Name: Geração e caracterização de astrócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos sem ribonucleoproteína mensageira X frágil (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T14:35:00.000+00:00
Duration: 10 min 59 s
Description: Aprenda a gerar astrócitos funcionais de células-tronco pluripotentes induzidas humanas para estudar alterações metabólicas na Síndrome do X Frágil. Este protocolo permite investigar o papel das células gliais em distúrbios do neurodesenvolvimento.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Santoro, M. R., Bray, S. M., Warren, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+of+fragile+X+syndrome%3A+A+twenty-year+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular of fragile X syndrome: A twenty-year perspective.</a> Annu Rev Pathol. 7, 219-245 (2012).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmentally-programmed+FMRP+expression+in+oligodendrocytes%3A+A+potential+role+of+FMRP+in+regulating+translation+in+oligodendroglia+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Developmentally-programmed FMRP expression in oligodendrocytes: A potential role of FMRP in regulating translation in oligodendroglia progenitors.</a> Hum Mol Genet. 13 (1), 79-89 (2004).</li>
<li>Pacey, L. K. K., Doering, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+expression+of+FMRP+in+the+astrocyte+lineage%3A+Implications+for+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Developmental expression of FMRP in the astrocyte lineage: Implications for fragile X syndrome.</a> Glia. 55 (15), 1601-1609 (2007).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+characterization+of+progenitor+and+mature+human+astrocytes+reveals+transcriptional+and+functional+differences+with+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Purification and characterization of progenitor and mature human astrocytes reveals transcriptional and functional differences with mouse.</a> Neuron. 89 (1), 37-53 (2016).</li>
<li>Allen, N. J., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroscience%3A+Glia+-+more+than+just+brain+glue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neuroscience: Glia - more than just brain glue.</a> Nature. 457 (7230), 675-677 (2009).</li>
<li>Khakh, B. S., McCarthy, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+calcium+signaling%3A+From+observations+to+functions+and+the+challenges+therein%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Astrocyte calcium signaling: From observations to functions and the challenges therein.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 7 (4), a020404(2015).</li>
<li>Allen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+glypicans+4+and+6+promote+formation+of+excitatory+synapses+via+GluA1+AMPA+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Astrocyte glypicans 4 and 6 promote formation of excitatory synapses via GluA1 AMPA receptors.</a> Nature. 486 (7403), 410-414 (2012).</li>
<li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332-337 (2013).</li>
<li>Rothstein, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knockout+of+glutamate+transporters+reveals+a+major+role+for+astroglial+transport+in+excitotoxicity+and+clearance+of+glutamate%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Knockout of glutamate transporters reveals a major role for astroglial transport in excitotoxicity and clearance of glutamate.</a> Neuron. 16 (3), 675-686 (1996).</li>
<li>Almad, A., Maragakis, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stocked+toolbox+for+understanding+the+role+of+astrocytes+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">A stocked toolbox for understanding the role of astrocytes in disease.</a> Nat Rev Neurol. 14 (6), 351-362 (2018).</li>
<li>Zhang, Y., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+heterogeneity%3A+An+underappreciated+topic+in+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Astrocyte heterogeneity: An underappreciated topic in neurobiology.</a> Curr Opin Neurobiol. 20 (5), 588-594 (2010).</li>
<li>Clarke, L. E., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+roles+of+astrocytes+in+neural+circuit+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Emerging roles of astrocytes in neural circuit development.</a> Nat Rev Neurosci. 14 (5), 311-321 (2013).</li>
<li>Bradley, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regionally+specified+human+pluripotent+stem+cell-derived+astrocytes+exhibit+different+molecular+signatures+and+functional+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regionally specified human pluripotent stem cell-derived astrocytes exhibit different molecular signatures and functional properties.</a> Development. 146 (13), dev170910(2019).</li>
<li>Das Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+mediate+cell+non-autonomous+correction+of+aberrant+firing+in+human+FXS+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Astrocytes mediate cell non-autonomous correction of aberrant firing in human FXS neurons.</a> Cell Rep. 42 (4), 112344(2023).</li>
<li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nat Biotechnol. 27 (3), 275-280 (2009).</li>
<li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+JAK%2FSTAT+signaling+pathway%3A+from+bench+to+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Sig+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">The JAK/STAT signaling pathway: from bench to clinic.</a> Sig Transduct Target Ther. 6, 402(2021).</li>
<li>Baser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+of+differentiation+is+post-transcriptionally+controlled+in+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Onset of differentiation is post-transcriptionally controlled in adult neural stem cells.</a> Nature. 566 (7742), 100-104 (2019).</li>
<li>Pal, R., Bhattacharya, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+protein+synthesis+as+a+biomarker+in+fragile+x+syndrome+patient-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Sci%22%5BJournal%5D)">Modelling protein synthesis as a biomarker in fragile x syndrome patient-derived cells.</a> Brain Sci. 9 (3), 1-12 (2019).</li>
<li>Gross, C., Bassell, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excess+protein+synthesis+in+FXS+patient+lymphoblastoid+cells+can+be+rescued+with+a+p110%CE%B2-selective+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Excess protein synthesis in FXS patient lymphoblastoid cells can be rescued with a p110β-selective inhibitor.</a> J Mol Med. 18 (3), 336-345 (2012).</li>
<li>Kumari, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+fragile+X+syndrome+specific+molecular+markers+in+human+fibroblasts%3A+A+useful+model+to+test+the+efficacy+of+therapeutic+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mutat%22%5BJournal%5D)">Identification of fragile X syndrome specific molecular markers in human fibroblasts: A useful model to test the efficacy of therapeutic drugs.</a> Hum Mutat. 35 (12), 1485-1494 (2014).</li>
<li>Jacquemont, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+synthesis+levels+are+increased+in+a+subset+of+individuals+with+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Protein synthesis levels are increased in a subset of individuals with fragile X syndrome.</a> Hum Mol Genet. 27 (12), 2039-2051 (2018).</li>
<li>Bowser, D. N., Khakh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+excites+interneurons+and+astrocytes+to+increase+synaptic+inhibition+in+neuronal+networks%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">ATP excites interneurons and astrocytes to increase synaptic inhibition in neuronal networks.</a> J Neurosci. 24 (39), 8606-8620 (2004).</li>
<li>Schmunk, G., Boubion, B. J., Smith, I. F., Parker, I., Gargus, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shared+functional+defect+in+IP3R-mediated+calcium+signaling+in+diverse+monogenic+autism+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Shared functional defect in IP3R-mediated calcium signaling in diverse monogenic autism syndromes.</a> Transl Psychiatry. 5 (9), e643-e710 (2015).</li>
<li>Peteri, U. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+the+human+pluripotent+stem-cell-derived+astrocyte+model+with+forebrain+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Sci%22%5BJournal%5D)">Generation of the human pluripotent stem-cell-derived astrocyte model with forebrain identity.</a> Brain Sci. 11 (2), 209(2021).</li>
<li>Alvarez-Mora, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+mitochondrial+function+and+dynamics+in+the+pathogenesis+of+FXTAS%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Impaired mitochondrial function and dynamics in the pathogenesis of FXTAS.</a> Mol Neurobiol. 54 (9), 6896-6902 (2017).</li>
<li>Giulivi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+in+autism%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction in autism.</a> JAMA. 304 (21), 2389-2396 (2010).</li>
<li>Anitha, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+region-specific+altered+expression+and+association+of+mitochondria-related+genes+in+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Autism%22%5BJournal%5D)">Brain region-specific altered expression and association of mitochondria-related genes in autism.</a> Mol Autism. 3 (1), 12(2012).</li>
<li>Teves, J. M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease+skin+fibroblasts+display+signature+alterations+in+growth%2C+redox+homeostasis%2C+mitochondrial+function%2C+and+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease skin fibroblasts display signature alterations in growth, redox homeostasis, mitochondrial function, and autophagy.</a> Front Neurosci. 11, 737(2018).</li>
<li>Yao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+bioenergetic+deficit+precedes+Alzheimer%27s+pathology+in+female+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial bioenergetic deficit precedes Alzheimer's pathology in female mouse model of Alzheimer's disease.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 106 (34), 14670-14675 (2009).</li>
<li>Sonntag, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late-onset+Alzheimer%27s+disease+is+associated+with+inherent+changes+in+bioenergetics+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Late-onset Alzheimer's disease is associated with inherent changes in bioenergetics profiles.</a> Sci Rep. 7 (1), 14038(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Tioglicerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6145</td><td></td></tr><tr><td>Accutase&nbsp; solução</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6964</td><td>Meio de desprendimento de células enzimáticas</td></tr><tr><td>Adenosina 5&prime;-trifosfato sal de magnésio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9187</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico-Antimicótico (100x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Suplemento (50x), sem soro</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Albumina</td> <td>de soro bovinoSigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Concentrado lipídico quimicamente definido</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11905031</td><td></td></tr><tr><td>colagenase, tipo IV, pó</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17104019</td><td></td></tr><tr><td>desoxirribonuclease I</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LK003170</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II, pó</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>DPBS, sem cálcio, sem magnésio</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Essential 8 Médio</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A1517001</td><td></td></tr><tr><td>FXS1, FXS2&nbsp;</td><td>Instituto Coriell de Pesquisa Médica&nbsp;</td><td>GM07072, células</td><td>de pacientes GM05848 FXS</td></tr><tr><td>Suplemento GlutaMAX</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>35050061</td><td>substituto de glutamina</td></tr> Mistura de <tr><td>Nutrientes F-12 da Ham's</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11765054</td><td></td></tr><tr><td>Células de controle saudáveis&nbsp;</td><td>Centro Médico Cedars-Sinai</td><td>ND30625</td><td>células de controle saudáveis&nbsp;</td></tr><tr><td>Sal de heparina sódica da mucosa intestinal suína</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3149</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>12440053</td><td></td></tr><tr><td>Insulina, Roche 11376497001</td><td></td><td></td><td></td>LDN humano</tr><tr><td>193189&nbsp;</td><td>Stratech Scientific</td><td>S2618-SEL</td><td></td></tr><tr><td>Fator Inibidor de Leucemia humano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L5283</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel&nbsp; Matriz de Membrana Poral Reduzida por Fator de Crescimento (TFG)</td><td>Corning</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>MEM Solução de Aminoácidos Não Essenciais (100x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Mouse FGF-basic (FGF-2/bFGF) Proteína Recombinante</td><td>Peprotech</td><td>450-33</td><td></td></tr><tr><td>Mr. Recipiente de congelamento gelado</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>5100-0001</td><td>cryobox</td></tr><tr><td>N-2 Suplemento (100x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>N-acetil-L-cisteína</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>Meio Neurobasal</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Biobanking e Tubos Criogênicos de Cultura de Células</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>377267</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Célula Tratada com Cultura de Células Prato de 6 poços</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>140675</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de Dissociação de Papaína</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LK003150</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Proteína CNTF Humana Recombinante, CF&nbsp;</td><td>R& D Systems</td><td>257-NT-010</td><td></td></tr><tr><td>Proteína EGF Humana Recombinante, CF</td><td>R& Suplemento RevitaCell</td><td>236-EG-01M</td><td></td>da D</tr><tr><td>Systems (100x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A2644501</td><td></td></tr><tr><td>SB431542</td><td>Tocris</td><td>1614</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe24 Analyzer&nbsp;</td><td>Kit</td> de Teste de Estresse Mito de Célula XF Seahorse da Agilent <td></td><td></td></tr> Technologies Kit de <tr><td>Teste de Estresse de Glicólise Seahorse XF</td> da Agilent Technologies <td>103015-100</td><td></td> Placas de Cultura de Tecidos Agilent Technologies 103020-100 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> cm Transferrin Roche 10652202001 VWR Transferrin da Biostar Life TCD000100 tech <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Lâminas</td><td>VWR International</td><td>55411-050</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpos&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primário</td><td>Company</td><td>Número de catálogo<</td><td>strong>Diluição</td></tr><tr><td>Oct4 (C-10)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-5279</td><td>Diluição: 1:250 Anticorpo secundário: IgG anti-camundongo de cabra, Alexa Fluor 568</td></tr><tr><td>Nanog</td><td>R & D Systems</td><td>AF1997</td><td>Diluição: 1:100 Anticorpo secundário: IgG anti-cabra de burro, Alexa Fluor 488</td></tr><tr><td>Vimentina</td><td>Abcam</td><td>Ab5733</td><td>Diluição: 1:500 Anticorpo secundário: IgY anti-frango de cabra, Alexa Fluor 488</td></tr><tr><td>NFIA</td><td>Abcam</td><td>Ab41851</td><td>Diluição: 1:500 Anticorpo secundário: IgG anti-coelho de cabra, Alexa Fluor 568</td></tr><tr><td>GFAP-cy3</td><td>Sigma</td><td>C9205</td><td>Diluição: 1:500 Anticorpo secundário: NA</td></tr><tr><td>GFAP</td><td>DAKO</td><td>Z0334</td><td>Diluição: 1:500 Anticorpo secundário: IgG anti-coelho de cabra, Alexa Fluor 568</td></tr><tr><td>S100&beta;</td><td>DAKO</td><td>IR504</td><td>Diluição: 1:500 Anticorpo secundário: IgG anti-coelho de cabra, Anticorpo anti-núcleos Alexa Fluor 488</td></tr><tr><td>, clone 235-1</td><td>Merck Millipore</td><td>MAB1281</td><td>Diluição: 1:1000 Anticorpo secundário: IgG1 anti-rato de cabra, Alexa Fluor 555</td></tr><tr><td><forte>Anticorpos secundários&nbsp; </td><td></td><td></td><td>Dilution</td></tr><tr><td>Goat anti-Mouse IgG, Alexa Fluor 568</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A11004</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>IgG anti-Cabra para burros, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A11055</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>IgY anti-frango para cabras, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A11039</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>IgG anti-coelho de cabra, Alexa Fluor 568</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A11011</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>IgG anti-coelho de cabra, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A11034</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>Cabra anti-Mouse IgG1, Alexa Fluor 555</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A21127</td><td>1:1000</td></tr></tbody></table>

geração e caracterização de astrócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos sem ribonucleoproteína mensageira x frágil

Generation and Characterization of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Astrocytes Lacking Fragile X Messenger Ribonucleoprotein

As colônias de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos (hiPSC) foram mantidas usando meio definido comercialmente disponível e imunomarcado para marcadores de pluripotência, Oct4 e Nanog (Figura 1B). FXS e CTRL APCs mostraram proporções comparáveis altamente enriquecidas de células imunopositivas para vimentina e NFIA ( Figura 1C , D ). Descobrimos que as APCs derivadas de hiPSCs saudáveis e FXS mostra...

Geração e caracterização de astrócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos sem ribonucleoproteína mensageira X frágil

Fragile X syndrome (FXS), a leading inherited cause of autism spectrum disorder and intellectual disability, has been studied extensively using rodent ...

generation-characterization-human-induced-pluripotent-stem-cell

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

O vídeo demonstra um método para gerar astrosferas a partir de progenitores a partir de células-tronco pluripotentes humanas. Envolve o crescimento e proliferação de células-tronco com meios nutrientes contendo fatores de crescimento e inibidores de quinase. Essas células então se agregam e se diferenciam em astrócitos, formando astrosferas.

Geração e manutenção de astrosferas usando células-tronco pluripotentes humanas

Os astrócitos têm sido reconhecidos como células versáteis que participam em processos biológicos fundamentais, que são essenciais para o desenvolvimento do cérebro e função normais, e reparação do sistema nervoso central. Aqui apresenta-se um processo rápido de obtenção de culturas de astrócitos de rato puros para estudar a biologia desta classe importante de centrais células do sistema nervoso.

Isolamento e Cultura de astrócitos corticais de rato

Os astrócitos são um dos principais intervenientes mais importantes no sistema nervoso central (SNC). Aqui, nós estamos relatando um método prático de protocolo de cultura de astrócitos do hipocampo sexuado, a fim de estudar os mecanismos subjacentes a função de astrócitos em filhotes recém-nascidos do sexo masculino e feminino após isquemia in-vitro.

As diferenças sexuais no mouse do hipocampo astrócitos após<em&gt; In-Vitro</em&gt; Isquemia

Nós modificar e implementar um protocolo publicado anteriormente descrevendo a diferenciação rápida, reprodutível e eficiente dos humanos pluripotentes induzidas (células-tronco hiPSCs) em neurônios corticais excitatórios 12. Especificamente, nossa modificação permite o controle da densidade de células neuronais e uso em matrizes de micro-eléctrodos para medir as propriedades eletrofisiológicas no nível da rede.

Rápido Neuronal diferenciação de células estaminais pluripotentes induzidas para medir a atividade de rede na Arrays Micro-eletrodo

Descrevemos um protocolo para reprogramar fibroblastos derivados da pele humana em células progenitoras neuronais induzidas (iNPCs), e sua subsequente diferenciação em Astrocitos induzidos (iAs). Este método leva a uma geração rápida e reprodutível de iNPCs e iAs em grandes quantidades.

Modelagem in vitro para doenças neurológicas usando conversão direta de fibroblastos para células progenitoras neuronais e diferenciação em astrócitos

Desenvolvemos um método que enriquece e isola populações de astrócitos humanos de tecido fresco congelado para uso em análises moleculares a jusante.

Isolamento de populações de astúcitos humanos adultos do córtex congelado fresco usando a classificação de núcleos ativados por fluorescência

Descrevemos um método para diferenciar astrócitos e neurônios derivados pluripotentes induzidos por humanos da medula espinhal e sua co-cultura para registro eletrofisiológico.

Estabelecimento de uma plataforma eletrofisiológica para modelagem da ELA com astrócitos e neurônios derivados de células-tronco pluripotentes humanas regionalmente específicas

Dois métodos relacionados são descritos para visualizar eventos subcelulares necessários para transmissão sináptica. Esses protocolos permitem o monitoramento em tempo real da dinâmica do influxo de cálcio pré-sináptico e da fusão da membrana vesícula sináptica usando imagens de células vivas de neurônios in vitro cultivados.

Medição fluorescente em tempo real de funções sinápticas em modelos de esclerose lateral amiotrófica

Aqui descrevemos um protocolo detalhado para gerar culturas altamente enriquecidas de astrócitos derivados de diferentes regiões do sistema nervoso central de camundongos pós-natais e sua conversão direta em neurônios funcionais pela expressão forçada de fatores de transcrição.

Isolamento e Reprogramação Neuronal Direta de Astrócitos de Camundongos

Nós, com base no conhecimento da biologia do desenvolvimento e pesquisas publicadas, desenvolvemos um protocolo otimizado para gerar com eficiência neurônios dopaminérgicos do mesencéfalo A9 a partir de células-tronco embrionárias humanas e células-tronco pluripotentes induzidas humanas, o que seria útil para modelagem de doenças e terapia de substituição celular para a doença de Parkinson.

Dirigido neurônios dopaminérgicos Diferenciação de Células-Tronco pluripotentes humanas

Aprenda a gerar astrócitos funcionais de células-tronco pluripotentes induzidas humanas para estudar alterações metabólicas na Síndrome do X Frágil. Este protocolo permite investigar o papel das células gliais em distúrbios do neurodesenvolvimento.

Geração e caracterização de astrócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos sem ribonucleoproteína mensageira X frágil (Vídeo) | JoVE Journal

Geração e caracterização de astrócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos sem ribonucleoproteína mensageira X frágil

Explorar mais vídeos