Name: Fibroblastos Associados ao Câncer de Tumores Mamários de Camundongos como Ferramentas para Estudos Moleculares e Computacionais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Explore análise computacional de fibroblastos associados ao câncer em tumores mamários de camundongos. Este método integra transcriptômica e organoides tumorais para investigar mecanismos moleculares e identificar alvos terapêuticos potenciais.

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<table><tbody><tr><td>1Kb mais escada de DNA</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10787018</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 24 poços</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 poços</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético</td><td>Sigma Aldirch</td><td>695092</td><td></td></tr><tr><td>IdadeI-HF</td><td>Biolabs da Nova Inglaterra</td><td>R3552</td><td>Armazene a -20 > C</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Meda Pharma</td><td>23907076</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml; rker Câmara de contagem&nbsp;</td><td>VWR</td><td>40443703</td><td></td></tr><tr><td>Tela de Ponta Fina de Baixa Temperatura Cautery</td><td>Keeler</td><td>AX10339KL</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos Cryopure 2 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Violeta de cristal</td><td>Sigma Aldirch</td><td>C0775</td><td>Armazene na RT, use em um exaustor&nbsp;</td></tr><tr><td>Placa de cultura com 100 mm de diâmetro&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>833902</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura 60 mm de diâmetro&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>ddH20</td><td>Caseiro</td><td></td><td>Armazene na RT, use em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Paquímetro digital</td><td>Preciva</td><td>02-301-2</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio digital</td><td>Leica</td><td>DM6B</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Sigma Aldirch</td><td>D8418</td><td>Uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Águia Modificada' s Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>EcoRI-HF</td><td>Biolabs da Nova Inglaterra</td><td>R3101</td><td>Armazene a -20 > C</td></tr><tr><td>Ácido etilenodiaminotetracético (EDTA)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>E6758</td><td>Armazene na RT, use em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Soro fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Pontas filtradas 10 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Pontas filtradas 100 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Pontas filtradas 1000 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Pontas filtradas 20 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Pontas filtradas 200 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 &micro; m&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,45 &micro; m&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura fina</td><td>2Biol</td><td>1406009</td><td></td></tr><tr><td>Pinça</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>Geneticina</td><td>Gibco</td><td>10131035</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Reagente de Transfecção de Lipofectamina 2000</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11668019</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Câmaras de invasão Matrigel com 8 &mu; m Membrana PET&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>Leitor de microplacas (absorbância de 600 nm)</td><td>Promega</td><td>GM3500</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos 1,5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Optimem</td><td>Gibco</td><td>31985047</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Paraformaldeído (PFA)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>158127</td><td>Armazenar em RT, usar em um exaustor</td></tr><tr><td>pBABE-neo grandeTcDNA&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>1780</td><td>Armazene a -20 > C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biológico</td><td>18746853</td><td>Armazene a -20 > C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>pCMV-R8.74</td><td>Addgene</td><td>22036</td><td>Armazene a -20 > C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>pCMV-VSVG&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>8454</td><td>Armazene a -20 > C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina (Pen Strepto, 10.000 &mu; g/mL)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Microscópio de contraste de fase&nbsp;</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>Caseiro</td><td></td><td>Armazene na RT, use em um capuz biológico</td></tr><tr><td>pLKO.1-Puro&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>10878</td><td>Armazene a -20 > C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Solução de poli-L-lisina</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Pág. 8920</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Dicloridrato de puromicina de&nbsp; Streptomyces alboniger</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Pág. 8833</td><td></td></tr><tr><td>rCutSmart Buffer&nbsp;</td><td>Biolabs da Nova Inglaterra</td><td>B6004</td><td>Armazene a -20 > C</td></tr><tr><td>Barbeador para roedores</td><td>Aesculap</td><td>GT416</td><td></td></tr><tr><td>Instituto Memorial de Roswell Park (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>61870010</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Cotonetes sedentos de ponta redonda</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z744127</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi</td><td>Gima</td><td>27041</td><td></td></tr><tr><td>Balança Secura Semi Micro</td><td>Sartorius</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica 10 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica 2 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica 25 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica 5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>Pontos 5-0</td><td>Ética</td><td>1866G</td><td></td></tr><tr><td>Seringa 10 mL</td><td>Pentaferte</td><td>Nº 00202250E14</td><td></td></tr><tr><td>Seringa 5 mL</td><td>Pentaferte</td><td>Nº 00202250E12</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Omnican Insulina 1 mL</td><td>Braun</td><td>Rolamento 9151125S</td><td></td></tr><tr><td>Tecido adesivo</td><td>3M Vetbond</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Inserções Transwell 8 &micro; M pore&nbsp;</td><td>Falcão</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>Inserções Transwell Matrigel 8 &micro; M pore&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,5%), sem vermelho de fenol</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Concentrador centrífugo Vivaspin 20 MWCO 10.000 Da&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td></td></tr></tbody></table>

fibroblastos associados ao câncer de tumores mamários de camundongos como ferramentas para estudos moleculares e computacionais

Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies

Avaliação in vitro das atividades dos CAFs A contribuição dos fibroblastos associados ao câncer (CAFs) derivados de tumores mamários para as características agressivas do câncer de mama (CM) foi estudada usando CAFs imortalizados (iCAFs) gerados de acordo com a etapa 3. Os iCAFs foram superativados conforme descrito na etapa 6 e, em seguida, morreram de fome em sDMEM para coletar seu CM, que foi usado para tratar células 4T1 por 48 h (ver etapa 7.1). Este tratamento foi segui...

Fibroblastos Associados ao Câncer de Tumores Mamários de Camundongos como Ferramentas para Estudos Moleculares e Computacionais

A compelling body of research has confirmed the critical role of the tumor microenvironment (TME) in the growth and aggressiveness of breast cancer (BC). ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Neste relatório, nós demonstramos um sistema para isolar e cultura de células de doadores da glândula mamária do mouse, e ortotopicamente transplante dessas células em ratos para analisar estroma destinatário: interações epiteliais durante o desenvolvimento do tumor mamário.

Transplante mamária de células estromais e células de carcinoma em camundongos C57BL/6J

Carcinoma associado fibroblastos (FAC) rico em miofibroblastos presentes no estroma tumoral, desempenhar um papel importante na condução de progressão do tumor. Nós desenvolvemos um modelo coimplantation xengraft tumor para gerar FAC experimentalmente a partir de fibroblastos humanos mamária. O protocolo descreve como estabelecer miofibroblastos CAF que adquirem uma capacidade de promover tumourigenesis.

Geração Experimental de Carcinoma Associado fibroblastos (FAC) de Fibroblastos Humanos mamária

Os fibroblastos de câncer associados (FAC) facilitar tumor iniciação, crescimento e progressão através de sinalização que promove a proliferação, angiogênese e inflamação. Descrevemos aqui um método para isolar populações puras de fibroblastos normais e cafés de rato fresca e tecidos humanos por selecção de células, utilizando PDGFRα como um marcador de superfície.

Isolamento de fibroblastos normais e associados ao câncer de tecidos frescos, classificando células activadas por fluorescência (FACS)

Aqui descrevemos o modelo e a abordagem para estudar as funções dos macrófagos alveolares pulmonares na metástase do câncer. Para demonstrar o papel dessas células na metástase, foi utilizado o modelo singênico (4T1) de câncer de mama em conjunto com a depleção de macrófagos alveolares com lipossomas de clodronatos.

Estudar o papel dos macrófagos alveolares em câncer de mama metastático

Um protocolo para co-injetar células cancerosas e fibroblastos e monitorar o crescimento do tumor ao longo do tempo é fornecido. Este protocolo pode ser utilizado para entender as bases moleculares do papel dos fibroblastos como reguladores do crescimento tumoral.

Um Modelo de Camundongo para Investigar o Papel de Fibroblastos Associados ao Câncer no Crescimento Tumoral

Este artigo tem como objetivo fornecer um protocolo para o isolamento e cultura de fibroblastos primários associados ao câncer a partir de um modelo de murina síngênica de câncer de mama triplo-negativo e sua aplicação para o estudo pré-clínico de novas nanopartículas projetadas para atingir o microambiente tumoral.

Isolamento de fibroblastos associados ao câncer primário de um modelo de murina síndica do câncer de mama para o estudo de nanopartículas-alvo

Esferoides tumorais 3D multicelulares foram preparados com células de adenocarcinoma pulmonar, fibroblastos e monócitos, seguidos pelo isolamento de fibroblastos associados ao câncer (CAFs) desses esferoides. CAFs isolados foram comparados com fibroblastos normais para avaliar a saúde mitocondrial estudando o potencial transmembranar mitocondrial, espécies reativas de oxigênio e atividades enzimáticas.

Avaliação da Saúde Mitocondrial em Fibroblastos Associados ao Câncer Isolados de Esferoides de Tumores Pulmonares Multicelulares 3D

Desenvolvemos um método para remover, processar, cortar e manchar com sucesso, para avaliação histopatológica, tecido mamário que inicialmente havia sido fixado em slides como montagens inteiras. Este método pode promover a coleta e avaliação de montantes inteiros de glândula mamária em estudos de diretrizes de testes reprodutivos e de desenvolvimento.

Seção de mamíferos mamários completos para identificação de lesões

O objetivo dessa metodologia é identificar células-tronco cancerígenas (CSC) em linhas de células cancerosas e amostras primárias de tumor humano com o protocolo de formação da esfera, de forma robusta, utilizando ensaios funcionais e caracterização phenotípica com citometria de fluxo e ocidental Borrão.

Obtenção de esferas de células-tronco cancerígenas de tumores ginecológicos e de câncer de mama

O objetivo deste protocolo é estabelecer um modelo in vitro 3D para estudar a diferenciação de fibroblastos Cancer-associados (CAFs) em um tumor a granel-como o ambiente, que pode ser abordado em diferentes sistemas de análise, tais como a imunofluorescência, transcricional análise e imagens de células de vida.

Um modelo de spheroid 3D como um sistema mais fisiológico para fibroblastos associados ao cancro diferenciação e invasão in vitro estudos

Explore análise computacional de fibroblastos associados ao câncer em tumores mamários de camundongos. Este método integra transcriptômica e organoides tumorais para investigar mecanismos moleculares e identificar alvos terapêuticos potenciais.

Fibroblastos Associados ao Câncer de Tumores Mamários de Camundongos como Ferramentas para Estudos Moleculares e Computacionais

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