Name: Um protocolo de citometria de eletroporação para microscopia de fluorescência de células vivas usando cultura de células U2 OS (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T12:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Aprenda citometria de eletroporação para microscopia de fluorescência em células vivas usando cultura U2OS. Este método permite experimentos contínuos de até 72 horas para estudar o ciclo celular e o comportamento celular.

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<ol><li>Shi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+electroporation-based+intracellular+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">A review on electroporation-based intracellular delivery.</a> Molecules. 23 (11), 3044(2018).</li>
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<li>Cemazar, M., Sersa, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+electrochemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectricity%22%5BJournal%5D)">Recent advances in electrochemotherapy.</a> Bioelectricity. 1 (4), 204-213 (2019).</li>
<li>Iyengar, S. K., Iyengar, S., Srivathsan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promise+of+pulsed+field+ablation+and+the+challenges+ahead%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">The promise of pulsed field ablation and the challenges ahead.</a> Front Cardiovasc Med. 10, 1235317(2023).</li>
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<li>Ando, R., Sakaue-Sawano, A., Shoda, K., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+coral+fluorescent+proteins+of+distinct+colors+for+sharp+visualization+of+cell-cycle+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Two coral fluorescent proteins of distinct colors for sharp visualization of cell-cycle progression.</a> Cell Struct Funct. 48 (2), 132-144 (2023).</li>
<li>Nesmith, T., Vieira, C., Rackus, D., Gupta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+electroporation+cytometry+system+for+long-term%2C+live+cell+cycle+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">An electroporation cytometry system for long-term, live cell cycle analysis.</a> Biomicrofluidics. 18 (4), 044105(2024).</li>
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<li>Diehl, F. F., Sapp, K. M., Vander Heiden, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bidirectional+relationship+between+metabolism+and+cell+cycle+control%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">The bidirectional relationship between metabolism and cell cycle control.</a> Trends Cell Bio. 34 (2), 136-149 (2024).</li>
<li>Rems, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+electrofusion+using+nanosecond+electric+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Cell electrofusion using nanosecond electric pulses.</a> Sci Rep. 3, 3382(2013).</li>
<li>Klein, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+best+practices+for+controlling+mammalian+cell+culture+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Bio%22%5BJournal%5D)">Toward best practices for controlling mammalian cell culture environments.</a> Front Cell Dev Bio. 10, 788808(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Slide de Câmara (Impresso/Avaliado em 3D)&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura (10 cm)</td><td>Sarstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Delta Vision</td><td>Olympus</td><td>N/A</td><td>Modelos de microscópios alternativos também podem ser usados. Garantir que o palco e o sistema ambiental possam acomodar a corrediça da câmara de eletroporação (55 mm x&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM - Soro Fetal Bovino de Alta Glicose</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td></td><td>ThermoFisher</td><td>A5256701&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Impressora 3D i3 MK3S</td><td>Prusa</td><td>N/A</td><td>Podem ser usados modelos alternativos de impressoras que podem usar arquivos STL.&nbsp;</td></tr><tr><td>Caneta Strep</td><td>ThermoFisher</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato Tampolado Salino</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>tFUCCI (CA) 5</td><td>Addgene</td><td>153521</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-07-07</td><td></td></tr><tr><td>U2-OS Linha Celular</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td></td></tr></tbody></table>

um protocolo de citometria de eletroporação para microscopia de fluorescência de células vivas usando cultura de células u2 os

An Electroporation Cytometry Protocol for Live-Cell, Fluorescence Microscopy Using U2 OS Cell Culture

Usando o sistema FUCCI (Figura 2), os dados visuais do ciclo celular foram obtidos medindo o período de tempo durante o qual cada cor foi expressa pela célula como resultado da expressão da proteína e da unbiquitinação. Com base nos resultados dos experimentos não sincronizados e sincronizados (Figura 3), ficou evidente que a exposição ao PFE em fase S regulou positivamente o ciclo celular. Isso foi evidenciado pela diminuição da duração média da fase, indicando...

Um protocolo de citometria de eletroporação para microscopia de fluorescência de células vivas usando cultura de células U2 OS

Pulsed electric fields (PEFs) have a wide range of applications in medical research and clinical applications. A key area of research focuses on ...

an-electroporation-cytometry-protocol-for-live-cell-fluorescence

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JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Neste vídeo demonstramos eletrofusão eficiente de...

Electrosoldável célula visualizado com microscopia de fluorescência

Cinética de RNA polimerase II transcricional são medidos em genes específicos em células vivas. mRNAs transcritos do gene de interesse são fluorescente etiquetado e usando a Recuperação de Fluorescência Após Fotodegradação (FRAP) o vivo na cinética de alongamento transcricional são obtidos.

Medição da Cinética de Transcrição mRNA em células Living Single

Fonte: Aigrain, L., et al. Internalização e Observação de Biomoléculas Fluorescentes em Microrganismos Vivos por Eletroporação.  J. Vis. Exp. (2015)O vídeo demonstra a entrega de biomoléculas fluorescentes em células microbianas eletrocompetentes usando eletroporação. O processo começa com a introdução de DNA ou proteínas marcados com fluoróforos em uma suspensão celular resfriada. Um pulso de alta voltagem é então aplicado para criar poros temporários de membrana, permitindo a entrada da...

Entrega por eletroporação de biomoléculas fluorescentes em células bacterianas

Este vídeo descreve o BiFC-PALM ― uma combinação de microscopia de localização fotoativada e complementação de fluorescência bimolecular ― para avaliar as interações proteína-proteína. BiFC envolve a fusão de dois fragmentos de proteína fluorescente com duas proteínas de interesse que interagem. Quando as duas proteínas interagem, os fragmentos são aproximados, o que permite que as duas partes se juntem e reconstituam uma proteína fluorescente funcional. A fluorescência de um único fluoróforo é...

Microscopia de localização fotoativada acoplada à complementação de fluorescência bimolecular

Este vídeo demonstra imagens de células vivas da topologia de sinapses imunológicas, investigando as interações entre linfócitos T e células epiteliais que carregam antígenos fluorescentes. A microscopia de fluorescência revela deslocamento do citoplasma vermelho e anéis de membrana amarela nas células endoteliais, indicando a formação de sinapses imunológicas.

Avaliação da topologia imunológica de sinapses por meio de imagens de células vivas

Estudos de biomoléculas in vivo são cruciais para a compreensão da função molecular em um contexto biológico. Aqui descrevemos um novo método que permite a internalização de biomoléculas fluorescentes, como DNA ou proteínas, em microrganismos vivos. A análise de dados in vivo registrados por microscopia de fluorescência também é apresentada e discutida.

Internalização e Observação de Fluorescent Biomoléculas em microorganismos vivos via Eletroporação

As interações proteína-proteína são visualizadas em células com resolução espacial nanométrica combinando complementação de fluorescência bimolecular (BiFC) com microscopia de localização fotoativada (PALM). Descrito aqui é o uso de BiFC-PALM para interações Ras-Raf de imagem em células U2OS para visualizar o agrupamento em nanoescala e difusão de complexos Ras-Raf individuais.

Fotoactivado Localization Microscopy com Bimolecular Fluorescência de Complementação (BiFC-PALM)

O dobro na eletroporação uteral permite atingir populações celulares que são separadas espacial e temporalmente. Esta técnica é útil para visualizar interações entre essas populações celulares usando proteínas fluorescentes em condições normais, mas também após experimentos funcionais para perturbado genes de interesse.

Dupla em Eletroporação utero para atingir populações celulares temporais e espacialmente separadas

Este protocolo descreve as técnicas de microfabricação necessárias para construir um dispositivo de eletroporação microfluídica de laboratório em um chip. A configuração experimental realiza transfecções controladas em nível de célula única em um fluxo contínuo e pode ser estendida a rendimentos mais altos com controle de base populacional. Uma análise é fornecida mostrando a capacidade de monitorar eletricamente o grau de permeabilização da membrana celular em tempo real.

A Fabricação e Operação de um Sistema de Micro-Eletroporação de Fluxo Contínuo com Detecção de Permeabilização

Para estudar as respostas de células excitáveis in vitro, o protocolo descreve o monitoramento óptico de mudanças na geração de potencial de ação devido à eletroporação em um modelo de célula excitável simples de células HEK de pico tet-on geneticamente modificadas, bem como mudanças na voltagem transmembrana com extração automatizada de parâmetros relevantes.

Monitoramento de mudanças induzidas por eletroporação na geração de potencial de ação em células Tet-On Spiking HEK geneticamente modificadas

Este protocolo descreve o procedimento para realizar microscopia de localização profunda de molécula única (SMLM) em célula inteira usando um microscópio confocal de disco giratório com reatribuição óptica de fótons, permitindo assim a imagem DNA-PAINT sem a necessidade de óptica personalizada ou iluminação complexa.

Imagem de Superresolução de Célula Inteira via DNA-PAINT em um disco confocal giratório com reatribuição óptica de fótons

Aprenda citometria de eletroporação para microscopia de fluorescência em células vivas usando cultura U2OS. Este método permite experimentos contínuos de até 72 horas para estudar o ciclo celular e o comportamento celular.

Um protocolo de citometria de eletroporação para microscopia de fluorescência de células vivas usando cultura de células U2 OS

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