Name: Isolamento, cultura e caracterização de fibroblastos associados ao câncer de próstata (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Aprenda a isolar, cultivar e caracterizar fibroblastos associados ao câncer de próstata a partir de amostras de prostatectomia radical. Este protocolo permite estudar interações fibroblasto-tumor e identificar alvos terapêuticos.

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<table><tbody><tr><td>Placa de 12 poços</td><td>Sarstedt</td><td>833921</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 24 poços</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 6 poços</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 poços</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>mAb de camundongo anti-GAPDH (6C5)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CB1001</td><td>Fonte: Mouse; Diluição para WB: 1:1000</td></tr><tr><td>aSMA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5228&nbsp;</td><td>Fonte: Mouse; Diluição para WB: 1:3000</td></tr><tr><td>Caveolina</td><td>Tecnologia de sinalização celular</td><td>CST3267</td><td>Fonte: Coelho; Diluição para WB: 1:1000</td></tr><tr><td>CD31-VioBlue</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-119-980</td><td>Citometria de fluxo Ab, marcador de células endoteliais</td></tr><tr><td>CD326-PE (EpCAM)</td><td>Milteny Biotec</td><td>130113-826</td><td>Citometria de fluxo Ab, marcador de células epiteliais</td></tr><tr><td>CD45-FITC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-110769</td><td>Citometria de fluxo Ab, marcador de leucócitos Pan</td></tr><tr><td>CD90-APC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-114-903</td><td>Citometria de fluxo Ab, marcador de fibroblastos</td></tr><tr><td>Colágeno VI (COL6A1)</td><td>Abcam</td><td>AB182744</td><td>Fonte: Coelho; Diluição para WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Tubo cônico 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos Cryopure 2 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura com 100 mm de diâmetro&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura com 100 mm de diâmetro&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura 60 mm de diâmetro&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>D8418</td><td>Uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Águia Modificada' s Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>FAP</td><td>Abcam</td><td>AB53066</td><td>Fonte: Coelho; Diluição para WB: 1:500</td></tr><tr><td>Reagente de bloqueio FcR, humano</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-059-901</td><td>Bloqueador Fc</td></tr><tr><td>Soro fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Pontas filtradas 10 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Pontas filtradas 100 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Pontas filtradas 1000 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Pontas filtradas 20 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Pontas filtradas 200 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 &micro; m&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Pinça</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>FSP1/S100A4</td><td>Tecnologia de sinalização celular</td><td>D9F9D (13018)</td><td>Fonte: Coelho; Diluição para WB: 1:2000</td></tr><tr><td>IL6</td><td>Tecnologia abclonal</td><td>A0286</td><td>Fonte: Coelho; Diluição para WB: 1:1000</td></tr><tr><td>ImagemJ</td><td>Instituto Nacional de Saúde</td><td>Versão 1.53c</td><td>Software para análise de imagens</td></tr><tr><td>Placa de 96 poços Incucyte ImageLock</td><td>Sartório</td><td>BA-04857</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte&reg; SX5</td><td>Sartório</td><td>SX5</td><td>Instrumento de análise de células vivas</td></tr><tr><td>Reagente de Transfecção de Lipofectamina 2000</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11668019</td><td>reagente de transfecção mediado por lipídios catiônicos</td></tr><tr><td>MACS&reg; Solução de armazenamento de tecido</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>Leitor de microplacas (absorbância de 600 nm)</td><td>Promega</td><td>GM3500</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos 1,5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Ncad</td><td>Abcam</td><td>AB18203</td><td>Fonte: Coelho; Diluição para WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Nitro Blue Tetrazolium&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>N5514</td><td></td></tr><tr><td>Parafilme&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>HS234526B</td><td></td></tr><tr><td>pBABE-puro-hTERT</td><td>Addgene</td><td>1771</td><td>Armazene a -20 > C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biológico</td><td>NBP2-29541</td><td>Armazene a -20 > C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>PDGFRB</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-432</td><td>Fonte: Coelho; Diluição para WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina (PS, 10.000 &mu; g/mL)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Microscópio de contraste de fase&nbsp;</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>Caseiro</td><td></td><td>NaCl, 137 mM; KCl, 2,7 mM; Na2HPO4, 10 mM;KH2PO4, 1,8 mM. Autoclave e Loja em RT</td></tr><tr><td>Solução de poli-L-lisina</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Pág. 8920</td><td>Armazene a 4 &deg; C, uso em um capuz biológico</td></tr><tr><td>Dicloridrato de puromicina</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Pág. 8833</td><td></td></tr><tr><td>Balança Secura Semi Micro</td><td>Sartorius</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica 10 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica 2 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica 25 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica 5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>ESTATÍSTICA 3</td><td>CST</td><td>9139</td><td>Fonte: Mouse; Diluição para WB: 1:1000</td></tr><tr><td>STAT3 Y705</td><td>CST</td><td>9131</td><td>Fonte: Coelho; Diluição para WB: 1:1000</td></tr><tr><td>estereomicroscópio</td><td>Leica</td><td>MZ125</td><td></td></tr><tr><td>Seringa 10 mL</td><td>Pentaferte</td><td>Nº 00202260D12</td><td></td></tr><tr><td>TermoMixer</td><td>Eppendorph</td><td>22331</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,5%), sem vermelho de fenol</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Vim</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-6260</td><td>Fonte: Mouse; Diluição para WB: 1:2000</td></tr><tr><td>Concentrador centrífugo Vivaspin 20</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td>MWCO 10.000 Da&nbsp;</td></tr><tr><td>Tesoura Wagner</td><td>2Biol</td><td>14070-12</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento, cultura e caracterização de fibroblastos associados ao câncer de próstata

Isolation, Culture, and Characterization of Prostate Cancer-Associated Fibroblasts

Os pares CAF e NF de 7 pacientes com CaP de alto grau foram isolados com sucesso com este protocolo. A idade dos pacientes na cirurgia e os escores de Gleason estão resumidos na Tabela 3. Para avaliar a pureza das populações de fibroblastos derivados, a passagem de dois CAFs e NFs primários foi destacada e corada com os anticorpos fluorescentes indicados ou com iodeto de propídio para avaliar a apoptose. Os resultados representativos da análise FACS subsequente são mostr...

Isolamento, cultura e caracterização de fibroblastos associados ao câncer de próstata

Tumor stroma can be actively shaped by tumor cells to adopt pro-tumorigenic properties, making it a focal point of cancer research. Among the stromal ...

isolation-culture-characterization-prostate-cancer-associated

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Os fibroblastos de câncer associados (FAC) facilitar tumor iniciação, crescimento e progressão através de sinalização que promove a proliferação, angiogênese e inflamação. Descrevemos aqui um método para isolar populações puras de fibroblastos normais e cafés de rato fresca e tecidos humanos por selecção de células, utilizando PDGFRα como um marcador de superfície.

Isolamento de fibroblastos normais e associados ao câncer de tecidos frescos, classificando células activadas por fluorescência (FACS)

O isolamento de células-tronco cancerosas (CSCs) diretamente a partir de tecidos humanos é requisito para a sua caracterização biológica. Este manuscrito descreve uma metodologia para o isolamento de CSCs próstata de tecidos humanos, além de fornecer dicas sobre solução de problemas etapas difíceis.

Isolamento de células-tronco cancerosas em amostras de câncer de próstata humano

Aqui apresentamos um protocolo de co-cultura em três dimensões, que é útil para investigar interações multicelulares e modulação dependente de matriz extracelular do comportamento das células cancerígenas. Neste modelo experimental, as células cancerígenas são cultivadas em géis de colágeno incorporados com fibroblastos associados ao câncer humano.

Tridimensional modelo de co-cultura para Interaction Tumor estromal-

O comportamento dos fibroblastos está subjacente a um espectro de entidades clínicas, mas permanecem mal caracterizados, em grande parte devido à sua heterogeneidade inerente. A pesquisa tradicional de fibroblastos depende da manipulação in vitro, mascarando o comportamento dos fibroblastos in vivo. Descrevemos um protocolo baseado em FACS para o isolamento de fibroblastos de pele de camundongo que não requer cultura de células.

Isolamento de fibroblastos de murino Dérmica por FACS

Aqui, apresentamos um método para o estabelecimento de um sistema in vitro rápido que suporta a cultura tridimensional e subsequente diferenciação luminal de células epiteliais primárias da próstata.

Um sistema de cultura 3D baseado em Inserir Filtro Rápido para próstata primário Diferenciação Celular

Este manuscrito descreve um protocolo FACS-baseado para a isolação de fibroblasto Papillary e reticular da pele humana. Contorna a cultura in vitro que era inevitável com o protocolo comumente usado da isolação através das culturas do explante. Os subconjuntos emanando do fibroblasto são funcionalmente distintos e indicam a expressão e a localização diferenciais do gene dentro da derma.

Isolamento de fibroblastos papilares e reticular da pele humana por triagem celular ativada por fluorescência

Nós apresentamos um protocolo para isolar fibroblastos adultos preliminares em uma maneira fácil, rápida e de confiança, performable por novatos (por exemplo, estudantes). O procedimento combina a digestão enzimática do tecido e a agitação mecânica com ondas ultra-sônicas para obter fibroblastos primários. O protocolo pode facilmente ser adaptado às exigências experimentais específicas (por exemplo, tecido humano).

Isolação adulta preliminar ultra-som-aumentada do fibroblasto

Usando células epitelia de próstata primárias humanas, relatamos um novo método livre de biomarcadores de caracterização funcional de células semelhantes a troncos por um ensaio de retenção de rótulos à base de esferóides. Um protocolo passo a passo é descrito para a rotulagem de células BrdU, CFSE ou Far Red 2D; formação tridimensional de esferóides; identificação de células-tronco de retenção de rótulos por imunocitoquímica; e isolamento pela FACS.

Isolamento de células-tronco a partir de culturas esferóides tridimensionais

A obtenção de uma população pura de fibroblastos é crucial para estudar seu papel na reparação de feridas e fibrose. Descrito aqui é um método detalhado para isolar fibroblastos e miofibroblastos de corações de camundongos ilesos e feridos seguido susceptência de sua pureza e funcionalidade por imunofluorescência, RTPCR, triagem celular assistida por fluorescência, e contração de gel de colágeno.

Isolamento e Caracterização de Fibroblastos Cardíacos Adultos e Miofibroblastos

Este artigo tem como objetivo fornecer um protocolo para o isolamento e cultura de fibroblastos primários associados ao câncer a partir de um modelo de murina síngênica de câncer de mama triplo-negativo e sua aplicação para o estudo pré-clínico de novas nanopartículas projetadas para atingir o microambiente tumoral.

Isolamento de fibroblastos associados ao câncer primário de um modelo de murina síndica do câncer de mama para o estudo de nanopartículas-alvo

Esferoides tumorais 3D multicelulares foram preparados com células de adenocarcinoma pulmonar, fibroblastos e monócitos, seguidos pelo isolamento de fibroblastos associados ao câncer (CAFs) desses esferoides. CAFs isolados foram comparados com fibroblastos normais para avaliar a saúde mitocondrial estudando o potencial transmembranar mitocondrial, espécies reativas de oxigênio e atividades enzimáticas.

Avaliação da Saúde Mitocondrial em Fibroblastos Associados ao Câncer Isolados de Esferoides de Tumores Pulmonares Multicelulares 3D

Aprenda a isolar, cultivar e caracterizar fibroblastos associados ao câncer de próstata a partir de amostras de prostatectomia radical. Este protocolo permite estudar interações fibroblasto-tumor e identificar alvos terapêuticos.

Isolamento, cultura e caracterização de fibroblastos associados ao câncer de próstata

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