Name: In vivo Imagem de cálcio de conjuntos neuronais em redes de neurônios sensoriais primários em gânglios trigêmeos intactos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T13:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Aprenda imagem de cálcio GCaMP in vivo em neurônios do gânglio trigêmeo intacto em camundongos anestesiados. Este método permite visualizar mais de 3.000 neurônios simultaneamente para estudar respostas sensoriais à dor, coceira e tato em tempo real.

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<table><tbody><tr><td>Injeção Anasada (Xilazina)</td><td>Covetrus, Akorn</td><td>33197</td><td></td></tr><tr><td>Flurar 5x/0.25 M27 obejctive</td><td>Cal Zeiss</td><td>420130-9900-000</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores com ponta de algodão</td><td>McKesson</td><td>24-106-1S</td><td></td></tr><tr><td>Hemostático curvo</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>13007-12</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de temperatura DC</td><td>FHC</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento do controlador de temperatura DC</td><td>FHC</td><td>40-90-2-05</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps Revestido de Cerâmica Dumont</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>11252-50</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de temperatura FHC DC</td><td>FHC</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>Fluriso (isoflurano)</td><td>MWI Saúde Animal, Grupo Piramal</td><td>501017</td><td></td></tr><tr><td>Friedman-Pearson Rongeurs</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>16221-14</td><td></td></tr><tr><td>GelFoam</td><td>Pfizer</td><td>09-0353-01</td><td></td></tr><tr><td>ImagemJ</td><td>Institutos Nacionais de Saúde</td><td>ij153</td><td></td></tr><tr><td>Ketaset (cetamina)</td><td>Zoetis</td><td>KET-00002R2</td><td></td></tr><tr><td>Suporte de cabeça de anestesia a gás de camundongo modelo 923-B (camundongo adulto)</td><td>Instrumentos Kopf</td><td>923-B</td><td></td></tr><tr><td>Fita de palco verde luminescente</td><td>JSITON/ Amazônia</td><td>B803YW8ZWL</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de peça de mão de laboratório elétrico compacto M35</td><td>Buffalo Dental Manufacturing Co., Inc.</td><td>M35</td><td></td></tr><tr><td>Vaporizador de isoflurano Matrx VIP 3000</td><td>Marca intermediária</td><td>91305430</td><td></td></tr><tr><td>Micro tesoura de dissecação</td><td>Roboz</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola de micro dissecação</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>15023-10</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola de micro dissecação</td><td>Roboz</td><td>RS-5677</td><td></td></tr><tr><td>Mini sonda de termistor retal</td><td>FHC</td><td>40-90-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de operação</td><td>Roboz</td><td>RS-6812</td><td></td></tr><tr><td>Camundongos Pirt-GCaMP3 C57/BL/6J</td><td>Universidade Johns Hopkins</td><td>N/A</td><td>Ambos os sexos podem ser visualizados igualmente bem. Os camundongos devem ter pelo menos 8 semanas de idade devido à expressão fraca ou intermitente do promotor de Pirt em camundongos mais jovens.</td></tr><tr><td>Cloreto de potássio</td><td>Fisher Científico</td><td>BP366-500</td><td></td></tr><tr><td>Quadro estereotáxico</td><td>Kopf Modelo 923-B</td><td>923-B</td><td></td></tr><tr><td>Máscara estereotáxica (ativa) para camundongos < 30g com bisnagas</td><td>RWD Ciências da Vida</td><td>68663</td><td></td></tr><tr><td>Fresa TNT de fissura cônica (31P)</td><td>Buffalo Dental Manufacturing Co., Inc.</td><td>31P-OURO</td><td></td></tr><tr><td>Camundongos td-Tomato C57BL/6J</td><td>Laboratório Jackson</td><td>7909</td><td></td></tr><tr><td>Placa superior, 6 pol x 10 pol.</td><td>Newport</td><td>290-TP</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta de transferência, 3mL</td><td>Cole Parmer</td><td>UX-06226-23</td><td></td></tr><tr><td>Camundongos TrpV1-Cre C57BL/6J</td><td>Laboratório Jackson</td><td>17769</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio confocal Zeiss LSM 800</td><td>Cal Zeiss</td><td>LSM800</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Zen 2.6 Blue Edition Software</td><td>Cal Zeiss</td><td>Zen (Edição Azul) 2.6</td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo imagem de cálcio de conjuntos neuronais em redes de neurônios sensoriais primários em gânglios trigêmeos intactos

In Vivo Calcium Imaging of Neuronal Ensembles in Networks of Primary Sensory Neurons in Intact Trigeminal Ganglia

Imagem de um grande número de neurônios e ramos específicos do trigêmeo por varredura confocal do gânglio trigêmeo Pirt-GCaMP Após a exposição cirúrgica ao TG em camundongos Pirt-GCaMP3, a microscopia confocal permite a obtenção de imagens de mais de &gt;3.000 neurônios simultaneamente (Figura 4). Isso fornece a poderosa vantagem de observar milhares de neurônios TG simultaneamente em seu contexto fisiológico normal. Os transientes espontâneos de Ca2+ podem ser...

In vivo Imagem de cálcio de conjuntos neuronais em redes de neurônios sensoriais primários em gânglios trigêmeos intactos

Calcium imaging is an important tool for monitoring signaling mechanisms that either influx Ca2+ into the cytosol or release Ca2+ from intracellular Ca2+ ...

in-vivo-calcium-imaging-neuronal-ensembles-networks-primary-sensory

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Fonte: Shannonhouse, J., et al. In vivo Imagem de cálcio de conjuntos neuronais em redes de neurônios sensoriais primários em gânglios da raiz dorsal intactos. J. Vis. Exp. (2023). O vídeo demonstra uma técnica de imagem de cálcio in vivo para monitorar a atividade neuronal nos gânglios da raiz dorsal (DRG) de um camundongo transgênico. Os neurônios DRG expressam um indicador de cálcio que aumenta a intensidade da fluorescência ao se ligar ao cálcio. Estímulos mecânicos ou térmicos aplicados a...

Imagem de cálcio in vivo de conjuntos neuronais nos gânglios intactos da raiz dorsal de um camundongo

Descrevemos um procedimento experimental para medir a atividade neuronal através de janelas ópticas duas acima bilateral corticies somatossensorial primária (S1) em Thy1-GCaMP6s de ratos transgênicos usando 2-fóton (2P) microscopia na vivo.

Imagem de atividade Neural no córtex somatossensorial primário usando Thy1-GCaMP6s de ratos transgênicos

Aqui apresentamos como expor o gânglio geniculado de um rato de laboratório vivo, anestesiado e como usar imagens de cálcio para medir as respostas desses conjuntos desses neurônios a estímulos de sabor, permitindo múltiplos ensaios com diferentes estimulantes. Isso permite comparações profundas das quais os neurônios respondem a quais tastantes.

In vivo Imagem de cálcio do rato Geniculado Gânglio Respostas ao Sabor Estímulo

Este protocolo descreve a exposição cirúrgica do gânglio da raiz dorsal (DRG) seguida de GCaMP3 (indicador Ca2+ codificado geneticamente; Green Fluorescent Protein-Calmodulin-M13 Protein 3) Imagem de Ca2+ dos conjuntos neuronais usando camundongos Pirt-GCaMP3 enquanto se aplica uma variedade de estímulos na pata traseira ipsilateral.

In vivo Imagem com cálcio de conjuntos neuronais em redes de neurônios sensoriais primários em gânglios intactos da raiz dorsal

O presente protocolo descreve imagens de cálcio in vivo para medir as respostas de conjuntos de neurônios lombares-6 DRG a estímulos somáticos e viscerais. Comparações completas podem ser feitas entre neurônios que respondem a diferentes estímulos. Este protocolo é valioso para investigar mecanismos de dor visceral e estimulação somática, como a acupuntura.

in vivo Imagem de cálcio da resposta dos neurônios dos gânglios da raiz dorsal a estímulos somáticos e viscerais

Indicadores de cálcio codificados geneticamente (GECI) permitem uma análise robusta em nível populacional da sinalização de neurônios sensoriais. Aqui, desenvolvemos uma nova abordagem que permite a visualização in vivo do GECI da atividade dos neurônios dos gânglios trigeminais de ratos.

In-Vivo Imagem de cálcio de neurônios sensoriais no gânglio trigeminal de ratos

Atividade espontânea de desenvolvimento de redes neuronais podem ser medidos utilizando-AM éster formas de corantes de cálcio sensível indicador. Alterações de cálcio intracelular, o que indica a ativação neuronal, são detectados como alterações transitórias na fluorescência indicador com um ou dois fótons de imagem. Este protocolo pode ser adaptada para uma série de developmentally dependentes de redes...

Imagem de cálcio funcional em desenvolvimento de redes Cortical

Transporte retrógrado de corante fluorescente rotula uma sub-população de neurónios baseado em projecção anatómica. Axônios rotulados pode ser alvo...

Labeling fluorescentes retrógrada Permite alvejado Extracelular Gravação Single-unidade dos neurônios identificados<em&gt; In vivo</em

Com o seu pequeno corpo transparente, neuroanatomia bem documentado e uma série de técnicas genéticas passíveis e...

Na imagem cálcio vivo Neuronal em C. elegans

Neste artigo, apresentamos rápido micro-iontoforese de neurotransmissores como uma técnica para investigar a integração de sinais de pós-sinápticos com alta precisão espacial e temporal.

Rápido Micro-iontoforese de glutamato e GABA: uma ferramenta útil para investigar Integração Synaptic

Aprenda imagem de cálcio GCaMP in vivo em neurônios do gânglio trigêmeo intacto em camundongos anestesiados. Este método permite visualizar mais de 3.000 neurônios simultaneamente para estudar respostas sensoriais à dor, coceira e tato em tempo real.

In vivo Imagem de cálcio de conjuntos neuronais em redes de neurônios sensoriais primários em gânglios trigêmeos intactos

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