Name: Entrega e expressão gênica aprimoradas usando injeção intraóssea de nanopartículas de quitosana encapsuladas em plasmídeos editores de base de adenina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-16T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Aprenda a entregar plasmídeos editores de adenina encapsulados em quitosana diretamente à medula óssea de camundongos por injeção intraóssea. Este método oferece alta eficiência de transfecção com mínimo dano biológico.

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<ol><li>Ikawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+hemoglobinopathies%3A+Progress+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of hemoglobinopathies: Progress and future challenges.</a> Hum Mol Genet. 28 (R1), R24-R30 (2019).</li>
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<li>Alizadeh, L., Zarebkohan, A., Salehi, R., Ajjoolabady, A., Rahmati-Yamchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitosan-based+nanotherapeutics+for+ovarian+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Drug+Target%22%5BJournal%5D)">Chitosan-based nanotherapeutics for ovarian cancer treatment.</a> J Drug Target. 27 (8), 839-852 (2019).</li>
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<li>Tang, J., Lee, T., Sun, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-nucleotide+editing%3A+From+principle%2C+optimization+to+application%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mutat%22%5BJournal%5D)">Single-nucleotide editing: From principle, optimization to application.</a> Hum Mutat. 40 (12), 2171-2183 (2019).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubos de PCR de 0,2 ml, tampa plana</td><td>SELEÇÃO LABSELECT</td><td>&nbsp; PT-02-C</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 1 ml</td><td>Anhui Jiangnan equipamentos médicos Co., LTD</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>1% de pentobarbital sódico</td><td>/</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 1,5 ml</td><td>SELEÇÃO LABSELECT</td><td>MCT-001-150</td><td></td></tr><tr><td>10 &vezes; Buffer de carregamento de DNA</td><td>Vazyme</td><td>Pág. 022-01</td><td></td></tr><tr><td>10X T4 DNA Ligase Tampão 1 ml</td><td>TaKaRa Biotecnologia (Dalian) Co., LTD</td><td>2011UMA</td><td></td></tr><tr><td>1250 &mu; l Ponta de pipeta 102,1 mm</td><td>SELEÇÃO LABSELECT</td><td>T-001-1250</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; l pontas de pipeta 50,55 mm</td><td>SELEÇÃO LABSELECT</td><td>&nbsp; T-001-200</td><td></td></tr><tr><td>2x Phanta Max Buffera</td><td>Vazyme</td><td>Pág. 505-d1</td><td></td></tr><tr><td>4 ? centrifuga</td><td>Thermo Fisher</td><td>75002425</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 50 ml</td><td>SELEÇÃO LABSELECT</td><td>T-012-50</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultura celular de 6 poços</td><td>SELEÇÃO LABSELECT</td><td>11110</td><td></td></tr><tr><td>Ágar</td><td>Sangon Biotech</td><td>A505255-0250</td><td></td></tr><tr><td>AMP</td><td>Poço Abiowell</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Quitosana</td><td>Sangon Biotech</td><td>A600614-0500</td><td></td></tr><tr><td>Agitador de cultura de temperatura constante</td><td>Shanghai Zhicheng Analytical Instrument Manufacturing Co., LTD</td><td>ZWY-200D</td><td></td></tr><tr><td>Contador de Células Automatizado Countess</td><td>Thermo Fisher Científico</td><td>Condessa II/II FL</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas e suporte para câmara de contagem de células Countess, descartáveis</td><td>Thermo Fisher Científico</td><td>C10228</td><td></td></tr><tr><td>CutSmart Buffer</td><td>Biolabs da Nova Inglaterra</td><td>B7204SVIAL</td><td></td></tr><tr><td>DH5&alfa;</td><td>Biossistemas Gerais</td><td>CS01010</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>gibco</td><td>C11995500BT</td><td></td></tr><tr><td>Mistura dNTP</td><td>Vazyme</td><td>Pág. 505-d1</td><td></td></tr><tr><td>Enzima Esp3I</td><td>NEBiolabs</td><td>R0734S</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilenodiaminotetracético</td><td>VETEC (sigma-aldrich)</td><td>V900106</td><td></td></tr><tr><td>Soro fetal bovino</td><td>OriCell</td><td>FBSAD-01011-500</td><td></td></tr><tr><td>Citômetro de fluxo</td><td>BD FACSCalibur</td><td>342975</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de fluxo</td><td>Beyotime Biotecnologia</td><td>FFC005-1bag</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência</td><td>Leica</td><td>427019</td><td></td></tr><tr><td>Kit de purificação de gel maxi</td><td>TIANGEN</td><td>DP210</td><td></td></tr><tr><td>Kit de extração de DNA genômico</td><td>TIANGEN</td><td>DP304</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético glacial</td><td>Corporação Nacional do Grupo Farmacêutico da China</td><td>10000218</td><td></td></tr><tr><td>Marcador de DNA GoldBand DL2.000</td><td>SIM</td><td>10501ES60</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de gelo</td><td>XangaiZhengqiao</td><td>BNS-30</td><td>Laboratório reservado</td></tr><tr><td>Tampão ImunoSep</td><td>Biomédicos Co. da precisão, LTD</td><td>604050</td><td></td></tr><tr><td>Série de centrífugas de bancada pequenas Megafuge 8</td><td>Thermo Fisher Científico</td><td>75004250</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Tecnologia da Vida</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 2000&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, EUA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>SIGAM</td><td>S5881-500G</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>XiGene</td><td>XG3650</td><td></td></tr><tr><td>Vetor PCMV-SPRY-ABE8E</td><td>/</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho de amplificação de PCR</td><td>Thermo Fisher</td><td>AKC96300441</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>Pág. 1400</td><td></td></tr><tr><td>peptona</td><td>Sangon Biotech</td><td>A505247-0500</td><td></td></tr><tr><td>Polimerase de DNA de superfidelidade Phanta Max</td><td>Vazyme</td><td>Pág. 505-d1</td><td></td></tr><tr><td>Lisado de glóbulos vermelhos</td><td>Beyotime</td><td>C3702</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>Corporação Nacional do Grupo Farmacêutico da China</td><td>10019318</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de sódio</td><td>Aladdin</td><td>S433911</td><td></td></tr><tr><td>T-001-10 10&mu; l pontas de pipeta 31,65 mm</td><td>SELEÇÃO LABSELECT</td><td>&nbsp; T-001-10</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA Ligase</td><td>TaKaRa Biotecnologia (Dalian) Co., LTD</td><td>2011UMA</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>BioFroxx</td><td>1115KG001</td><td></td></tr><tr><td>triptona</td><td>Sangon Biotech</td><td>A505250-0500</td><td></td></tr><tr><td>misturador de vórtice</td><td>sigma</td><td>Z258423</td><td></td></tr><tr><td>Banho-maria</td><td>Xangaiyiheng</td><td>DK-80</td><td></td></tr><tr><td>YeaRed Ácido Nucleico Gel Mancha</td><td>SIM</td><td>10203ES76</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de levedura</td><td>BBI</td><td>A610961-0500</td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano</td><td>Malvern Panalytical</td><td>Zetasizer Nano ZS</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>444203</td><td></td></tr></tbody></table>

entrega e expressão gênica aprimoradas usando injeção intraóssea de nanopartículas de quitosana encapsuladas em plasmídeos editores de base de adenina

Enhanced Gene Delivery and Expression using Intraosseous Injection of Chitosan Nanoparticles Encapsulated Adenine Base Editor Plasmids

Plasmídeos in vitro foram injetados em camundongos por injeção intraóssea (Figura 1A). O tamanho médio das partículas das nanopartículas foi de cerca de 202,9 nm, o potencial foi de 2,77 mV e o PDI foi de 0,22 (Figura 1B). A Figura 1C mostra a forma da superfície das nanopartículas observadas como esféricas por microscopia eletrônica. A Figura 1D mostra o mapa ...

Entrega e expressão gênica aprimoradas usando injeção intraóssea de nanopartículas de quitosana encapsuladas em plasmídeos editores de base de adenina

The delivery of exogenous plasmids into experimental animals is crucial in biomedical research, including the investigation of gene functions, the ...

enhanced-gene-delivery-expression-using-intraosseous-injection

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Na transfecção in vivo de ADN nu por entrega de genes hidrodinâmico apresenta genes no tecido de um animal com uma resposta inflamatória mínima. Uma quantidade suficiente de produto do gene são gerados de tal forma que a função do gene e regulação, bem como a estrutura e função da proteína pode ser analisado.

Expressão transiente de proteínas por hidrodinâmica Gene Entrega em Ratos

Esses estudos relatam a ligação reversível de vetores genéticos adenovirais a superfícies metálicas sem revestimento de stents e discos de malha modelo. A liberação sustentada de partículas virais competentes para transdução contingentes à hidrólise de reticuladores usados para imobilização vetorial resulta em uma expressão transgênica durável e específica do local em células vasculares e em artérias com stent.

Vascular transferência de genes de Metallic Stent superfícies usando Adenoviral Vetores Tethered através hidrolisável reticulantes

A diferenciação de células precursoras em osteoclastos é regulada por citocinas e fatores de crescimento. Aqui, uma nova técnica de transferência de genes para diferenciação de osteoclastos in vivo e protocolos de cultura de células para diferenciar células precursoras em osteoclastos in vitro como um método para estudar os efeitos das citocinas na osteoclastogênese são descritos.

A Novel In vivo Técnica Gene Transferência e In vitro Ensaios baseados em células para o Estudo da perda óssea em Distúrbios Osteomusculares

Este protocolo descreve um sistema de transplante de células usando esferoides injetáveis geneticamente modificados. Os esferoides celulares são cultivados em placas de cultura micropadronizadas e recuperados após a introdução do gene usando nanomicelas poliplex. Este sistema facilita a expressão prolongada do transgene das células transplantadas em animais hospedeiros, mantendo a função inata das células.

A transfecção Gene direção Células Spheroid em placas micropadronadas Cultura para Transplante de Células geneticamente modificados

Os métodos existentes para a modificação de plantas têm aplicabilidade limitada. A nova tecnologia derivada de peptídeos proposta aqui promete simplicidade e eficiência na introdução de proteínas ou genes exógenos nos compartimentos intracelulares desejados de plantas intactas.

Peptídeo derivado Método para Transporte genes e proteínas Através Celular e Barreiras organelares em plantas

Este protocolo é uma alternativa de custo eficaz para a expressão de ADN de plasmídeo despido na pele do rato. O objectivo geral do protocolo é a entrega de genes imuno-relacionados no tecido da pele para delinear o papel funcional de um gene específico em inflamação cutânea.

Desenvolvimento de um sistema de entrega de DNA Economical por &quot;Acufection&quot; e sua aplicação à Skin Research

Este protocolo descreve um método para injetar plasmídeo no rim do rato através da pelve renal para produzir a expressão do transgene especificamente no rim.

Injeção hidrodinâmica pelve Renal para a expressão não-virais de proteínas no rim

Este método descreve a colocação de enxertos de veia interposição em coelhos, a transdução de enxertos e a realização da expressão do transgene durável. Isso permite que a investigação de papéis fisiológicos e patológicos de transgenes e seus produtos de proteína nas veias transplantadas e teste de terapias do gene para a doença do enxerto de veia.

Um modelo de coelho da expressão do Transgene durável na veia Jugular para enxertos de interposição da artéria carótida comum

A utilização de um modelo de tumor autóctone imunocompetente conduzido por mutações comuns de pacientes para testes pré-clínicos é fundamental para testes imunoterapêuticos. Este protocolo descreve um método para gerar modelos de tumor cerebral em camundongos usando a entrega baseada em eletroporação de DNA plasmidial que representa mutações comuns em pacientes, fornecendo assim um modelo de camundongo preciso, reprodutível e consistente.

Modelando Tumores Cerebrais In Vivo Usando a Liberação Eletroporada de DNA Plasmidial Representando Assinaturas de Mutação de Pacientes

Este protocolo descreve como a injeção intraesplênica de RNA em grampo de cabelo pequeno entregue por AAV8 atinge a mesma eficiência de knockdown de genes no fígado que a injeção na veia porta, representando um procedimento mais simples com mortalidade e complicações perioperatórias e pós-operatórias muito menores.

Nocaute Eficiente de Genes no Fígado por Injeção Intraesplênica de RNA Pequeno em Grampo de Cabelo Entregue pelo Vírus Adeno-Associado Sorótipo 8 (AAV8)

Esse protocolo visa introduzir um método para produzir e purificar biomiméticos extracelulares derivados de células-tronco mesenquimais (MSC) para terapia gênica. A nanovesícula é confinada com bicamadas lipídicas derivadas da MSC e encapsula AAVs recombinantes que carregam o gene de interesse no lúmen. Essa nanovesícula oferece um vetor aprimorado para a entrega de genes in vivo .

Desenvolvimento de Nanovesículas Envolvidas em Membrana por Células-Tronco Mesenquimatosas para Entrega Aprimorada de Genes

Aprenda a entregar plasmídeos editores de adenina encapsulados em quitosana diretamente à medula óssea de camundongos por injeção intraóssea. Este método oferece alta eficiência de transfecção com mínimo dano biológico.

Entrega e expressão gênica aprimoradas usando injeção intraóssea de nanopartículas de quitosana encapsuladas em plasmídeos editores de base de adenina (Vídeo) | JoVE Journal

Entrega e expressão gênica aprimoradas usando injeção intraóssea de nanopartículas de quitosana encapsuladas em plasmídeos editores de base de adenina

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