Name: Análise 3D Simultânea de Dano Cardíaco e Resposta Imune em Infarto Agudo do Miocárdio Reperfundido Usando Microscopia de Fluorescência de Folha de Luz (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Aprenda a analisar simultaneamente danos cardíacos e resposta imune em infarto agudo do miocárdio reperfundido usando microscopia de fluorescência de folha de luz em modelo murino.

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<ol><li>Whelan, R. S., Kaplinskiy, V., Kitsis, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+in+the+pathogenesis+of+heart+disease%3A+mechanisms+and+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cell death in the pathogenesis of heart disease: mechanisms and significance.</a> Annu Rev Physiol. 72, 19-44 (2010).</li>
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<li>Totzeck, M., Hendgen-Cotta, U. B., French, B. A., Rassaf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+remote+ischemic+preconditioning+and+ischemic+preconditioning+against+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Methods%22%5BJournal%5D)">A practical approach to remote ischemic preconditioning and ischemic preconditioning against myocardial ischemia/reperfusion injury.</a> J Biol Methods. 3 (4), e57(2016).</li>
<li>Michel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+pressure-volume+analysis+of+acute+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Real-time pressure-volume analysis of acute myocardial infarction in mice.</a> J Vis Exp. (137), e57621(2018).</li>
<li>Ojha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+structural+and+functional+changes+in+the+myocardium+following+focal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the structural and functional changes in the myocardium following focal ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 294 (6), H2435-H2443 (2008).</li>
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<li>Coolen, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+T1+mapping+of+the+mouse+heart+using+variable+flip+angle+steady-state+MR+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional T1 mapping of the mouse heart using variable flip angle steady-state MR imaging.</a> NMR Biomed. 24 (2), 154-162 (2011).</li>
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<li>Becker, K., Jahrling, N., Kramer, E. R., Schnorrer, F., Dodt, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultramicroscopy%3A+3D+reconstruction+of+large+microscopical+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Ultramicroscopy: 3D reconstruction of large microscopical specimens.</a> J Biophotonics. 1 (1), 36-42 (2008).</li>
<li>Ke, M. T., Fujimoto, S., Imai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SeeDB%3A+a+simple+and+morphology-preserving+optical+clearing+agent+for+neuronal+circuit+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">SeeDB: a simple and morphology-preserving optical clearing agent for neuronal circuit reconstruction.</a> Nat Neurosci. 16 (8), 1154-1161 (2013).</li>
<li>Rajendran, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+peripheral+neural+circuits+that+regulate+heart+rate+using+optogenetic+and+viral+vector+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Identification of peripheral neural circuits that regulate heart rate using optogenetic and viral vector strategies.</a> Nat Commun. 10 (1), 1944(2019).</li>
<li>Mann, L., Klingberg, A., Gunzer, M., Hasenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+visualization+of+leukocyte+infiltrate+in+a+murine+model+of+fulminant+myocarditis+by+light+sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantitative visualization of leukocyte infiltrate in a murine model of fulminant myocarditis by light sheet microscopy.</a> J Vis Exp. (123), e55450(2017).</li>
<li>Taki, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((14C-Methionine+uptake+as+a+potential+marker+of+inflammatory+processes+after+myocardial+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">14C-Methionine uptake as a potential marker of inflammatory processes after myocardial ischemia and reperfusion.</a> J Nucl Med. 54 (3), 431-436 (2013).</li>
<li>Michel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD1+deficiency+modifies+cardiac+immunity+during+baseline+conditions+and+in+reperfused+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">PD1 deficiency modifies cardiac immunity during baseline conditions and in reperfused acute myocardial infarction.</a> Int J Mol Sci. 23 (14), 7533(2022).</li>
<li>Park, K. C., Gaze, D. C., Collinson, P. O., Marber, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+troponins%3A+from+myocardial+infarction+to+chronic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac troponins: from myocardial infarction to chronic disease.</a> Cardiovasc Res. 113 (14), 1708-1718 (2017).</li>
<li>Whittington, N. C., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+red+blood+cell+autofluorescence+for+immunocytochemistry+on+fixed+embryonic+mouse+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Suppression of red blood cell autofluorescence for immunocytochemistry on fixed embryonic mouse tissue.</a> Curr Protoc Neurosci. 81 (2), 28.21-28.28 (2017).</li>
<li>Klingberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+evaluation+of+total+glomerular+number+and+capillary+tuft+size+in+nephritic+kidneys+using+light+sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Fully automated evaluation of total glomerular number and capillary tuft size in nephritic kidneys using light sheet microscopy.</a> J Am Soc Nephrol. 28 (2), 452-459 (2017).</li>
<li>Weiss, K. R., Voigt, F. F., Shepherd, D. P., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tutorial%3A+practical+considerations+for+tissue+clearing+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Tutorial: practical considerations for tissue clearing and imaging.</a> Nat Protoc. 16 (6), 2732-2748 (2021).</li>
<li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+imaging+with+single-cell+resolution+using+chemical+cocktails+and+computational+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.</a> Cell. 157 (3), 726-739 (2014).</li>
<li>Erturk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nat Protoc. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li>
<li>Merz, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+three-dimensional+imaging+for+precise+staging+in+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">High-resolution three-dimensional imaging for precise staging in melanoma.</a> Eur J Cancer. 159, 182-193 (2021).</li>
<li>Hofmann, J., Gadjalova, I., Mishra, R., Ruland, J., Keppler, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+tissue+clearing+and+multi-organ+volumetric+imaging+enable+quantitative+visualization+of+sparse+immune+cell+populations+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Efficient tissue clearing and multi-organ volumetric imaging enable quantitative visualization of sparse immune cell populations during inflammation.</a> Front Immunol. 11, 599495(2020).</li>
<li>Pichardo, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+tissue+clearing+to+study+the+intra-pulmonary+biodistribution+of+intravenously+delivered+mesenchymal+stromal+cells+and+their+interactions+with+host+lung+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optical tissue clearing to study the intra-pulmonary biodistribution of intravenously delivered mesenchymal stromal cells and their interactions with host lung cells.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 14171(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agulha de 27 g</td><td>Becton Dickinson</td><td>305889</td><td>BD Eclipse</td></tr><tr><td>Processamento de imagem 3D e software de análise</td><td>Plano de bits</td><td>Vers. 10.1.0</td><td>Imaris</td></tr><tr><td>Sutura 5-0</td><td>Serag-Wiessner</td><td>IC108000</td><td>Seda</td></tr><tr><td>6-0 sutura</td><td>Ética</td><td>EH7814</td><td>Prolene</td></tr><tr><td>Kit de rotulagem de anticorpos AlexaFluor 546</td><td>Invitrogen</td><td>A20183</td><td></td></tr><tr><td>Kit de rotulagem de anticorpos AlexaFluor 790</td><td>Invitrogen</td><td>A20189</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo Ly6G anti-camundongo (AlexaFluor 647)</td><td>Biolenda</td><td>127610</td><td>Clone: 1A8</td></tr><tr><td>Filtro de células (100 &micro; m)</td><td>Corning</td><td>431752</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Carl Roth</td><td>7029.1</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Carl Roth</td><td>0911.4</td><td></td></tr><tr><td>Cinemato de etilo (ECi)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>112372</td><td></td></tr><tr><td>Software conversor de arquivos</td><td>Plano de bits</td><td>Vers. 10.1.0</td><td>Imaris</td></tr><tr><td>Gaze</td><td>Fuhrmann</td><td>10021</td><td></td></tr><tr><td>Goma gelana em pó</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Pág. 8169</td><td>Fitagel</td></tr><tr><td>Heparina (25.000 IE/5 mL)</td><td>LEO Pharma</td><td>15261203</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrogênio (H2O2, 30%)</td><td>Carl Roth</td><td>8070.2</td><td></td></tr><tr><td>Seringa para injeção</td><td>B Braun</td><td>Rolamento 9161502S</td><td>Omnican F</td></tr><tr><td>Cetamina (100 mg/mL)</td><td>Bela-Pharma</td><td>402581.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de microscópio de folha de luz</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>-</td><td>UltraMicroscope Blaze</td></tr><tr><td>Seringa Luer lock</td><td>Becton Dickinson</td><td>303172</td><td>BD Plastipak</td></tr><tr><td>Agitador magnético</td><td>VWR</td><td>444-0572</td><td></td></tr><tr><td>Câmera Neo sCMOS (4.2 MP)</td><td>Tecnologia Andor</td><td>ZL41 Célula 4.2</td><td></td></tr><tr><td>Objetivo</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-133-625</td><td>Plano MI 1,1x NA 0,1, WD 17,6 mm</td></tr><tr><td>Paraformaldeído (PFA, 4%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.00496</td><td>10% de formalina, tamponado neutro</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Greiner Bio-One</td><td>632181</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>Sem MgCl2/CaCl2</td></tr><tr><td>Tubo de polipropileno (15 mL)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188261</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de polipropileno (5 mL)</td><td>Carl Roth</td><td>EKY9.1</td><td>Preto</td></tr><tr><td>Tubo de polipropileno (50 mL)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Prato de preparação para canulação de coração de camundongo</td><td>Hugo Sachs Elektronik</td><td>73-4327</td><td>Cânula incluída</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-camundongo CD31 purificado</td><td>Becton Dickinson</td><td>53369</td><td>Clone: MEC13.3</td></tr><tr><td>Bomba de rolos</td><td>Ismatec</td><td>ISM597-230</td><td></td></tr><tr><td>Filme de vedação</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td>Parafilme</td></tr><tr><td>Microscópio estéreo</td><td>Leica</td><td>S6D</td><td></td></tr><tr><td>Rotador de tubo</td><td>Heidolph</td><td>Polymax 1040</td><td></td></tr><tr><td>Laser de luz branca</td><td>Fotônica NKT</td><td>SuperK extremo</td><td>200 mW, 480-ndash; 2400 nanômetro</td></tr><tr><td>WT cepa de camundongo</td><td>Laboratórios Janvier</td><td>-</td><td>C57BL/6JRj</td></tr><tr><td>Xilazina (2%)</td><td>Ceva Tiergesundheit</td><td>6324464.00.00</td><td></td></tr></tbody></table>

análise 3d simultânea de dano cardíaco e resposta imune em infarto agudo do miocárdio reperfundido usando microscopia de fluorescência de folha de luz

Simultaneous 3D Analysis of Cardiac Damage and Immune Response in Reperfused Acute Myocardial Infarction Using Light Sheet Fluorescence Microscopy

A abordagem apresentada usando microscopia de fluorescência de folha de luz (LSFM) permite a análise simultânea de AAR, lesão endotelial e infiltração de neutrófilos após repAMI. A Figura 1A ilustra a coloração intravital e ex vivo de camundongos C57BL / 6J 24 h após a indução de repAMI. Anticorpos para coloração de lesão endotelial cardíaca (anti-CD31 marcado com AlexaFluor 790) e infiltração de neutrófilos (anti-Ly6G marcado com AlexaFluor 647) foram injetados por via intravenosa ...

Análise 3D Simultânea de Dano Cardíaco e Resposta Imune em Infarto Agudo do Miocárdio Reperfundido Usando Microscopia de Fluorescência de Folha de Luz

Complex cellular interactions determine functional and structural tissue remodeling during reperfused acute myocardial infarction (repAMI). These ...

simultaneous-3d-analysis-cardiac-damage-immune-response-reperfused

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Uma maneira de ganhar novos insights sobre a complexidade da resposta inflamatória do cérebro é apresentado. Descrevemos protocolos baseados em imunofluorescência, seguido por análise confocal tridimensional para investigar o padrão de co-expressão de marcadores fenotípicos microglia / macrófagos em um modelo de rato de isquemia focal.

Tridimensional Confocal análise de marcadores Microglia / macrófagos de polarização em Experimental Brain Injury

Este protocolo descreve um novo método para a comparação 3D do tecido do miocárdio todo-coração com a RM. Este é concebido para a avaliação precisa de injecções intramiocárdicos na zona de fronteira do enfarte de um modelo suíno crónica de enfarte do miocárdio.

Análise Tecidos do Miocárdio Whole-coração 3D

No coração, os eventos moleculares coordenar a função contráctil e eléctrica do órgão. Um conjunto de técnicas de microscopia de fluorescência de campo locais aqui apresentadas permite a gravação de variáveis ​​de celular em corações intactos. Identificação de mecanismos que definem a função cardíaca é fundamental na compreensão de como o coração trabalha em situações patológicas.

O campo local microscopia de fluorescência: Geração de sinais de celular em corações intactos

Aqui, descrevemos uma abordagem de microscopia de folha clara para visualizar o infiltrado de leucócitos CD45 + cardíacos em um modelo murino de miocardite fulminante asséptica, que é induzida pelo tratamento de toxina diftônica intratraqueal de ratos CD11c.DTR.

Visualização Quantitativa de Infiltrado de Leucócitos em um Modelo Murino de Miocardite Fulminante por Microscopia de Folha de Luz

Este estudo utiliza uma técnica de microscopia (LSFM) de fluorescência de luz-folha de iluminação dupla face combinada com compensação óptica para estudar o coração murino.

Microscopia de fluorescência de luz-folha para o estudo do coração murino

A proliferação de cardiomiócitos após a lesão é um processo dinâmico que requer uma sinfonia de pistas extracelulares de populações de células não miócitos. Utilizando o rastreamento de linhagem, claridade passiva e técnicas tridimensionais de microscopia confocal de montagem completa, podemos analisar a influência de uma variedade de tipos de células na reparação e regeneração cardíaca.

Capturando a resposta de lesão cardíaca de populações de células-alvo através de imagens tridimensionais do coração limpo

Um método refinado de limpeza tecidual foi desenvolvido e aplicado ao coração do rato adulto. Este método foi projetado para limpar tecido cardíaco denso e autofluorescente, mantendo a fluorescência do fibroblasto rotulada atribuída a uma estratégia de repórter genético.

Clareza refinada baseada em clareza para organização de fibroblasto tridimensional em corações de rato saudáveis e feridos

Relatamos um método para reconstrução mesoscópica de todo o coração do rato, combinando novos avanços na transformação e coloração de tecidos com o desenvolvimento de um microscópio de folha de luz digitalizado axialmente.

Imagem óptica mesoscópica do coração de todo o rato

Este protocolo apresenta uma coleção de dados geométricos sarcomere, cálcio e macroscópico de uma trabecula cardíaca ex vivo. Essas medidas simultâneas são possíveis pela integração de três modalidades de imagem.

Brightfield simultâneo, Fluorescência e Imagem Tomográfica de Coerência Óptica de Contrair Trabeculae Cardíaca Ex Vivo

O protocolo utiliza microscopia avançada de folha de luz junto com métodos adaptados de limpeza de tecidos para investigar estruturas cardíacas intrincadas em corações de roedores, com grande potencial para a compreensão da morfogênese e remodelação cardíaca.

Imagem de folha de luz para revelar estrutura cardíaca em corações de roedores

O atual ensaio 2,3,5-Trifeniltetrazólio (TTC) introduz um protocolo refinado de coloração TTC que permite a análise de lesão do miocárdio em resolução microscópica, produzindo imagens de alta qualidade que permitem uma avaliação precisa e confiável do tamanho do infarto e da viabilidade do cardiomiócito em nível celular.

Um ensaio microscópico de cloreto 2,3,5-trifeniltetrazólio para análise precisa e confiável da lesão miocárdica

Aprenda a analisar simultaneamente danos cardíacos e resposta imune em infarto agudo do miocárdio reperfundido usando microscopia de fluorescência de folha de luz em modelo murino.

Análise 3D Simultânea de Dano Cardíaco e Resposta Imune em Infarto Agudo do Miocárdio Reperfundido Usando Microscopia de Fluorescência de Folha de Luz (Vídeo) | JoVE Journal

Análise 3D Simultânea de Dano Cardíaco e Resposta Imune em Infarto Agudo do Miocárdio Reperfundido Usando Microscopia de Fluorescência de Folha de Luz

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