Name: Caracterização comportamental de convulsões induzidas por pentilenotetrazol: indo além da escala de Racine (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-08T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: Aprenda a caracterizar convulsões induzidas por pentilenotetrazol em camundongos usando análise de vídeo assistida por computador. Este método detalha espasmos e mioclonia para compreender melhor os mecanismos de início das crises límbicas.

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Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo comitê de ética local da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (Protocolo nº 043/2022, Licença nº 307.043/2022). Camundongos C57BL/6 machos com idade entre 3 e 4 meses foram utilizados neste protocolo, com um tamanho de amostra recomendado de 6 a 10 animais de acordo com os protocolos de indução de PTZ estabelecidos16.
1. Preparação da arena observacional
<ol>
	<li>Use uma arena quadrada ou circular com pelo menos 10 x 10 cm de área de superfície e 30 cm de altura da parede. Certifique-se de que a arena esteja bem iluminada. Se necessário, use iluminação infravermelha para garantir a aquisição de imagens saturadas (Figura 2A).</li>
	<li>Coloque pelo menos uma câmera de vídeo sobre a arena, com uma visão de cima para baixo de todo o piso da arena e pelo menos 10 cm da parede (para capturar o comportamento de criação sem cortar a cabeça do mouse, Figura 2B).</li>
	<li>Se desejar, coloque uma segunda câmera de vídeo com vista frontal da arena. Nesse caso, certifique-se de que uma das paredes da arena seja transparente.</li>
	<li>Certifique-se de que a temperatura (21-24 °C) e a umidade (50-70%) correspondem às condições do biotério, monitorando-as com um termo-higrômetro e ajustando conforme necessário.</li>
	<li>Coloque a cama necessária para cobrir o fundo da arena e certifique-se de que o animal seja visível ao fundo. Disponibilize gratuitamente água e pellets de comida durante toda a duração do experimento.</li>
	<li>Inicie os experimentos preferencialmente no início da fase de luz (por exemplo, entre 7:00 e 10:00 da manhã). Mantenha uma iluminação consistente na sala experimental (900-1.100 lux) com um ciclo claro/escuro de 12/12 h, com as luzes acesas às 6h. Use um medidor de lux para verificar as condições de iluminação próximas à arena de gravação, garantindo uma qualidade de gravação de vídeo uniforme.</li>
	<li>Conecte a câmera ao dispositivo de gravação de vídeo para adquirir o vídeo com pelo menos 24 quadros por segundo (fps).</li>
</ol>
2. Preparação da solução PTZ
NOTA: Comportamentos ictais (ou seja,., espasmos) podem ser induzidos com doses a partir de 40 mg / kg. Convulsões límbicas são observadas em doses de 60 mg / kg e doses mais altas. Convulsões tônicas associadas a parada respiratória e morte são comumente observadas a partir de uma dose de 80 mg / kg ou superior. Para o protocolo de kindling, foi utilizada uma dosagem de 40 mg/kg.
A dose pode variar para diferentes estirpes de ratinhos. Recomenda-se realizar um experimento piloto para definir a dose de PTZ que melhor se aplica à questão de pesquisa.
<ol>
	<li>Administre 10 mL / kg por meio de injeções sistêmicas nos camundongos. Portanto, dissolva o pó de PTZ em água deionizada para atingir a concentração final de 4 ou 6 mg/mL (para as doses de 40 e 60 mg/kg, respectivamente). NOTA: Para reduzir a variabilidade, prepare uma única solução PTZ para todo o lote experimental.</li>
</ol>
3. Administração de PTZ
<ol>
	<li>Antes de colocar o animal na arena, meça seu peso corporal usando uma balança.</li>
	<li>Calcule o volume de solução de PTZ necessário para cada animal com base em seu peso corporal. NOTA: Para uma dose de 60 mg / kg e um peso corporal de 30 g, injete no animal 0,3 mL de uma solução de PTZ de 6 mg / mL.</li>
	<li>Registre o comportamento por pelo menos 1 h antes da injeção de PTZ. NOTA: Este período de habituação diminui a deambulação e a ansiedade induzidas pela novidade, enquanto também pode ser usado para extrair a atividade basal.</li>
	<li>Administrar PTZ por via intraperitoneal (i.p.) ou subcutânea (s.c.)15,16. Para administração s.c., prenda o animal com uma mão, beliscando suavemente a pele entre as omoplatas (Figura 2C).</li>
	<li>Usando uma seringa de 1 mL conectada a uma agulha de 26 1/2 G, insira a agulha dentro do espaço subcutâneo, paralelamente à orientação do corpo, e injete lentamente a solução no espaço subcutâneo. Remova suavemente a agulha quando a injeção estiver completa, segurando a pele na saída da agulha para evitar que a solução seja derramada devido à pressão da cavidade (Figura 2C). NOTA: As injeções não devem ser administradas muito rapidamente, pois o acúmulo rápido da solução pode levar ao derramamento do local da injeção ou vazamento após a remoção da agulha.</li>
	<li>Anote qualquer vazamento, pois isso afetará a expressão de comportamentos ictais. Considere a possibilidade de injeção imediata de 50 μL adicionais da mesma solução de PTZ.</li>
	<li>Posicione o animal de volta na arena por 1 h de gravação de vídeo contínua.</li>
	<li>Uma hora após a injeção de PTZ (ou mais), pare as gravações e copie o arquivo para pós-processamento (rastreamento de vídeo e codificação comportamental).</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68112/68112fig2v2.jpg"> 
Figura 2: Configuração experimental e procedimento de injeção. (A) Quatro arenas quadradas transparentes com câmeras de visão de cima para baixo colocadas sobre o centro foram usadas para registrar comportamentos e rastrear as posições dos animais antes e depois da administração de PTZ. (B) Instantâneo de um vídeo representativo obtido com a configuração descrita em A. (C) Exemplo de injeção subcutânea de PTZ. A agulha é colocada entre as omoplatas do animal no espaço subcutâneo. (D) Representação esquemática da aquisição e análise de dados comportamentais utilizada no presente estudo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68112/68112fig2v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
4. Bem-estar dos animais
<ol>
	<li>Remova e eutanasiar os animais se uma convulsão durar mais de 5 minutos para evitar a morte celular e danos ao tecido cerebral, especialmente durante os protocolos de injeções repetidas.</li>
	<li>Monitorizar diariamente o peso dos animais durante todo o período experimental.</li>
	<li>Monitore o estado geral dos animais, incluindo ingestão de alimentos, locomoção, postura, higiene e sinais de dor ou angústia.</li>
	<li>Administre tratamento anti-inflamatório (ibuprofeno, 5 mg / kg) e controle da dor, conforme necessário. Forneça comida ou água suplementar, se necessário.</li>
	<li>Remover os animais se apresentarem uma perda de peso superior a 20% que não possa ser recuperada dentro de 2 dias após a suplementação individual, lesões epidérmicas ou quaisquer sinais de dor crônica ou desconforto que não respondam ao tratamento farmacológico.</li>
	<li>Eutanásia de todos os animais de acordo com as diretrizes éticas internacionais e institucionais.</li>
</ol>
5. Instalação, configuração e uso do software
<ol>
	<li>Para a análise descrita neste estudo, use o MouseLabTrack19 e o Solomon Coder. Baixe-os e siga o procedimento de instalação (consulte Arquivo Suplementar 1 e Arquivo Suplementar 2). NOTA: Enquanto o MouseLabTrack é executado na estrutura MATLAB, o Solomon Coder é um executável para o sistema operacional Windows. Ambos os softwares são de código aberto.</li>
	<li>Clique em Solomon no menu Iniciar do Windows ou procure por Solomon Coder e abra o software.<ol>
		<li>Se um arquivo de configuração estiver disponível (consulte Arquivo Suplementar 3), vá para Arquivo | Configuração de carga. A tela carregará as configurações predefinidas.</li>
		<li>Se nenhum arquivo de configuração estiver disponível,<ol>
			<li>Clique com o botão direito do mouse na área livre para criar um novo botão. Clique com o botão direito do mouse no botão recém-criado para abrir a tela de configuração .</li>
			<li>No campo Nome do Botão , renomeie o botão para representar o comportamento desejado.</li>
			<li>No campo Cor da face do botão , selecione uma cor.</li>
			<li>No campo Categorias , renomeie Padrão para Comportamentos (este será o nome da coluna).</li>
			<li>No campo Tecla de atalho , atribua uma tecla do teclado para marcar o comportamento durante a análise de vídeo (por exemplo, tecla "1").</li>
			<li>(Opcional) Marque a caixa acima Tecla de atalho se o evento for instantâneo, o que significa que ele registrará um único evento quando a tecla for pressionada e liberada. Se desmarcada, o comportamento permanecerá registrado até que a tecla seja liberada.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Para abrir um vídeo, vá para Arquivo | Abra o vídeo.</li>
		<li>Pressione Reproduzir para iniciar o vídeo.</li>
		<li>À medida que os comportamentos são observados, clique com o botão esquerdo do mouse ou pressione a tecla do teclado atribuída para marcá-los.</li>
		<li>Para salvar os dados como um arquivo de valores separados por vírgula (.csv), vá para Analisar | Salvar saída como. Para salvar a folha de codificação Solomon (.arch), vá para Arquivo | Salve a folha de codificação.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Para abrir e carregar o MouseLabTracker.<ol>
		<li>Abra o MATLAB, no console, digite 'main()' e pressione Enter.</li>
		<li>Para carregar o vídeo, clique no botão abrir. Após o carregamento, a tela adjacente exibirá o vídeo com fundo verde e o animal em branco.</li>
		<li>Especifique o intervalo de tempo a ser analisado no vídeo. Clique em Iniciar para definir o início da análise. Clique em Finalizar para definir o final da análise. NOTA: Se nenhum intervalo for definido, o software analisará todo o vídeo.</li>
		<li>Para definir as configurações de rastreamento, vá para a guia Configurações de rastreamento .<ol>
			<li>Selecione Objetos escuros / Fundo claro para indicar que o animal é mais escuro que o fundo.</li>
			<li>Para ajustar o número de animais, vá para Assuntos e altere o número para 1.</li>
			<li>Para ajustar os parâmetros de detecção, altere a configuração do parâmetro Limite para que os valores de raio estejam entre 30 e 40.</li>
			<li>Defina a cor do animal clicando em Cor e selecionando a cor apropriada.</li>
			<li>Para definir a arena, clique em Definir arena, selecione o canto superior esquerdo da arena e, em seguida, selecione o canto inferior direito da arena.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Para iniciar o processo de rastreamento, clique em Rastrear. Aguarde até que a barra de progresso atinja 100%.</li>
		<li>Quando o rastreamento estiver concluído, salve o arquivo de saída da análise clicando em Salvar resultados.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
6. Comportamentos de codificação
<ol>
	<li>Primeiro, marque o tempo de administração do PTZ quando o mouse reaparecer no quadro de vídeo após ser colocado na arena observacional. Esse momento serve como tempo zero, servindo como referência temporal para todos os outros comportamentos, incluindo cálculos de latência.</li>
	<li>Observar espasmos e mioclonia alguns minutos após a injeção de PTZ (Figura 3), seguidos de possíveis convulsões límbicas. Os espasmos são contrações breves, transitórias e rápidas dos músculos axiais, incluindo flexão bilateral da orelha, contração dos músculos das costas, elevação da cauda (cauda de Straub) e, raramente, uma resposta de salto de sobressalto (Figura 3A). Codifique espasmos como eventos discretos, associando-os a um único quadro de vídeo sem duração. NOTA: Quantifique a diversidade e combinação de diferentes partes do corpo na expressão de espasmos (consulte a seção Resultados representativos).</li>
	<li>Para codificar a mioclonia, observe eventos com mais de 200 ms; Eles são caracterizados por um empurrão mioclônico forte e abrupto envolvendo a cabeça, pescoço e patas. Pode estar associada a tremores e perda da postura corporal (Figura 3B). A subclassificação inclui mioclonia com tremores ou com perda de postura para frente, para a esquerda ou para a direita. A duração normalmente varia de 1 a 2 s. Devido ao seu comprimento, a mioclonia requer codificação em várias unidades de tempo para um único evento.</li>
	<li>Para codificar convulsões límbicas, observe eventos que se assemelham ao descrito por Racine e podem ser codificados usando a escala de Racine. Geralmente começa com parada comportamental ou um período de olhar fixo, seguido por automatismos olfativos e gustativos, movimentos orofaciais, mioclonia do membro anterior e/ou da cabeça, empinação com ou sem queda, corrida ou salto selvagem e convulsão tônica com parada respiratória. Use a escala de Racine modificada18 para subclassificar as convulsões límbicas, que duram mais de 10-15 s e são distinguíveis de espasmos e mioclonia.</li>
	<li>Inclua classes comportamentais adicionais com base no protocolo experimental, permitindo uma triagem mais abrangente de comportamentos.</li>
	<li>Marque o final da sessão de gravação em um único período de tempo (1 h após a injeção de PTZ). Se o animal morrer após uma convulsão tônica, identifique a hora da morte com a marca final. NOTA: A folha de codificação pode ser salva a qualquer momento durante o processo de codificação e reaberta no software conforme necessário para codificação ou modificações contínuas.</li>
</ol>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68112/68112fig3v2.jpg"> 
Figura 3: Instantâneos dos comportamentos ictais observados após a administração de PTZ. (A) Este é um exemplo representativo de um dos primeiros espasmos observados após a injeção de PTZ. Todos os quadros são mostrados (amostragem de 30 fps). Observe que o espasmo dura menos de 200 ms e se move na direção rostrocaudal. Neste exemplo, não ocorreu nenhum levantamento de cauda evidente. (B) Um exemplo representativo de mioclonia associada à inclinação para a frente. Neste exemplo, a mioclonia durou mais de 1 s, onde ocorreu múltiplos clônus da cauda e do membro anterior. (C) Exemplo representativo de uma convulsão límbica. Antes do estágio 1 de Racine, o camundongo apresentava mioclonia sustentada nos membros, incluindo perda da postura corporal. A sequência mostra todos os cinco estágios tradicionais da escala de Racine convencional. Nesse caso, o mouse receberia uma pontuação de 5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68112/68112fig3v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
7. Análise e visualização de dados
<ol>
	<li>Calcule a latência da primeira ocorrência de cada uma das categorias de comportamento (por exemplo, espasmo, mioclonia, convulsão, etc.) subtraindo o tempo de injeção de PTZ de seu tempo registrado na folha de codificação.</li>
	<li>Calcule a duração de cada mioclonia e evento convulsivo e, em seguida, some-os para obter a duração total de cada categoria.</li>
	<li>Calcule a taxa de ocorrência de cada comportamento dividindo o número total de eventos pela duração da gravação.</li>
	<li>Calcule o intervalo entre eventos para cada comportamento encontrando a diferença de tempo entre eventos consecutivos.</li>
	<li>Defina os episódios de acordo com a distribuição temporal dos comportamentos ictais em cada sessão de gravação, quando aplicável. Calcule os parâmetros acima para cada episódio. NOTA: O fim das crises leva a um período de supressão pós-ictal, marcando a conclusão de um episódio para este protocolo. O reaparecimento de comportamentos ictais marca o início de um novo episódio. NOTA: Na ausência de convulsões, classifique a sessão de gravação com base na distribuição temporal de espasmos e mioclonia.</li>
	<li>Teste de normalidade usando o teste de Shapiro-Wilk para cada grupo.</li>
	<li>Para comparações paramétricas entre vários grupos, use o teste de análise de variância (ANOVA) unidirecional. Para dados pareados, use um teste t pareado ou ANOVA de medidas repetidas, dependendo da estrutura de dados.</li>
	<li>Definir significância estatística para valor de p de &lt; 0,05. Além disso, arredonde os valores-p abaixo de 0,0001 e relate-os como &lt;0,0001.</li>
</ol>

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<li>Pollo, M. L. M., Gimenes, C., Covolan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+rats+are+more+vulnerable+to+pentylenetetrazole-kindling+model+but+females+have+more+spatial+memory-related+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Behav%22%5BJournal%5D)">Male rats are more vulnerable to pentylenetetrazole-kindling model but females have more spatial memory-related deficits.</a> Epilepsy Behav. 129, 108632(2022).</li>
</ol>

A caracterização comportamental das convulsões é a leitura mais empregada em estudos da fisiopatologia da epilepsia e da atividade convulsiva, sendo amplamente utilizada para a triagem de novos medicamentos anticonvulsivantes 1,2. A maioria dos trabalhos publicados nos últimos 50 anos utilizou o sistema de pontuação progressiva desenvolvido por Ronald J. Racine para descrever a gravidade das crises comportamentais durante a amígdala e o hipocampo3. A escala de Racine mostrou uma forte correlação entre comportamento e atividade paroxística eletrofisiológica em ratos3 e gatos4. Classifica a expressão comportamental da convulsão em cinco estágios progressivos: "(i) movimentos da boca e do rosto, (ii) balançar a cabeça, (iii) clônus do membro anterior, (iv) empinar e (v) empinar e cair"3. Devido à sua simplicidade, facilidade de uso e interpretação, velocidade de pontuação e reprodutibilidade, o uso da escala de Racine em estudos de epilepsia e convulsões continua a crescer até os dias atuais (Figura 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68112/68112fig1.jpg"> 
Figura 1: Número de citações anuais recebidas pelo estudo de Racine de 1972. Observe o aumento constante no número de citações nos últimos 50 anos. Uma pesquisa no Web of Science realizada em 27 de novembro de 2024 revelou 6.040 citações, e 91 registros não continham informações no campo 'ano de publicação'. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68112/68112fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
A escala foi então aplicada a outros modelos animais de epilepsia e convulsão, incluindo aqueles que usam drogas para induzir convulsões. As primeiras descrições de convulsões induzidas por ácido caínico5 e estado de mal epiléptico (SE) 6, bem como SE local7 e induzido por pilocarpina sistêmica8, usaram a escala de Racine para quantificar as convulsões induzidas e espontâneas. Curiosamente, essas drogas não induziram apenas convulsões límbicas, como observado nos animais eletricamente estimulados e descritos por Racine, mas também provocaram um conjunto diferente de comportamentos que foram mal ou menos frequentemente descritos9.
As limitações da escala de Racine para compreender a diversidade de comportamentos ictais foram identificadas precocemente por pesquisadores usando modelos de convulsões nos quais o foco da convulsão está em outras regiões do cérebro além do sistema límbico. Por exemplo, Garcia-Cairasco foi um dos primeiros a utilizar ferramentas etológicas para avaliar o comportamento em crises audiogênicas10, revelando a complexidade e a progressão temporal dos comportamentos ictais 10,11. Recentemente, Ivan Soltesz usou uma sofisticada análise de profundidade de vídeo e codificação temporal detalhada para revelar "impressões digitais comportamentais ocultas" em ratos eletricamente inflamados12. Com base nessas abordagens, um novo sistema de codificação é introduzido aqui para convulsões agudas induzidas por pentilenotetrazol em camundongos.
O pentilenotetrazol (PTZ) leva a convulsões ao inibir a neurotransmissão GABAérgica13, resultando em aumento da excitabilidade neuronal e ativação síncrona de populações neuronais 14,15. Após uma única dose alta (40-80 mg / kg) de PTZ sistêmico, os roedores exibem mobilidade reduzida, movimentos inespecíficos do bigode, espasmos de corpo inteiro e espasmos mioclônicos, clônus orofacial e da pata e convulsões límbicas completas16. Ao contrário dos modelos de estado de mal epiléptico, o comportamento anormal após a PTZ dura até 1 h e remite espontaneamente 16,17,18. Autores anteriores propuseram uma versão revisada da escala de Racine para ratos17 e camundongos18. Apesar de sua tentativa de fornecer novos insights sobre a diversidade de comportamentos ictais, sua nova escala incorpora um ou dois novos níveis, associados a corridas e/ou saltos selvagens (nível 6, van Erum et al.18) e extensão tônica levando à parada respiratória (nível 7, van Erum et al.18).
Este protocolo apresenta uma nova abordagem para quantificar e representar comportamentos ictais induzidos por PTZ, com foco específico em espasmos e mioclonia. Esses comportamentos estão entre os mais prevalentes após a administração sistêmica de PTZ, mas são frequentemente negligenciados em estudos de convulsões e epilepsia. Assim, essa abordagem aborda uma lacuna metodológica crítica, fornecendo critérios específicos para identificar espasmos e mioclonias e distingui-los comportamentalmente das convulsões límbicas. Isso demonstra que espasmos e mioclonias exibem dinâmicas temporais distintas após administrações únicas e repetidas de PTZ. Este sistema de codificação é fácil de implementar, integra novos parâmetros de atividade anormal em metodologias existentes e oferece novos insights sobre os mecanismos de geração de convulsões. Finalmente, essa nova estratégia tem o potencial de padronizar a quantificação do comportamento ictal entre os laboratórios, melhorar a reprodutibilidade e ampliar as perspectivas sobre os mecanismos de convulsão.

<table><tbody><tr><td>Solução de cloreto de sódio a 0,9%</td><td>Fresenius Kabi Brasil Ltda</td><td>74MK3168</td><td>Sistema fechado para uso intravenoso; solução injetável, 250 mL.</td></tr><tr><td>Balança Analítica</td><td>Shimadzu</td><td>ATY224</td><td>Capacidade máxima: 220 g, Capacidade mínima: 10 mg, Resolução do aluno: 0,1 mg. Nº de série: 1311070096</td></tr><tr><td>Câmera</td><td>Jortan</td><td>Jortan-8816AHD</td><td>Câmera IR CCD, sistema NTSC, resolução de 2,0 MP, lente de 3,6 mm, fonte de alimentação DC 12 V.</td></tr><tr><td>Medidor de Lux Digital</td><td>Minipa</td><td>MLM-1011</td><td>Mede a intensidade da luz em unidades de lux.</td></tr><tr><td>Seringa</td><td>Descarpack</td><td>353101</td><td>Tamanho 26,5 G.</td></tr><tr><td>Mouses</td><td>-</td><td>-</td><td>Camundongos machos C57BL / 6 do tipo selvagem. Dois a três meses de idade.</td></tr><tr><td>Pentilenotetrazol</td><td>Sigma-Aldrich (Merck)</td><td>Pág. 6500-25G</td><td>Pó, estimulante do SNC. Comprado: 25 g. Armazenamento: -25 °C.</td></tr><tr><td>Software: MouseLabTracker</td><td>&nbsp; Giuliano Vilela</td><td>-</td><td>Software de código aberto, documento de referência: DOI: 10.1016/j.jneumeth.2006.04.005. Site: https://neuro.ufrn.br/softwares/mouselabtracker</td></tr><tr><td>Software: Solomon Coder</td><td>André s P&eacute; ter</td><td>-</td><td>Software de código aberto, v.19.08.02. Site:&nbsp; https://solomon.andraspeter.com/</td></tr><tr><td>Termo-higrômetro</td><td>Hikari</td><td>HK-T240</td><td>Mede temperatura e umidade.</td></tr></tbody></table>

caracterização comportamental de convulsões induzidas por pentilenotetrazol: indo além da escala de racine

Behavioral Characterization of Pentylenetetrazole-induced Seizures: Moving Beyond the Racine Scale

Para avaliar a estratégia de codificação e sua capacidade de detalhar comportamentos ictais durante convulsões induzidas por PTZ, três doses de PTZ foram testadas primeiro e seus efeitos em camundongos C57BL / 6 observados (40, 60 e 80 mg / kg, N = 7, 5 e 5, respectivamente). Os resultados comportamentais observados em três doses de PTZ revelaram claras diferenças dependentes da dose após uma única injeção. Os animais tratados com PTZ de 40 mg/kg apresentaram espasmos, mas sem convulsões límbicas ou mioclonia. Em contras...

Caracterização comportamental de convulsões induzidas por pentilenotetrazol: indo além da escala de Racine

Detailed behavioral characterization of seizures is essential in animal models of epilepsy. Although various protocols exist for inducing seizures, the ...

behavioral-characterization-pentylenetetrazole-induced-seizures

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este vídeo demonstra o registro eletroencefalográfico (EEG) de crises epilépticas em ratos induzidos por epilepsia. Um rato com eletrodos implantados no hipocampo ventral é conectado ao sistema de registro de EEG e colocado em uma câmara de plexiglass. O rato pode se mover livremente enquanto a atividade cerebral é registrada para monitorar a ocorrência de convulsões.

Registro eletroencefalográfico de crises epilépticas em ratos induzidos por epilepsia

Este vídeo demonstra o processo de indução de epilepsia em camundongos usando injeções de pentilenotetrazol (PTZ), um antagonista do receptor GABA-A. A administração intraperitoneal repetida de PTZ reduz progressivamente o limiar convulsivo, inibindo o influxo de íons cloreto, interrompendo a neurotransmissão inibitória e levando à hiperexcitabilidade nos neurônios que desencadeiam convulsões. Esse processo resulta em inflamações e no desenvolvimento de convulsões espontâneas, imitando a...

Estabelecendo um modelo de crise epiléptica induzida por pentilenotetrazol em camundongos

Não restrição EEG radiotelemetria é uma abordagem metodológica valiosa para gravar in vivo eletroencefalogramas de longo prazo de roedores que se movem livremente. Este protocolo detalhado descreve epidural estereotáxico e colocação de eletrodos intracerebral profunda em diferentes regiões do cérebro a fim de obter registos fiáveis ​​de CNS ritmicidade e estágios comportamentais relacionadas com o SNC.

Não restrição EEG Radiotelemetria: Epidural e Deep intracerebral estereotáxica EEG Colocação de eletrodos

Este artigo demonstra o desempenho da acupuntura, modelos de epilepsia e a análise do sono em roedores. O procedimento de acupuntura e a identificação dos pontos de acupuntura são descritos. Pilocarpina ou pentilenotetrazol (PTZ) é usado para induzir epilepsia. Eletrocorticograma (ECoG), eletromiograma (EMG), temperatura cerebral e registros de atividade locomotora são empregados para análise do sono.

Manipulação de epileptiforme Electrocorticograms (ECoGs) e do sono em ratos e camundongos por Acupuntura

Este protocolo descreve um método de inflamação química com mielinização e fornece um modelo do rato da epilepsia. Este protocolo também pode ser usado para investigar a vulnerabilidade à indução de convulsões e patogênese após crises epilépticas em ratos.

Inflamação induzida pela mielinização Mouse modelo

Este manuscrito descreve um método de induzir o estado de mal epiléptico por injeção de pilocarpina sistêmica e de monitorização espontâneas convulsões recorrentes em animais vivos, usando um sistema de eletroencefalograma e vídeo sem fio telemetria. Este protocolo pode ser utilizado para estudar os mecanismos fisiopatológicas da epilepsia crônica, epileptogenesis e convulsões agudas.

O modelo de pilocarpina de epilepsia do lobo Temporal e EEG monitoramento usando sistema de radiotelemetria em ratos

Aqui, descrevemos um método na vivo microdialysis analisar a liberação de aspartato e glutamato no hipocampo ventral de ratos epilépticos e não-epiléptica, em combinação com gravações de EEG. Concentrações extracelulares de aspartato e glutamato podem ser correlacionadas com as diferentes fases da doença.

Microdialysis de aminoácidos excitatórios durante as gravações de EEG em ratos movimentando-se livremente

Aqui, apresentamos um protocolo para o desenvolvimento e a caracterização de um modelo de zebrafish de epilepsia resultante da inibição transitória do gene DEPDC5.

Análise comportamental e fisiológica em um modelo de zebrafish de epilepsia

Este protocolo sistemático descreve um novo modelo animal de epilepsia pós-traumática após lesão cerebral traumática repetitiva. A primeira parte detalha etapas para indução traumática de lesão cerebral usando um modelo modificado de queda de peso. A segunda parte fornece instruções sobre a abordagem cirúrgica para sistemas de aquisição de dados eletroencefalográficos de um único e multicanal.

Induzir epilepsia pós-traumática em um modelo de camundongo de lesão cerebral traumática difusa repetitiva

O objetivo do método é testar para hipertermia ou convulsões induzidas pelo calor em modelos de camundongos. O protocolo descreve o uso de uma câmara personalizada com monitoramento contínuo da temperatura corporal para determinar se a temperatura corporal elevada leva a convulsões.

Uma tela comportamental para convulsões induzidas pelo calor em modelos de epilepsia de mouse

O protocolo mostra repetidas coletas de líquido cefalorraquidiano e sangue de ratos epilépticos realizadas em paralelo com a monitorização contínua por vídeo-eletroencefalograma (EEG). Estes são instrumentais para explorar possíveis ligações entre alterações em várias moléculas de fluido corporal e atividade convulsiva.

Amostragem de líquido cefalorraquidiano e sangue da veia lateral da cauda em ratos durante registros de EEG

Aprenda a caracterizar convulsões induzidas por pentilenotetrazol em camundongos usando análise de vídeo assistida por computador. Este método detalha espasmos e mioclonia para compreender melhor os mecanismos de início das crises límbicas.

Caracterização comportamental de convulsões induzidas por pentilenotetrazol: indo além da escala de Racine

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