Name: Escolha e No-Choice ensaios para testar a resistência de A. thaliana para Insetos Chewing (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: Aprenda a configurar ensaios de escolha e sem escolha para avaliar a resistência de Arabidopsis thaliana contra a praga Pieris rapae. Este método investiga o papel do ácido jasmônico e glucosinolatos na defesa vegetal.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nenhum experimento Choice: <ol><li> Cuidadosamente coloque a planta Arabidopsis de interesse em um copo de plástico. Neste caso: Col-0 (WT) e um mutante deficiente na produção de JA. Certifique-se de limitar os danos às folhas. Por que eu uso no verso deste pincel. </li><li> Use um pincel fino para tomar um larvas recém-eclodidas da colônia em repolho. </li><li> Cuidadosamente coloque a larva nas plantas de Arabidopsis. </li><li> Larva de peso no dia 4, 7, 10. DICA: Grow suas plantas em condições de dias curtos (8 horas de luz) para aumentar o crescimento vegetativo (1 larva possa cumprir o seu ciclo de vida completo de uma planta). </li></ol> Experimento de escolha: <ol><li> Duas plantas são selecionadas, uma de cada genótipo. Melhor é fazer crescer plantas na mesma panela, para limitar a outros fatores, como efeitos de bandeja, etc </li><li> Colocar as plantas em uma gaiola de borboletas. </li><li> Selecione uma fêmea fértil. Eu costumo pegar uma fêmea que está ativamente ovos na colônia de criação. </li><li> Solte a fêmea na gaiola com a escolha de duas unidades de 24 hrs. </li></ol> DICA 1: Para eliminar um efeito de aprendizagem, não reutilize fêmeas para testes de escolha subsequente. DICA 2: Só se pode comparar plantas que têm um fenótipo de crescimento similar. Alternativamente, você poderia montar uma folha de cada genótipo em cima de um Erlenmeyer e comparar o seu interesse para uma fêmea. Visite <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">Comentários Anual de Biologia Vegetal</a> para obter mais informações sobre esta imunidade protocolo e planta à herbivoria de insetos.

escolha e no-choice ensaios para testar a resistência de a. thaliana para insetos chewing

Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects

Larvas da borboleta de repolho branco pequeno são uma praga em ambientes agrícolas. Esta espécie de lagarta se alimenta de plantas da família do repolho, que incluem muitas culturas, tais como repolho, brócolis, couve de Bruxelas, etc Criação dos insetos ocorre em plantas de couve na estufa. Pelo menos, duas gaiolas são necessários para a criação de Pieris rapae. Um para as larvas e os outros para conter os adultos, as borboletas. A fim de investigar o papel dos hormônios vegetais e produtos químicos de plantas tóxicas na resistência a esta praga de insectos, demonstramos dois experimentos. Primeiro, a determinação do papel do ácido jasmônico (JA - um hormônio vegetal, muitas vezes indicada na resistência a insetos) na resistência à mastigação de insetos Pieris rapae. Caterpillar crescimento pode ser comparado em plantas do tipo selvagem e mutante deficiente na produção de JA. Este experimento é considerado &quot;Escolha Não&quot;, porque as larvas são obrigados a subsistir com uma única planta que sintetiza ou é deficiente em JA. Segundo, nós demonstramos um experimento que investiga o papel de glicosinolatos, que são usados ​​como oviposição (postura) sinais. Aqui, usamos Arabidopsis WT e mutante deficiente na produção de glucosinolatos em uma &quot;escolha&quot; experimento no qual borboletas fêmeas podem escolher para colocar seus ovos em plantas de qualquer genótipo. Este vídeo demonstra a configuração experimental para ambos os ensaios, bem como resultados representativos.

Resistência de plantas a insetos herbívoros de mascar pode ser testado de várias maneiras. Aqui, demonstramos como set-up uma escolha e um experimento sem chance de escolha com a planta modelo Arabidopsis thaliana para identificar a resistência contra a praga Pieris rapae espécies.

Escolha e No-Choice ensaios para testar a resistência de A. thaliana para Insetos Chewing

As larvas da borboleta branca da couve são pragas em contextos agrícolas. Esta espécie de lagarta alimenta-se de plantas da família das brássicas, as quais...

As larvas da traça-branca-da-couve são uma praga em ambientes agrícolas. Esta espécie de lagarta se alimenta de plantas da família da couve, que incluem diversas culturas como repolho, brócolis e couve-de-bruxelas, entre outras. Curiosamente, as plantas podem evoluir resistência ao ataque de herbívoros, como nesse caso, e neste vídeo testaremos a resistência da espécie vegetal modelo *Arabidopsis thaliana* a esse inseto mastigador de tecidos, utilizando dois métodos.Olá, sou Martin Navos, pesquisador pós-doutorando no laboratório de George Jander no Bo Thompson Institute for Planned Research. Hoje gostaria de mostrar como montar um experimento de escolha e sem escolha com Arabidopsis thaliana como planta modelo, pesquisando a resistência contra herbívoros praguistas.A criação das lagartas ocorre em plantas de repolho no viveiro. São necessárias pelo menos duas gaiolas para a criação de Peter. Uma é utilizada para as larvas, e a outra contém os adultos, as borboletas, com o objetivo de demonstrar o envolvimento dos hormônios vegetais e dos produtos químicos tóxicos das plantas.Na resistência a este teste com insetos, gostaria de demonstrar dois experimentos. O primeiro envolverá a determinação do papel do ácido jasmônico, um hormônio vegetal frequentemente associado à resistência contra insetos.Em um experimento sem escolha, o crescimento de lagartas pode ser comparado em plantas do tipo selvagem e em plantas mutantes com produção prejudicada apenas do ácido mon. A hipótese seria que as larvas ganham mais peso na planta mutante. Então, vamos começar com o primeiro experimento.Então, vamos realizar um experimento sem escolha com as plantas, um Revit opsis elliana, para medir o ganho de peso das larvas de purest rapha. Primeiro, precisamos cercar cuidadosamente essas plantas. Em um desses copos, cortamos o fundo deste copo plástico.Então, para fechar, utilizo a extremidade traseira desta pincel fino. Sem danificar as folhas, vamos fechar estas plantas. Assim, temos um experimento de escolha nula aqui entre os coelhos opss, o tipo selvagem e a planta mutante.O mutante é um mutante com deficiência em ácido jasmônico e, provavelmente, mais suscetível à alimentação. Este é um experimento sem escolha, porque uma larva só pode se alimentar de um único genótipo de planta. Portanto, vamos adicionar uma larva a cada copo.É importante começar com larvas que tenham acabado de eclodir. Essas são chamadas larvas L1. Aqui está uma que acabou de eclodir.Certo, então vou colocar cuidadosamente esta larva na faixa de teste. O próximo passo é envolver essas plantas com sua única larva, e uso uma malha fina e uma faixa oleosa para fechá-las, para que as larvas não consigam sair rastejando. Em seguida, aguardamos alguns dias, geralmente sete dias, antes de medir o ganho de peso da larva.Após sete dias de alimentação, retiramos as larvas e as pesamos nesta balança, utilizando pinças flexíveis para pegar cuidadosamente as larvas e registrar seu peso. Este indivíduo pesa quase 250 miligramas. Vou comparar o peso desta lagarta, que estava na planta mutante, com o peso da lagarta que estava na planta do tipo selvagem.Como você pode ver imediatamente, há muito mais tecido vegetal restante na planta do tipo selvagem. Portanto, assumimos que a larva ganhou menos peso. A larva na planta do tipo selvagem pesa apenas cerca de cem miligramas.Portanto, há uma grande diferença tanto na quantidade de tecido consumido quanto no ganho de peso das larvas. Assim, concluímos o experimento sem escolha. Vamos passar para o experimento com escolha, não é mesmo?Pragas especialistas identificam e são atraídas por sinais do hospedeiro que são tóxicos para inimigos generalistas. No caso de pi, glucosinolatos rápidos são utilizados como um sinal de etileno de sobreposição. Aqui, utilizarei tipos selvagens e mutantes de rabbit opsis com produção de glucosinolato prejudicada.Para demonstrar um experimento de escolha, antes de iniciar este experimento, é necessário ser capaz de distinguir borboletas macho e fêmea. Veja um exemplo: fêmeas da borboleta bureaus rapid possuem dois pontos em cada asa, enquanto os machos têm apenas um; às vezes, os machos podem ser confundidos com fêmeas se apresentarem uma segunda marca, geralmente tênue. Então, vamos montar o experimento de escolha.Neste caso, temos tanto a planta do tipo selvagem quanto uma planta mutante. A planta mutante apresenta um defeito na produção de glucosinolatos. Novamente, os glucosinolatos são tóxicos para herbívoros generalistas, mas especialistas como esta traça com a qual estamos trabalhando são atraídos pelos glucosinolatos.Assim, essas são as cinco fases larvais da lagarta do bico-de-papagaio, começando com o menor L, a primeira fase larval, ganhando peso até a quinta fase larval que encontrarão. Em seguida, transforma-se em pupa e ocorre a transformação completa, resultando nessas larvas em borboletas adultas. Para este experimento de escolha, estamos utilizando esta gaiola onde coloquei tanto a planta selvagem quanto a planta mutante, e agora vou adicionar uma borboleta fêmea a ela.Para avaliar o açaí, normalmente capturo fêmeas férteis. Para garantir que estejam férteis, pego fêmeas que estão ativamente botando ovos, coloco cuidadosamente a mão ao redor delas e as transfiro para a gaiola de teste. Deixamos a borboleta por 24 horas e, em seguida, contamos o número de ovos postos em cada um desses genótipos.Algumas dicas úteis ao realizar esse tipo de experimento são: primeiro, quando você selecionar uma fêmea de borboleta, não a utilize em experimentos subsequentes, pois pode haver um efeito de aprendizado. Em segundo lugar, só é possível comparar plantas que tenham fenótipos de crescimento semelhantes. Assim, se você tiver plantas com fenótipos de crescimento diferentes, pode usar folhas de tamanho semelhante e montá-las sobre um frasco LMI.Então, após 24 horas, podemos retirar primeiro as plantas. A planta do tipo selvagem, como você pode ver, possui muitos ovos, e a planta mutante, o mutante que não possui glucosinolatos. Assim, ela não possui um estímulo de oviposição ou acaí.Como você pode ver, há quase nenhum ovo ou muito poucos, pelo menos no mutante. Enquanto há muitos ovos na planta selvagem. Então, acabei de mostrar como montar experimentos para determinar a resistência contra insetos.O primeiro experimento foi um teste sem escolha. Experimentos nos quais comparamos o ganho de peso larval em plantas mutantes versus plantas do tipo selvagem. O segundo experimento, um experimento com escolha.Comparamos a aclagem por uma borboleta fêmea também em uma planta mutante versus uma planta do tipo selvagem. Muito obrigado. É isso.Espero que seja útil para seus experimentos.

choice-no-choice-assays-for-testing-resistance-thaliana-to-chewing

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Neste vídeo e ensaio é demonstrar que testa a tolerância de nicotina para dois tipos de pulgões que infestam plantas de tabaco no campo e uma que não.

Teste de tolerância à nicotina em Aphids Usando uma experiência Dieta Artificial

Este vídeo explica os mecanismos de resistência da planta hospedeira à herbivoria e demonstra um teste sem chance de escolha que as estimativas da contribuição relativa de antibiose e tolerância a cigarrinha resistência...

Mecanismos Herbívoro caracterizando Resistance: Spittlebugs em Brachiaria Spp. como Exemplo

Este vídeo descreve o ensaio de preferência de sabor, um método comportamental usado para medir a atração ou evitação por soluções coloridas com sabor diferente, avaliando a coloração abdominal da mosca após a ingestão da substância preferida. O protocolo apresentado demonstra o procedimento usado para medir a preferência das moscas por soluções de concentrações variadas de sacarose.

Ensaio de Preferência de Sabor: Um Método para Medir o Comportamento Alimentar em Drosophila

A vertical, olfatômetro labirinto em T é descrito para o ensaio da resposta comportamental de artrópodes. O olfactómetro permite que o experimentador para medir escolhas realizadas por indivíduos de teste quando submetidos a dois campos de odor potencial. Ambos atração e repulsão de odores pode ser medida com este dispositivo.

Ensaio Escolha Vertical labirinto em T para a resposta de Artrópodes para odores

O paladar é um processo sensorial importante que facilita a atração por substâncias benéficas e evita substâncias tóxicas.  Este protocolo descreve um ensaio de ingestão simples para determinar a preferência gustativa de Drosophila por um determinado composto químico.

Ensaio de Preferência gosto para Adulto<em&gt; Drosophila</em

Aqui, apresentamos um ensaio específico de Caenorhabditis elegans projetado para avaliar mudanças no comportamento de aversão ao cobre e a capacidade de localizar uma fonte de alimento comum, à medida que o organismo progride de um estado nutricional bem alimentado para morrer de fome.

UMA<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Ensaio de Aversão ao Cobre Baseado em Status Nutricional

Apresentamos uma configuração e protocolo de gravação de comportamento que permitem análise automatizada do nematóide, preferência de Caenorhabditis elegans por compostos solúveis em um ensaio populacional. Este artigo descreve a construção de uma câmara de comportamento, o protocolo de ensaio comportamental e o uso de software de análise de vídeo.

Análise automatizada de um ensaio de preferência quimiossensorial baseado na população de um nematodo

Aqui, apresentamos um protocolo para investigar a preferência de pupa de larvas maduras de Ectropis grisescens em resposta a fatores de solo (por exemplo, conteúdo de tipo e umidade do substrato) utilizando bioensaios de escolha. Apresentamos também um protocolo de não-escolha de bioensaios para determinar os fatores que afetam os comportamentos de pupa e sobrevivência de E. grisescens.

Escolha e bioensaios não-escolha para estudar a preferência de pupa e sucesso de surgimento de Ectropis grisescens

O método apresentado cria tecido vegetal danificado herbívoro natural através da aplicação de larvas de Manduca sexta a folhas destacadas de batata. O tecido vegetal é analisado para a expressão de seis homólogos do fator de transcrição envolvidos em respostas adiantadas ao herbivory do inseto.

Ensaios foliares destacados para simplificar estudos de expressão gênica em batata durante a infestação por mastigação de insetos Manduca sexta

Apresentamos um protocolo para um ensaio de alimentação de duas opções para moscas. Este ensaio de alimentação é rápido e fácil de executar e é adequado não apenas para pesquisas de laboratório de pequena escala, mas também para telas comportamentais de alto rendimento em moscas.

Um ensaio rápido de preferência alimentar em Drosophila

Este protocolo descreve o ensaio alimentar obrigatório para avaliar o efeito potencialmente tóxico de um fitoquímico sobre as larvas de insetos lepidópteros. Este é um bioensaio de insetos altamente escalável, fácil de otimizar a dose subletal e letal, atividade dissuasora e efeito fisiológico. Isso poderia ser usado para a triagem de inseticidas ecológicos.

Desenvolvimento de um Sistema de Ensaio Alimentar para Avaliação do Efeito Inseticida de Fitoquímicos sobre Helicoverpa armigera

Aprenda a configurar ensaios de escolha e sem escolha para avaliar a resistência de Arabidopsis thaliana contra a praga Pieris rapae. Este método investiga o papel do ácido jasmônico e glucosinolatos na defesa vegetal.

Escolha e No-Choice ensaios para testar a resistência de A. thaliana para Insetos Chewing

Explorar mais vídeos