Name: Isolamento e Avaliação por Citometria de Fluxo de Interações Neuroimunes em Modelo Murino Mini-AVC (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Aprenda a isolar e avaliar interações neuroimunes por citometria de fluxo em modelo murino de mini-AVC. Este método permite examinar respostas imunes pós-AVC e pode ser adaptado para doenças neurodegenerativas.

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<ol><li>Kleindorfer, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2021+Guideline+for+the+prevention+of+stroke+in+patients+with+stroke+and+transient+ischemic+attack%3A+A+guideline+from+the+American+heart+association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">2021 Guideline for the prevention of stroke in patients with stroke and transient ischemic attack: A guideline from the American heart association/American Stroke Association.</a> Stroke. 52 (7), e364-e467 (2021).</li>
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<li>Ma, Y., Yang, S., He, Q., Zhang, D., Chang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+immune+cells+in+post-stroke+angiogenesis+and+neuronal+remodeling%3A+The+known+and+the+unknown%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of immune cells in post-stroke angiogenesis and neuronal remodeling: The known and the unknown.</a> Front Immunol. 12, 784098(2021).</li>
<li>Duan, M., Xu, Y., Li, Y., Feng, H., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+brain-peripheral+immune+responses+for+secondary+brain+injury+after+ischemic+and+hemorrhagic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Targeting brain-peripheral immune responses for secondary brain injury after ischemic and hemorrhagic stroke.</a> J Neuroinflammation. 21 (1), 102(2024).</li>
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<li>Zhang, Z., Lv, M., Zhou, X., Cui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+peripheral+immune+cells+in+the+recovery+of+neurological+function+after+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Roles of peripheral immune cells in the recovery of neurological function after ischemic stroke.</a> Front Cell Neurosci. 16, 1013905(2022).</li>
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<li>Cardona, A. E., Huang, D., Sasse, M. E., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+murine+microglial+cells+for+RNA+analysis+or+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry.</a> Nat Protoc. 1 (4), 1947-1951 (2006).</li>
<li>De Haas, A. H., Boddeke, H. W., Biber, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Region-specific+expression+of+immunoregulatory+proteins+on+microglia+in+the+healthy+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Region-specific expression of immunoregulatory proteins on microglia in the healthy CNS.</a> Glia. 56 (8), 888-894 (2008).</li>
<li>Mcdonough, A., Weinstein, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroimmune+response+in+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Neuroimmune response in ischemic preconditioning.</a> Neurotherapeutics. 13 (4), 748-761 (2016).</li>
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<li>Maecker, H. T., Trotter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+controls%2C+instrument+setup%2C+and+the+determination+of+positivity%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry controls, instrument setup, and the determination of positivity.</a> Cytometry. 69A, 1037-1042 (2006).</li>
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<li>Sousa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptomics+reveals+distinct+inflammation-induced+microglia+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptomics reveals distinct inflammation-induced microglia signatures.</a> EMBO Rep. 19 (11), e46171(2018).</li>
<li>Martin, E., El-Behi, M., Fontaine, B., Delarasse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+microglia+and+monocyte-derived+macrophages+from+the+central+nervous+system+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Analysis of microglia and monocyte-derived macrophages from the central nervous system by flow cytometry.</a> J Vis Exp. 124, e55781(2017).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia-associated+neuroinflammation+is+a+potential+therapeutic+target+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia-associated neuroinflammation is a potential therapeutic target for ischemic stroke.</a> Neural Regen Res. 16 (1), 6-11 (2021).</li>
<li>Mao, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+polarization+in+ischemic+stroke%3A+Complex+mechanisms+and+therapeutic+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+Med+J+%28Engl%29%22%5BJournal%5D)">Microglia polarization in ischemic stroke: Complex mechanisms and therapeutic interventions.</a> Chin Med J (Engl). 134 (20), 2415-2417 (2021).</li>
<li>Shui, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+ischemic+stroke%3A+Pathogenesis+insights+and+therapeutic+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inflamm+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia in ischemic stroke: Pathogenesis insights and therapeutic challenges.</a> J Inflamm Res. 17, 3335-3352 (2024).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infiltration+and+persistence+of+lymphocytes+during+late-stage+cerebral+ischemia+in+middle+cerebral+artery+occlusion+and+photothrombotic+stroke+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Infiltration and persistence of lymphocytes during late-stage cerebral ischemia in middle cerebral artery occlusion and photothrombotic stroke models.</a> J Neuroinflammation. 14 (1), 248(2017).</li>
<li>Schulze, J., Gellrich, J., Kirsch, M., Dressel, A., Vogelgesang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system-infiltrating+t+lymphocytes+in+stroke+are+activated+via+their+TCR+%28T-cell+receptor%29+but+lack+CD25+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Central nervous system-infiltrating t lymphocytes in stroke are activated via their TCR (T-cell receptor) but lack CD25 expression.</a> Stroke. 52 (9), 2939-2947 (2021).</li>
<li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).</li>
<li>Leelatian, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+of+human+tissues+and+solid+tumors+with+mass+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis of human tissues and solid tumors with mass cytometry.</a> Cytometry B Clin Cytom. 92 (1), 68-78 (2017).</li>
<li>Delmonte, O. M., Fleisher, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry%3A+Surface+markers+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry: Surface markers and beyond.</a> J Allergy Clin Immunol. 143 (2), 528-537 (2019).</li>
<li>Schmit, T., Klomp, M., Khan, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+flow+cytometry+for+simultaneous+and+multi-parametric+analysis+of+heterogenous+cell+populations+in+basic+and+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The application of flow cytometry for simultaneous and multi-parametric analysis of heterogenous cell populations in basic and clinical research.</a> Methods Mol Biol. 2223, 183-200 (2021).</li>
<li>Dukhinova, M., Kopeikina, E., Ponomarev, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Usage+of+multiparameter+flow+cytometry+to+study+microglia+and+macrophage+heterogeneity+in+the+central+nervous+system+during+neuroinflammation+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Usage of multiparameter flow cytometry to study microglia and macrophage heterogeneity in the central nervous system during neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Methods Mol Biol. 1745, 167-177 (2018).</li>
<li>Rui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+gasdermin+d+drives+early-stage+T-cell+immunity+and+peripheral+inflammation+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Myeloid gasdermin d drives early-stage T-cell immunity and peripheral inflammation in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Neuroinflammation. 21 (1), 266(2024).</li>
<li>Rauber, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+identifies+changes+in+peripheral+and+intrathecal+lymphocyte+patterns+in+CNS+autoimmune+disorders+and+primary+CNS+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry identifies changes in peripheral and intrathecal lymphocyte patterns in CNS autoimmune disorders and primary CNS malignancies.</a> J Neuroinflammation. 21 (1), 286(2024).</li>
<li>Rayaprolu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-cytometric+microglial+sorting+coupled+with+quantitative+proteomics+identifies+moesin+as+a+highly-abundant+microglial+protein+with+relevance+to+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Flow-cytometric microglial sorting coupled with quantitative proteomics identifies moesin as a highly-abundant microglial protein with relevance to Alzheimer's disease.</a> Mol Neurodegener. 15 (1), 28(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubo de microcentrífuga de 1,5 mL</td><td>NEST&nbsp;</td><td>615601</td><td>Material de laboratório</td></tr><tr><td>1 e vezes; PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CM</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Microplaca tratada com TC de fundo redondo transparente de 96 poços</td><td>Corning</td><td>3799</td><td>Material de laboratório</td></tr><tr><td>APC anti-rato CD19</td><td>Biolenda</td><td>152410</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-rato CD45</td><td>Biolenda</td><td>103116</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>Avertin (1,25%)</td><td>Nanjing Aibei Biotechnology&nbsp;</td><td>M2920</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>BD FACSAria II</td><td>BD</td><td>642510</td><td>Equipamento</td></tr><tr><td>Violeta brilhante 421 anti-rato CD4</td><td>Biolenda</td><td>100437</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>Violeta brilhante 605 anti-camundongo / humano CD11b</td><td>Biolenda</td><td>101237</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1933-1G</td><td>Químico</td></tr><tr><td>Colagenase IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4-28-100MG</td><td>Enzima</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Biolabs da Nova Inglaterra</td><td>M0303L</td><td>Enzima</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>EDS-100G</td><td>Químico</td></tr><tr><td>Tubos de Ensaio de Poliestireno de Fundo Redondo Falcon 5 mL</td><td>Corning</td><td>352052</td><td>Material de laboratório</td></tr><tr><td>Falcão&nbsp; Tubos de centrífuga cônicos de 15 mL</td><td>Corning</td><td>352095</td><td>Material de laboratório</td></tr><tr><td>FlowJo V10</td><td>BD</td><td></td><td>Software</td></tr><tr><td>GLAST (ACSA-1) Anticorpo, PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-118-344</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD Ciências da Vida</td><td>R510-22-10</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7 anti-rato CD3</td><td>Biolenda</td><td>100220</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>PE/Dazzle 594 anti-mouse NK-1.1</td><td>Biolenda</td><td>156518</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>Reagente TRIzol</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>15596026</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Água destilada sem DNase/RNase ultrapura</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>10977015</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Adesivos de tecido Vetbond</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td>Material de laboratório</td></tr><tr><td>Kit de Viabilidade Fixável Zombie Aqua</td><td>Biolenda</td><td>423102</td><td>Corante fluorescente reativo à amina</td></tr></tbody></table>

isolamento e avaliação por citometria de fluxo de interações neuroimunes em modelo murino mini-avc

Isolation and Flow Cytometric Assessment of Neuroimmune Interactions in a Mini-Stroke Murine Model

Neste estudo, apresentamos um protocolo refinado para avaliar a funcionalidade das células imunes após AVC isquêmico, empregando análise de citometria de fluxo em um modelo de mini-AVC. O mini-AVC foi induzido pela ligadura permanente do ramo distal da artéria cerebral média direita (ACM), seguida por uma oclusão de 7 min das artérias carótidas comuns (ACCs) bilaterais. Essa metodologia produz um AVC leve caracterizado por volumes de lesões pequenos e consistentes e uma taxa de mortalidade notavelmente baixa. Além disso,...

Isolamento e Avaliação por Citometria de Fluxo de Interações Neuroimunes em Modelo Murino Mini-AVC

Stroke is a leading cause of death and long-term disability worldwide, with ischemic stroke representing the majority of cases. Following an ischemic ...

O escopo de nossa pesquisa se concentra na função das células imunes após o AVC isquêmico. Nosso objetivo é entender as leis das células imunes residentes e infiltrantes na patologia do AVC. Atualmente, a citometria de fluxo é amplamente utilizada para avaliar a função das células imunes e as interações nas neuroinflamações.Além disso, técnicas imunológicas e célula única e sequenciamento estão avançando na pesquisa em interações neuroimunes. Nosso laboratório se concentrará em ilustrar a rota dos astrócitos em interações neuroimunes, contribuições angiovasculares para processos neuroinflamatórios. Para começar, pegue uma seringa de 50 mililitros e prenda uma agulha de calibre 26 na extremidade.Encha a seringa completamente com solução salina. Posicione o mouse anestesiado em decúbito dorsal em uma placa de espuma. Estenda os membros anteriores e posteriores e prenda-os usando agulhas de calibre 26.Usando uma pinça de polegar serrilhada, segure a pele abdominal e faça uma incisão lateral para expor o fígado. Corte ao longo de ambos os lados das costelas para expor o coração. Agora insira a agulha de calibre 26 no ventrículo esquerdo e corte o oráculo direito.Pressione o êmbolo da seringa para permitir que o sangue escorra. Continue a perfusão até que o sangue drenado do oráculo pareça claro. Depois de decapitar o camundongo e extrair o cérebro, transfira-o para uma matriz cerebral de aço de camundongo e corte-o em fatias consecutivas de córnea de dois milímetros de espessura.Introduza 500 microlitros de mistura de enzimas de digestão em cada poço de uma placa de 12 poços. Usando uma micropinça, separe delicadamente o tecido do infarto e transfira-o para a mistura de enzimas de digestão. Por fim, fragmente o tecido com uma tesoura oftálmica nos menores pedaços possíveis e incube a placa a 37 graus Celsius por 20 minutos.Usando a pipeta AP 1000, aspire suavemente e dispense a solução 10 vezes para dissociar o tecido em células individuais. Em seguida, passe a solução por um filtro de células de 70 micrômetros. Enxágue repetidamente a placa de 12 poços e o filtro de células com HBSS gelado contendo cálcio e magnésio.Agora centrifugue a suspensão celular coletada a 500 G por cinco minutos a quatro graus Celsius. Rejeitar cuidadosamente o sobrenadante sem perturbar o sedimento. Ressuspenda o pellet em um mililitro de PBS.Depois de repetir o processo de centrifugação, ressuspender novamente o pellet em 150 microlitros de PBS e transferir a suspensão para uma placa inferior redonda de 96 poços. Centrifugue novamente a 500 G por cinco minutos a quatro graus Celsius. Após a centrifugação, segure firmemente a placa de 96 poços e inverta-a rapidamente para descartar o sobrenadante.Em seguida, dilua a matriz de fluorescência de viabilidade celular na proporção de um para cem em PBS e ressuspenda o pellet em 150 microlitros da solução de corante diluída. Incube por 10 minutos em temperatura ambiente, protegendo a placa da luz. Depois de centrifugar durante cinco minutos a quatro graus Celsius, rejeitar o sobrenadante.Dilua o coquetel de anticorpos da superfície celular na classificação de células ativadas por magnetismo ou tampão máximo e, sem lavar as células, adicione o coquetel de anticorpos aos poços. Incube por 15 a 20 minutos a quatro graus Celsius antes de centrifugar por mais cinco minutos. Depois de centrifugar a placa e descartar o sobrenadante, ressuspenda o pellet em 150 microlitros de tampão máximo.Transfira a suspensão para tubos de centrífuga de 1,5 mililitro ou tubos de ensaio de poliestireno de fundo redondo de cinco mililitros. Projete um painel de citometria de fluxo multicolorido de acordo com a configuração do instrumento usando métodos manuais ou uma ferramenta de design de painel online. Inclua um corante de viabilidade celular no painel para excluir células não viáveis e detritos dos dados.Ajuste as configurações do detector de dispersão frontal e lateral para garantir que as células de interesse sejam exibidas corretamente e possam ser fechadas corretamente. Ajuste os parâmetros FSC e SSC para eliminar detritos e ruídos estranhos. Em um gráfico de pontos mostrando a área do FSC versus a altura, distinga os dupletos das células individuais.Use o sinal negativo do corante de viabilidade para isolar as células viáveis. Compare o controle de autofluorescência de células não coradas com controles positivos de células coradas para confirmar se as células coradas estão dimensionadas corretamente para cada parâmetro. Ajuste a compensação analisando amostras de células multicoloridas e examinando gráficos de pontos de duas cores.Ajuste as configurações de compensação para cima ou para baixo até que as populações de células se alinhem vertical ou horizontalmente umas com as outras. Utilize sinais CD45 e CD11B para distinguir entre linfócitos, microglia, células mieloides e astrócitos com base em seus padrões de expressão específicos. Empregue tecido cerebral simulado como controle de autofluorescência para servir como referência para a identificação de linfócitos.Se estiver analisando um alvo específico, utilize um controle FMO com tecido cerebral pós-AVC. Colete os dados de controle e salve-os. Da mesma forma, colete os dados de amostra e salve-os.Selecione e classifique as populações de células-alvo em tubos de ensaio de poliestireno de fundo redondo de cinco mililitros ou tubos de centrífuga cônicos de 15 mililitros. Adicione 500 microlitros de PBS e enxágue o tubo de coleta para preservar a viabilidade celular e ajudar na formação de pellets. As microglias positivas para CCR7 e CD11c positivas foram quantificadas nos dias dois e sete após o AVC isquêmico.A expressão de CCR7 na microglia aumentou acentuadamente no segundo dia e permaneceu elevada no sétimo dia em comparação com os controles simulados. A microglia CD11c positiva seguiu uma tendência semelhante, atingindo o pico no segundo dia e permanecendo mais alta do que a simulada no sétimo dia. Os gráficos de pontos mostraram sinais densos de CCR7 e CD11c nos dias dois e sete.Contrastando com sinais esparsos em controles simulados. Uma estratégia de gating separou as células mielóides da microglia e os linfócitos usando a expressão de CD11B e CD45. Marcadores adicionais definiram células viáveis, astrócitos e subconjuntos de linfócitos.

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Research

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Neuroscience

Neurociência

Filamentosas de oclusão da artéria cerebral média é um modelo comum para o estudo de AVC isquêmico em ratos.

Curso de modelagem em Ratos - Oclusão da Artéria Cerebral Média com o modelo de Filamento

Vários modelos murinos de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) são amplamente utilizados em pesquisas sobre o cérebro experimental. Aqui, demonstramos o modelo de transcraniana permanente distal MCAO que produz enfarte cortical consistente de um tamanho correspondente ao dano imposto pela maioria dos acidentes vasculares cerebrais isquémicos humanos.

Curso de modelagem em Ratos: Coagulação permanente da artéria distal Cerebral Média

Cérebro células mielóides caracterização de acidente vascular cerebral pode ser realizada por estereologia usando o método de fraccionamento da óptica, ou por uma análise de citometria de fluxo de suspensões cérebro leucócitos. Ambos são técnicas úteis para realizar uma distinção fenotípica acurada dos principais subpopulações de células mielóides encontrados no cérebro isquêmico.

Estereológica e Citometria de Fluxo Caracterização de Leucócitos subpopulações em modelos de transitórias ou permanentes Cerebral Isquemia

Este protocolo descreve o pré-condicionamento hipóxico repetitivo ou breves exposições à hipóxia sistêmica que reduzem os volumes de infarto e a ruptura da barreira hematoencefálica após oclusão transitória da artéria cerebral média em camundongos. Ele também detalha a quantificação dupla do volume do infarto e da ruptura da barreira hematoencefálica após o AVC para avaliar a eficácia da proteção neurovascular.

Quantificação de Proteção Neurovascular sequência repetitiva Hypoxic Pré-condicionamento e Transient Oriente oclusão da artéria cerebral em ratos

Aqui apresentamos metodologia para a produção de um AVC focal na substância branca murina por injeção local de um inibidor irreversível da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) (L-Nio). São apresentadas duas variações estereotáxicas, traçado neuronal retrógrado e marcação e dissecção de tecidos frescos que expandem as aplicações potenciais dessa técnica.

A Stroke Versátil Modelo murino de Subcortical Branco Matéria para o Estudo da axonal Degeneration e branco Matéria Neurobiology

A inflamação desempenha um papel central na patogênese do AVC isquêmico. Evidências crescentes sugerem que ele atua como uma faca de dois gumes que exacerba a lesão cerebral precoce, mas também contribui para o reparo posterior. Este protocolo descreve o isolamento de células imunes do cérebro isquêmico e sua subsequente fenotipagem citométrica de fluxo.

Isolamento e análise de citometria de fluxo de células imunes do cérebro isquêmico Rato

A fim de compreender a patofisiologia de acidente vascular cerebral, é importante o uso de modelos fiáveis. Este documento descreve um dos modelos de AVC mais utilizados em camundongos, denominado o meio modelo de oclusão da artéria cerebral (MCAo) (também denominado o filamento intraluminal ou modelo de sutura) com a reperfusão.

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

Este protocolo descreve o uso de citometria de fluxo para identificar as alterações na composição das células imunes, perfil de citocina e perfil de quimiocina no ambiente pulmonar após a oclusão da artéria cerebral média transitória, um modelo murino de derrame isquêmico.

Caracterização de Células Imunes e Mediadores Proinflamatórios no Ambiente Pulmonar

Diferentes modelos de oclusão da artéria cerebral média (MCAo) são usados em pesquisas experimentais de derrame. Aqui, é descrito um modelo experimental de AVC de MCAo transitório através da artéria carótida externa (ECA), que visa imitar o AVC humano, no qual o trombo cerebrovascular é removido devido à lise espontânea de coágulo ou terapia.

Modelagem de AVC em Camundongos: Oclusão da Artéria Cerebral Média Transitória através da Artéria Carótida Externa

Para investigar a resposta imune a distúrbios cerebrais, uma abordagem comum é analisar as mudanças nas células imunológicas. Aqui, dois protocolos simples e eficazes são fornecidos para isolar células imunes do tecido cerebral murino e da medula óssea do crânio.

Isolando células imunes do cérebro e crânio de camundongos

Aprenda a isolar e avaliar interações neuroimunes por citometria de fluxo em modelo murino de mini-AVC. Este método permite examinar respostas imunes pós-AVC e pode ser adaptado para doenças neurodegenerativas.

Isolamento e Avaliação por Citometria de Fluxo de Interações Neuroimunes em Modelo Murino Mini-AVC

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