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Bridging the gap between in silico and in vivo by modeling opioid disposition in a kidney proximal tubule microphysiological system.</a> Sci Rep. 11 (1), 21356(2021).</li>
<li>Van Ness, K. P., Chang, S., Weber, E. J., Zumpano, D., Eaton, D. L., Kelly, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microphysiological+systems+to+assess+nonclinical+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Microphysiological systems to assess nonclinical toxicity.</a> Curr Protoc Toxicol. 73, 14.18.1-14.18.28 (2017).</li>
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<li>Sakolish, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technology+transfer+of+the+microphysiological+systems%3A+a+case+study+of+the+human+proximal+tubule+tissue+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Technology transfer of the microphysiological systems: a case study of the human proximal tubule tissue chip.</a> Sci Rep. 8 (1), 14882(2018).</li>
<li>Hart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+prognostic+biomarkers+for+antibiotic+associated+nephrotoxicity+in+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Identification of prognostic biomarkers for antibiotic associated nephrotoxicity in cystic fibrosis.</a> J Cyst Fibros. 23 (2), 293-299 (2024).</li>
<li>Lidberg, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotide+development+for+the+selective+modulation+of+CYP3A5+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotide development for the selective modulation of CYP3A5 in renal disease.</a> Sci Rep. 11 (1), 4722(2021).</li>
<li>Imaoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microphysiological+system+modeling+of+ochratoxin+A-associated+nephrotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Microphysiological system modeling of ochratoxin A-associated nephrotoxicity.</a> Toxicology. 444, 152582(2020).</li>
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<li>Shaver, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellfree+hemoglobin+augments+acute+kidney+injury+during+experimental+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cellfree hemoglobin augments acute kidney injury during experimental sepsis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 317 (4), F922-F929 (2019).</li>
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<li>Horn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+mesenchymal+stromal+cells+is+more+efficient+by+red+blood+cell+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Isolation of human mesenchymal stromal cells is more efficient by red blood cell lysis.</a> Cytotherapy. 10 (7), 676-685 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL de Seringas Luer-Lok Tip</td><td>Becton, Dickinson</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>Tubos microcentrífugas de 1,5 mL</td><td>Produtos Científicos CELLTREAT</td><td>229442</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico de polipropileno estéril de 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-53A</td><td></td></tr><tr><td>Dispositivo microfisiológico 3D</td><td>Nortis</td><td>TCC-001</td><td></td></tr><tr><td>Seringas Luer-Lok Tip 5 mL</td><td>Becton, Dickinson</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico de polipropileno estéril de 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-271</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico-Antimicoótico (100x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase, Tipo IV, em pó</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17104019</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glicose</td><td>MilliporeSigma</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Inibidor de Tripsina Definido</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>R007100</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido, Bioreagente, Termo Química Científica</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>J66650-AK</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II, pólvora</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s MEM (DMEM)/F-12 sem glicose</td><td>Ciências biológicas da vida dos EUA</td><td>D9807-02</td><td></td></tr><tr><td>Soro Tamponado de Fosfato (DPBS) da Dulbecco, cálcio, magnésio</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14040117</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS), Premium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A5670701</td><td></td></tr><tr><td>Kits de Pipetação de Laboratório Finnpipette F2 Good (GLP)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>05-719-511</td><td>Micropipetas</td></tr><tr><td>Pontas de pipeta Fisherbrand SureOne Micropoint, Ajuste Universal, Sem Filtro</td><td>Fisher Scientific</td><td>02707407, 02707410, 02707438</td><td></td></tr><tr><td>Rim humano inteiro fresco</td><td>Novabiose</td><td>https://www.novabiosis.com/research-organ-allocation-services/</td><td>Rins humanos foram obtidos por meio da Novabiosis, uma OPO aprovada pela UNOS</td></tr><tr><td>Incubadora umidificada (37 & deg; C e 5% CO2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>51033556</td><td></td></tr><tr><td>Hidrocortisona</td><td>MilliporeSigma</td><td>H0888</td><td></td></tr><tr><td>Shaker Orbital Incubador</td><td>Avantor</td><td>12620-946</td><td></td></tr><tr><td>Insulina-Transferrina-Selênio (100X) (ITS -G)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>Frascos criogênicos de fio interno</td><td>Corning</td><td>430487</td><td></td></tr><tr><td>Kimtech Science Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Profissional</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Luer Stubs (agulha romba), 22 G x 0,5 polegadas</td><td>Instech Laboratories, Inc.</td><td>LS22</td><td></td></tr><tr><td>Médio 199, Sais de Earle (10x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21180021</td><td></td></tr><tr><td>Megafuge 8 Centrífuga Pequena de Bancada</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>75007210</td><td></td></tr><tr><td>Acoplador metálico (sem embutido)</td><td>Instech Laboratories, Inc.</td><td>SC 20/15</td><td></td></tr><tr><td>Recipiente Congelante Sr. Gelado</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>5100-0036</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Nikon Eclipse Ti-S</td><td>Instrumentos Nikon</td><td>https://www.thelabworldgroup.com/product/nikon-eclipse-ti-fluorescent-microscope/</td><td>Modelo original descontinuado&nbsp;</td></tr><tr><td>Focos Não tratados Nunc (T-25)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>169900</td><td></td></tr><tr><td>Frascos Não tratados Now, T-75</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>156800</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta, 10 mL, Graduada, 1/10 mL, Estéril</td><td>Greiner Bio-One</td><td>607180</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de silício, tubo C-flex, (ID: 0,020", OD: 0,083")</td><td>Cole-Parmer</td><td>06422-00</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina de barbear de um solo gume (estéril)</td><td>Bioseal</td><td>KI-205/50</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio</td><td>MilliporeSigma</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>Hidróxido de Sódio</td><td>MilliporeSigma</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>Unidades de Filtro Descartáveis Estéreis com Membranas PES</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>567-0020</td><td></td></tr><tr><td>Recipientes tratados com cultura de tecidos, 150 mm&nbsp; x 20 mm ventilado</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,05%), fenol vermelho</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno tipo I, rabo de rato</td><td>Corning</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno Tipo IV, Camundongo</td><td>Corning</td><td>354233</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento de células epiteliais primárias do túbulo proximal humano e seu uso na criação de um modelo microfisiológico do túbulo proximal renal

Isolation of Primary Human Proximal Tubule Epithelial Cells and Their Use in Creating a Microphysiological Model of the Renal Proximal Tubule

Isolamento de células epiteliais primárias do túbulo proximal humano e seu uso na criação de um modelo microfisiológico do túbulo proximal renal

Kidney disease affects over 850 million people globally, including 37 million Americans. Risk factors for&#160;chronic kidney disease include ...

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Neste vídeo, demonstramos as etapas para isolar e purificar células epiteliais tubulares renais para uma ampla gama de estudos de biologia molecular e cultura de células.

Isolamento de células renais murinas: uma técnica para isolar e gerar cultura primária de células epiteliais tubulares renais

Canais de iões expressas em epitélio tubular renal, desempenha um papel significativo na patologia da doença poliquística do rim. Aqui nós descrevemos protocolos experimentais utilizados para a realização de análises e medições de nível de cálcio intracelular de patch-clamp no epitélio cístico recentemente isoladas de rins de roedores.

Implementando Grampo patch e ao vivo microscopia de fluorescência para monitorar propriedades funcionais de recentemente isolados PKD Epithelium

Este protocolo descreve a descelularização de rins de ratos Sprague Dawley por perfusão anterógrada de detergentes através da vasculatura, produzindo matrizes extracelulares renais acelulares que servem como modelos para repovoamento com células epiteliais renais humanas. A recelularização e o uso do ensaio de perfusão de resazurina para monitorar o crescimento são realizados em biorreatores de perfusão especialmente projetados.

Repovoamento celular epitelial e Preparação de Rodent Matriz Extracelular Andaimes para o desenvolvimento do tecido renal

Aqui nós apresentamos um método de isolamento e cultura de romance grau clínico para rim perivasculares células do estroma (kPSCs) com base na perfusão de órgão inteiro com enzimas digestivas e enriquecimento de NG2-célula. Com este método, é possível adquirir o número suficiente de células para terapia celular.

Um método de isolamento do romance grau clínico para rim humano Perivascular de células do estroma

Engenharia de tecido renais construções oferecem uma solução para a escassez de órgãos e os efeitos deletérios da diálise. Aqui, descrevemos um protocolo para micro dissecar murino rins para isolamento dos segmentos córtico-medular. Esses segmentos são implantados livre de andaime celular construções, formando organoids renal.

Microdissection de segmentos de tecido Renal primária e incorporação com tecnologia de construção romance livre de andaime

Este protocolo fornece uma abordagem econômica para isolar e caracterizar pilhas do rato primária renal tubular que podem posteriormente ser sub cultivadas para avaliar funções biológicas renal ex vivo, incluindo bioenergética mitocondrial.

Isolamento, caracterização e alto Throughput análise de fluxo extracelular de Mouse primária Renal Tubular as células epiteliais

As culturas tubuloides renais humanos representam um modelo in vitro valioso para estudar fisiologia renal e doenças. Os tubuloides podem ser estabelecidos a partir do tecido renal (saudável e doente), bem como da urina, este último representando uma fonte facilmente obtida e menos invasiva de material de pesquisa.

Geração de Tubuloides de Rim Humano a partir de tecido e urina

Aqui, apresentamos protocolos que detalham instruções para a implementação de culturas de células 3D usando matrizes de colágeno e colágeno-agarose em um sistema microfisiológico. Esses protocolos suportam a co-cultura de esferoides de túbulo proximal renal e carcinoma de células renais, simulando condições in vivo e permitindo a investigação avançada das interações das células cancerígenas renais.

Co-cultura microfluídica de epitélio renal saudável e tumoral para modelar a progressão do câncer renal

Aqui, descrevemos os protocolos para obtenção de culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas (HRTEC) do córtex renal para desenvolver monocamadas e culturas tridimensionais em uma matriz extracelular (3D-HRTEC).

Desenvolvimento de culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas em monocamadas e condições tridimensionais

Aqui, descrevemos um protocolo in vitro para modelar danos por hipóxia/reoxigenação nas células epiteliais tubulares proximais, altamente metabólicas. Este modelo foi projetado para induzir danos induzidos por estresse metabólico, que podem ser medidos pela expressão de marcadores de dano dos túbulos proximais e avaliação da função respiratória mitocondrial.

Modelagem de Hipóxia/Lesão por Reoxigenação em Células Epiteliais Tubulares Proximais

Aprenda a isolar células epiteliais primárias do túbulo proximal renal humano e cultivá-las em plataforma microfisiológica tridimensional. Este método permite avaliar transporte de fármacos e nefrotoxicidade com maior precisão preditiva.

Isolamento de células epiteliais primárias do túbulo proximal humano e seu uso na criação de um modelo microfisiológico do túbulo proximal renal (Vídeo) | JoVE Journal

Isolamento de células epiteliais primárias do túbulo proximal humano e seu uso na criação de um modelo microfisiológico do túbulo proximal renal

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