Name: Estabelecimento e Análise Histológica de Organoides Esofágicos Modelando a Progressão de Tecidos Normais para Cancerosos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Aprenda a estabelecer organoides esofágicos e analisar mudanças histológicas na progressão de tecidos normais para cancerosos. Este método permite estudar alterações morfológicas e expressão de marcadores como KRT6A e PDL1.

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<ol><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+initiation+and+early+tumorigenesis%3A+Molecular+mechanisms+and+interventional+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Tumor initiation and early tumorigenesis: Molecular mechanisms and interventional targets.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 149(2024).</li>
<li>Sánchez-Danés, A., Blanpain, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deciphering+the+cells+of+origin+of+squamous+cell+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Deciphering the cells of origin of squamous cell carcinomas.</a> Nat Rev Cancer. 18 (9), 549-561 (2018).</li>
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<li>Lin, D. -C., Wang, M. -R., Koeffler, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+and+epigenomic+aberrations+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma+and+implications+for+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Genomic and epigenomic aberrations in esophageal squamous cell carcinoma and implications for patients.</a> Gastroenterology. 154 (2), 374-389 (2018).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cells+activate+fibroblasts+to+promote+esophageal+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Epithelial cells activate fibroblasts to promote esophageal cancer development.</a> Cancer Cell. 41 (5), 903-918.e8 (2023).</li>
<li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+alterations+driving+precancerous+to+cancerous+lesions+in+esophageal+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Genomic alterations driving precancerous to cancerous lesions in esophageal cancer development.</a> Cancer Cell. 41 (12), 2038-2050.e5 (2023).</li>
<li>Lo, Y. -H., Karlsson, K., Kuo, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+organoids+for+cancer+biology+and+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cancer%22%5BJournal%5D)">Applications of organoids for cancer biology and precision medicine.</a> Nat Cancer. 1 (8), 761-773 (2020).</li>
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<li>Tang, X. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+organoids+in+basic+research+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Human organoids in basic research and clinical applications.</a> Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 168(2022).</li>
<li>Xu, H., Jiao, D., Liu, A., Wu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+organoids%3A+Applications+in+cancer+modeling+and+potentials+in+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumor organoids: Applications in cancer modeling and potentials in precision medicine.</a> J Hematol Oncol. 15 (1), 58(2022).</li>
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<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Ko, K. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+genetic+determinants+driving+esophageal+squamous+cell+carcinoma+initiation+and+immune+evasion%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Key genetic determinants driving esophageal squamous cell carcinoma initiation and immune evasion.</a> Gastroenterology. 165 (3), 613-628.e20 (2023).</li>
<li>Kornepati, A. V. R., Vadlamudi, R. K., Curiel, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+death+ligand+1+signals+in+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Programmed death ligand 1 signals in cancer cells.</a> Nat Rev Cancer. 22 (3), 174-189 (2022).</li>
<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+tumor+microenvironment+in+PD-L1%2FPD-1-mediated+tumor+immune+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Role of the tumor microenvironment in PD-L1/PD-1-mediated tumor immune escape.</a> Mol Cancer. 18 (1), 10(2019).</li>
<li>Magré, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+organoid-immune+co-culture+models+for+cancer+research%3A+From+oncoimmunology+to+personalized+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Emerging organoid-immune co-culture models for cancer research: From oncoimmunology to personalized immunotherapies.</a> J Immunother Cancer. 11 (5), e006290(2023).</li>
<li>Kijima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organoids+reveal+therapy+resistance+of+esophageal+and+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organoids reveal therapy resistance of esophageal and oropharyngeal squamous cell carcinoma cells.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 7 (1), 73-91 (2019).</li>
<li>Fujii, M., Sekine, S., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decoding+the+basis+of+histological+variation+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Decoding the basis of histological variation in human cancer.</a> Nat Rev Cancer. 24 (2), 141-158 (2024).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 94(2022).</li>
<li>Tong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+in+precision+cancer+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Med%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids in precision cancer medicine.</a> Med. 5 (11), 1351-1377 (2024).</li>
<li>Grönholm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+for+precision+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy.</a> Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).</li>
<li>Sun, C. -P., Lan, H. -R., Fang, X. -L., Yang, X. -Y., Jin, K. -T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+for+precision+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Organoid models for precision cancer immunotherapy.</a> Front Immunol. 13, 770465(2022).</li>
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<li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+development+and+disease+with+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Modeling development and disease with organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li>
<li>Camp, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cerebral+organoids+recapitulate+gene+expression+programs+of+fetal+neocortex+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Human cerebral organoids recapitulate gene expression programs of fetal neocortex development.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (51), 15672-15677 (2015).</li>
<li>Lau, H. C. H., Kranenburg, O., Xiao, H., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+of+gastrointestinal+cancers+in+basic+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Organoid models of gastrointestinal cancers in basic and translational research.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 17 (4), 203-222 (2020).</li>
<li>Han, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Landscape+of+human+organoids%3A+Ideal+model+in+clinics+and+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Innovation%22%5BJournal%5D)">Landscape of human organoids: Ideal model in clinics and research.</a> The Innovation. 5 (3), 100620(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,22 &mu; filtro m</td><td>Merck</td><td>Cat#SLGPR33RB</td><td></td></tr><tr><td>placa de 24 poços</td><td>Corning</td><td>Cat#3524</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldeído</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0099</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; m filtro estéril</td><td>Falcon</td><td>Cat#352350</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Tocris Bioscience</td><td>Cat# 2939</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>Cat# 12634028</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Solarbio</td><td>Cat# A8190</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Anti (Antibiótico-Antimicótico)</td><td>Gibco</td><td>Cat# 15240062</td><td></td></tr><tr><td>B-27 suplemento</td><td>Gibco</td><td>Cat# 17504044</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora CO2</td><td>Thermo&nbsp;</td><td>Cat#371GPCN</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase IV</td><td>Gibco</td><td>Cat# 17104019</td><td></td></tr><tr><td>Cryostor</td><td>STEMCELL</td><td>Cat# 07930</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>Cat# 10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Gibco</td><td>Cat# PHG0313</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Cell Technologies</td><td>Cat# 30070</td><td></td></tr><tr><td>G-418</td><td>Sigma</td><td>Cat# A1720</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina</td><td>Solarbio</td><td>Cat# G8061</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>Cat# 35050061</td><td></td></tr><tr><td>Fator de crescimento reduzido Matrigel</td><td>Corning</td><td>Cat# 354230</td><td></td></tr><tr><td>Kit de coloração HE</td><td>Beijing Yili Fine Chemicals Co., Ltd</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>Cat# 15630080</td><td></td></tr><tr><td>Caneta histológica</td><td>Zsbio</td><td>Cat#ZLI-9305</td><td></td></tr><tr><td>Hygromycin B</td><td>Sigma</td><td>Cat# 400050</td><td></td></tr><tr><td>Kit de coloração imuno-histoquímica</td><td>ZSGB-BIO</td><td>PV-8000</td><td></td></tr><tr><td>L-WRN</td><td>ATCC</td><td>CRL-3276; RRID:CVCL_DA06</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento N-2</td><td>Gibco</td><td>Cat# 17502048</td><td></td></tr><tr><td>Goma neutra&nbsp;</td><td>Zsbio</td><td>Cat#ZLI-9555</td><td></td></tr><tr><td>Opal 5-Color Manual IHC Kit</td><td>PANOVUE</td><td>Cat# 10144100100</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>MeilunBio</td><td>Cat#MA0015</td><td></td></tr><tr><td>Coelho Monoclone anti-PD-L1</td><td>CST</td><td>Cat# 13684; RRID: AB_2687655</td><td></td></tr><tr><td>Coelho Policlonal anti-Ki67</td><td>Abcam</td><td>Cat# ab16667; RRID: AB_302459</td><td></td></tr><tr><td>Coelho Policlonal anti-KRT6A</td><td>Proteintech</td><td>Cat# 10590-1-AP; RRID: AB_2134306</td><td></td></tr><tr><td>soro de ovelha</td><td>Zsbio</td><td>Cat#ZLI-9056</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Gibco</td><td>Cat# 12604021</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE-EDTA</td><td>Gibco</td><td>Cat#15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Scanner de imagem de lâmina inteira</td><td>Hamamatsu</td><td>Cat#C13210</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Selleck Chemicals</td><td>Cat# S1049</td><td></td></tr></tbody></table>

estabelecimento e análise histológica de organoides esofágicos modelando a progressão de tecidos normais para cancerosos

Establishment and Histological Analysis of Esophageal Organoids Modeling the Progression from Normal to Cancerous Tissues

Este protocolo descreve a amostragem de organoides e a análise histológica em diferentes estágios da tumorigênese do CEC (Figura 1). Ao coletar amostras de mucosa esofágica normal, neoplasia intraepitelial de baixo grau (LGIN), neoplasia intraepitelial de alto grau (HGIN) e tecidos tumorais de pacientes com ESCC, organoides representando diferentes estágios de tumorigênese podem ser construídos. Além disso, foi realizada a inclusão e seccionamento desses organoides em parafina, seguida de co...

Estabelecimento e Análise Histológica de Organoides Esofágicos Modelando a Progressão de Tecidos Normais para Cancerosos

Organoids have emerged as a pivotal tool for advancing the understanding of tumorigenesis and cancer therapy. By generating human organoid models ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Este manuscrito descreve a produção, caracterização e usos potenciais de uma engenharia de tecidos construção de esôfago 3D preparado a partir de fibroblastos de esôfago normais primária humana e células epiteliais escamosas semeadas dentro de um andaime porcino de-celularizado. Os resultados demonstram a formação de um epitélio estratificado maduro semelhante ao esófago humano normal.

Produção, Caracterização e usos potenciais de uma mucosa esofágica Modelo 3D Human Tissue-engenharia

Este protocolo descreve os métodos de subcultura e criopreservação de organoides adenocarcinoma esofágico com e sem digestão celular única para permitir que os pesquisadores escolham estratégias apropriadas com base em seu desenho experimental.

Subcultura e Criopreservação de Organoides Adenocarcinoma Esofágico: Prós e Contras para Digestão Celular Única

Este protocolo discute uma abordagem para a geração de organoides epiteliais a partir de tecido mamário primário normal e tumoral através da centrifugação diferencial. Além disso, estão incluídas instruções para a cultura tridimensional, bem como imagens imunofluorescentes de organoides incorporados.

Gerando e Imageando Organoides Epitéliares de Camundongos e Humanos a partir de Tecido Mamário Normal e Tumoral Sem Passagem

Este protocolo descreve os principais passos para gerar e caracterizar organoides 3D oro-esofágicos murinos que representam lesões normais, pré-neoplásicas e de carcinoma espinocelular induzidas por carcinogênese química.

Modelagem do carcinoma epidermóide orco-esofágico em organoides 3D

Co-culturas organóide-fibroblastos fornecem um modelo para estudar o nicho de células-tronco in vivo . Aqui é descrito um protocolo para co-culturas esofágico-organóide-fibroblasto. Além disso, imagens de montagem inteira são usadas para visualizar a interação fibroblasto-organoide.

Caracterização funcional e visualização de fibroblastos esofágicos utilizando co-culturas organoides

Organoides gástricos derivados de pacientes encontram uso crescente em pesquisas, mas faltam protocolos formais para gerar organoides gástricos humanos a partir de digestores unicelulares com densidade de semeadura padronizada. Este protocolo apresenta um método detalhado para a criação confiável de organoides gástricos a partir de tecido de biópsia obtido durante a endoscopia digestiva alta.

Estabelecimento e Caracterização de Organoides Gástricos Derivados de Pacientes a partir de Biópsias do Corpo Gástrico Benigno e Epitélio Antral

Aqui, é fornecido um protocolo para a cultura de organoides esofágicos humanos e cultura de interface ar-líquido. A cultura de interface ar-líquido dos organoides esofágicos pode ser usada para estudar o impacto das citocinas na barreira epitelial esofágica.

Modelos tridimensionais de cultura celular para investigar a barreira epitelial na esofagite eosinofílica 

Este protocolo descreve um método para isolar simultaneamente organoides cancerígenos, fibroblastos associados ao carcinoma (CAFs) e fibroblastos (CFs) não associados a tumores do mesmo paciente com carcinoma de células escamosas esofágicas (ESCC). O uso desses materiais combinados com pacientes poderia evitar problemas de variabilidade entre pacientes e fornecer uma plataforma experimental adequada para pesquisas em ESCC.

Estabelecimento de organoides tumorais, fibroblastos associados ao carcinoma e fibroblastos equivalentes do mesmo paciente com câncer de esôfago

A presença de células-tronco cancerosas (CSCs) em sarcomas ósseos foi recentemente ligada à sua patogênese. Neste artigo, apresentamos o isolamento de CSCs de culturas de células primárias obtidas a partir de biópsias humanas de osteossarcoma convencional (OS) que utilizam a capacidade dos CSCs a crescer sob condições não aderentes.

Establishment of Cancer Stem Cell Cultures de Human osteossarcoma convencional

Um modelo animal é necessário decifrar o papel de células tumorais (CTC) em promover a colonização de pulmão durante a metástase do cancro em circulação. Aqui, nós estabelecemos e realizou com sucesso um na vivo do ensaio para teste especificamente a exigência de assembly de fibronectina poliméricos (polyFN) na CTC para a colonização de pulmão.

O estabelecimento de um ensaio de colonização de pulmão para visualização de células de Tumor nos tecidos do pulmão de circulação

Aprenda a estabelecer organoides esofágicos e analisar mudanças histológicas na progressão de tecidos normais para cancerosos. Este método permite estudar alterações morfológicas e expressão de marcadores como KRT6A e PDL1.

Estabelecimento e Análise Histológica de Organoides Esofágicos Modelando a Progressão de Tecidos Normais para Cancerosos

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