Name: Um teste de preferência olfativa para medir vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Aprenda a avaliar vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos usando um teste de preferência olfativa. Este método permite investigar mecanismos neurais e fenótipos depressivos.

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Todos os procedimentos experimentais e de cuidados com os animais seguiram as diretrizes nacionais e europeias (2010/63/UE) e foram aprovados pelo Ministério da Pesquisa da França (APAFiS: #16380-2018080217358599_v1; APAFIS # 51636-2024101718013761_v4). Camundongos machos e fêmeas C57BL/6JRj (modelo UCMS) e camundongos machos C57BL/6NTac (modelo CORT) (8 semanas de idade) foram alojados socialmente (4-5 camundongos por gaiola) e mantidos em condições padrão (23 ± 1 ° C; umidade 40%) em um ciclo claro/escuro de 14/10 h (luzes acesas às 7 da manhã) com comida e água ad libitum.
1. A configuração experimental
<ol>
	<li>Instalação da arena<ol>
		<li>Prepare a configuração experimental, que consiste em uma arena de dois compartimentos (45 cm × 50 cm × 25 cm) feita de paredes de acrílico cinza e um piso branco. Divida os dois compartimentos (25 cm × 45 cm) por uma parede de acrílico cinza (37 cm × 25 cm).</li>
		<li>Coloque uma placa de Petri perfurada (60 mm × 15 mm com 7 orifícios de 5 mm de diâmetro) na parte inferior da parede de cada compartimento.</li>
		<li>Fixe verticalmente as placas de Petri na parede usando adesivo de dupla face ou adesivo sensível à pressão (por exemplo, Blu-tack).</li>
		<li>Coloque uma câmera no topo da arena para registrar o comportamento dos animais (2 m acima da arena) e rastreie automaticamente seus movimentos durante o experimento.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Escolha de odores<ol>
		<li>Antes do experimento, escolha uma lista de odores com valência neutra, positiva e negativa que serão testados (consulte a Tabela 1 para exemplos).</li>
		<li>Verifique se todos os odores escolhidos têm pressão de vapor semelhante. Além disso, avalie a difusão por toda a arena para alguns odores com um detector de fotoionização (PID)26.</li>
		<li>Teste cada odor em um dia separado. NOTA: Recomenda-se planejar primeiro o uso de odores neutros, depois apetitivos e terminar com os odores aversivos para minimizar os efeitos de exploração de um dia para o outro. Essa ordem minimiza os efeitos de transferência de um dia de teste para outro. Alternativamente, uma apresentação aleatória pode ser usada, mas todos os grupos experimentais devem ser testados com a mesma sequência de odor.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Planejamento de grupos experimentais<ol>
		<li>Divida os camundongos em pelo menos dois grupos experimentais: camundongos de controle e camundongos que serão submetidos ao modelo de depressão. Alojar os animais do mesmo grupo nas mesmas gaiolas. CUIDADO: Cada grupo experimental deve conter pelo menos aproximadamente 7-8 indivíduos para obter significância estatística. As gaiolas devem ser localizadas nas proximidades do biotério para minimizar o efeito da gaiola.</li>
		<li>Induza um fenótipo semelhante ao depressivo em grupos de camundongos relevantes usando o modelo de depressão de escolha. NOTA: Descrever protocolos para induzir comportamentos semelhantes à depressão em camundongos está além do escopo deste artigo. No entanto, este estudo apresenta experimentos utilizando dois modelos diferentes (o Estresse Leve Crônico Imprevisível [UCMS] e a Corticosterona [CORT])27,28 como resultados representativos para este teste de preferência olfativa. Em breve, o modelo UCMS depende da exposição a uma variedade de diferentes estressores ambientais ao longo de várias semanas, enquanto o modelo CORT consiste na administração crônica de corticosterona dissolvida na água potável de camundongos (cerca de 5 mg / kg / dia, dependendo de quanto os camundongos bebem).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Fase de habituação
<ol>
	<li>Habituação geral e manuseio<ol>
		<li>Ao chegar, deixe os ratos intactos por 1 semana sem qualquer troca de cama. Adicione material de algodão suplementar e um iglu na gaiola para reduzir o estresse.</li>
		<li>Após 1 semana, manuseie suavemente todos os ratos diariamente por 3-4 dias e habitue-os ao manuseio do copo, de preferência na sala experimental.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Condições experimentais do ensaio<ol>
		<li>Transfira o mouse para a sala de testes comportamentais 30 minutos antes do início do experimento. NOTA: Idealmente, a sala comportamental deve incluir duas partes separadas, permitindo que os animais fiquem em uma parte enquanto o rato testado atua na outra.</li>
		<li>Esteja ciente de que as condições padrão de alojamento são mantidas (23 ± 1 °C; umidade 40%) e não há som, iluminação ou odor perturbador na sala.</li>
		<li>Usando um luxímetro, configure a iluminação para aproximadamente 40 lux na arena. Certifique-se de que a iluminação seja homogênea na arena.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Habituação à arena<ol>
		<li>Adicione um papel de filtro limpo (42,5 mm) em ambas as placas de Petri (60 mm × 15 mm).</li>
		<li>Use fita transparente para prender a tampa da placa de Petri ao fundo (porque ela será colocada verticalmente).</li>
		<li>No primeiro dia, coloque delicadamente todos os ratos da mesma gaiola juntos na arena por 10 minutos para reduzir a neofobia. CUIDADO: Sempre coloque os ratos na arena pelo manuseio do copo para evitar estresse devido ao apanhar pela cauda.</li>
		<li>No dia seguinte, introduza cada rato individualmente na arena, apenas entre os dois compartimentos, e registre o comportamento por 10 min.</li>
		<li>Repita por 2-3 dias seguidos.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Critério de exploração<ol>
		<li>Defina as duas áreas (25 cm e 15 cm) em que as placas de Petri foram colocadas e meça o tempo que cada animal passa em cada zona.</li>
		<li>Faça a média dessas medidas em todas as etapas de habituação individuais.</li>
		<li>Se o tempo médio gasto em cada uma das zonas for superior a 50 s, o critério está preenchido. Caso contrário, repetir as sessões de habituação até atingir o critério ou excluir o animal da análise. NOTA: Um máximo de duas sessões de habituação podem ser realizadas por dia (manhã e tarde).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Fase de teste
<ol>
	<li>Preparação do odor<ol>
		<li>No dia do teste, prepare o odor com a diluição correta sob uma capa química. Dilua o odor em óleo mineral ou água destilada, dependendo da estrutura química. Para evitar contaminação, armazene o óleo mineral em uma sala ventilada separada, longe de odores. NOTA: O uso de uma nova garrafa de óleo mineral é recomendado ao iniciar um novo experimento.</li>
		<li>Armazene a solução odorífera em um frasco de vidro. Evite recipientes de tubos de plástico que possam adicionar contaminação por odores.</li>
		<li>Imediatamente antes de cada camundongo ser testado, colete 200 μL da solução de odor com uma micropipeta usando pontas de filtro e coloque-a no papel de filtro em uma das duas placas de Petri.</li>
		<li>Deixar o outro papel de filtro da segunda placa de Petri intocado.</li>
		<li>Transfira as placas de Petri na sala de testes e fixe-as verticalmente na parede da arena. CUIDADO: Não prepare e jogue fora as soluções odoríferas na sala experimental para evitar contaminação por odores. Troque as luvas regularmente durante o experimento. Se houver suspeita de que as luvas podem estar contaminadas durante a manipulação do odor, troque-as antes de pegar os ratos para teste.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Teste comportamental<ol>
		<li>Coloque cada mouse individualmente na arena, apenas entre os dois compartimentos.</li>
		<li>Gravar por 10 min.</li>
		<li>Remova o mouse da arena.</li>
		<li>Remova o odor placa de Petri.</li>
		<li>Limpe a arena com uma solução desinfetante (por exemplo, etanol 70%) e seque-a.</li>
		<li>Jogue fora o papel de filtro e repita a preparação do odor para o próximo mouse.</li>
		<li>O ideal é testar apenas um odor por dia. Preferencialmente, use odores neutros primeiro, depois odores positivos e, finalmente, odores negativos (veja a Figura 1). CUIDADO: Realize as etapas de habituação e teste aproximadamente na mesma hora do dia durante os dias do experimento (idealmente entre 9h e 15h). Se o número de animais exigir um período de tempo mais longo, esteja atento para testar diferentes grupos experimentais de maneira alternada para evitar qualquer viés diurno. Se machos e fêmeas precisarem ser testados no mesmo experimento, prefira testar um sexo após o outro. NOTA: Use placas de Petri limpas todos os dias do teste para evitar a contaminação por odores. É importante observar que as placas de Petri perfuradas podem ser reutilizadas para vários experimentos após a limpeza adequada e a descontaminação do odor.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Análise dos dados
<ol>
	<li>Rastreamento de comportamento<ol>
		<li>Use um programa de rastreamento automático para registrar a posição do mouse durante os testes.</li>
		<li>Defina zonas separadas na arena para análise (consulte a Figura 1):<ol>
			<li>Defina uma "zona de odor" (25 cm × 15 cm), a área onde a placa de Petri é colocada com o papel de filtro embebido com o odor (ou seja, a área mais próxima do odor representando cerca de um terço do compartimento da superfície).</li>
			<li>Defina uma "zona de controle" (25 cm × 15 cm), simétrica à "zona de odor", mas sem nenhum odor adicionado na placa de Petri.</li>
			<li>Defina uma "zona de odor atrás" (25 cm × 30 cm), ou seja, o resto do compartimento é onde a placa de Petri de odor é colocada.</li>
			<li>Defina uma "zona de controle atrás" (25 cm × 30 cm), simétrica à "zona de controle atrás", consistindo no resto do compartimento sem odor. NOTA: O rastreamento do ponto central do corpo do camundongo é suficiente para analisar a preferência olfativa do animal. No entanto, rastrear o nariz de cada camundongo especificamente pode ilustrar com mais precisão a investigação olfativa do animal.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Leituras da resposta hedônica<ol>
		<li>Usando o rastreamento automático, colete as seguintes informações para cada mouse e todos os dias do teste, incluindo etapas de habituação:<ol>
			<li>Registre a distância total percorrida na arena (m).</li>
			<li>Registre o tempo gasto em cada zona da(s) arena(s).</li>
			<li>Registre o número de entradas em cada zona da arena.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Use a distância total percorrida para avaliar os principais efeitos locomotores.</li>
		<li>Para avaliar as diferenças na preferência olfativa por vários odores, use as leituras principais:<ol>
			<li>Use o tempo gasto na zona de odor.</li>
			<li>Use o número de entradas na zona de odor.</li>
			<li>Use um índice de preferência, calculado como o tempo gasto na zona de odor normalizado para o tempo gasto nesta zona durante a habituação (a normalização é realizada em camundongos de todos os grupos). A média refere-se à média aritmética do tempo gasto na zona odorífera e sd refere-se ao seu desvio padrão. 
			<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68391/68391eq001v2.jpg" style="margin: auto;"></li>
			<li>Use um índice de exploração de odor, calculado como a média dos valores normalizados de distância percorrida, tempo gasto na zona de odor e número de entradas na zona de odor da seguinte forma: 
			<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/68391/68391eq002.jpg" style="margin: auto;"> 
			<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/68391/68391eq003v2.jpg" style="margin: auto;"> NOTA: Este índice de preferência pode ser adaptado se necessário, por exemplo, comparando os tempos passados na zona de odor versus zona de controle. Se os grupos mostrarem diferenças significativas em sua exploração da "zona de odor" durante a habituação, a normalização pode ser realizada apenas em relação ao grupo de controle, em vez de todos os grupos combinados.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Represente visualmente essas leituras para camundongos de controle e depressivos como média ± erro padrão da média (SEM).</li>
		<li>Use a análise de variância bidirecional de medidas repetidas (ANOVA) seguida de testes post hoc (aqui o teste de diferença menos significativa de Fisher não corrigido) para levar em conta os grupos experimentais, odores (fator de medição repetida) e fatores de efeito de interação. O fator de interação indica se as diferenças entre os grupos são consistentes em todos os odores apresentados.</li>
		<li>Verificar normalidade e homocedasticidade por meio de testes adaptados (teste de Shapiro-Wilk, teste de Bartlett). A significância estatística foi estabelecida em *p &lt; 0,05, **p &lt; 0,01, *** p &lt; 0,001, ****p &lt; 0,0001.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

<table><tbody><tr><td>2,4,5-Trimetiltiazol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W332518-100G-K</td><td></td></tr><tr><td>2-trans octenal</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Rolamento 52464-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Blu-tack</td><td>UHU</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Papel de filtro</td><td>Fisher Científico</td><td>11710125</td><td>42,5 milímetros</td></tr><tr><td>Frasco de vidro</td><td>HOLANDÊS DOMINIQUE</td><td>958983</td><td></td></tr><tr><td>Óleo mineral</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Noldus Ethovision</td><td>Noldus Ethovision</td><td>Versão 17.5</td><td>Alternativamente, o Single Mouse Tracker no software ICY de código aberto ou Deeplabcut pode ser usado</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Falcão</td><td>351007</td><td>Placa de Petri de 60 mm x 15 mm com 7 furos feitos sob medida de 5 mm de diâmetro</td></tr><tr><td>Arena de acrílico</td><td>Feito sob medida&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Arena de acrílico de 45 cm x 50 cm x 25 cm dividida em duas câmaras por uma parede de 37 cm x 25 cm no meio.</td></tr></tbody></table>

um teste de preferência olfativa para medir vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos

An Olfactory Preference Test for Measuring Olfactory Hedonic Biases in Mouse Models of Depression

Para verificar que camundongos do tipo depressivo apresentam um viés olfatório negativo14,29 e que ele pode ser medido de forma confiável usando o protocolo do teste de preferência olfativa que descrevemos aqui, avaliamos a resposta hedônica a diferentes odores em dois modelos distintos de depressão em camundongos.
Primeiro, usamos um modelo de camundongo de estresse leve crônico imprevisível (UCMS) com duração de 4 semanas adaptado de28 (consulte o Arquivo Suplementar 1 para obter o protocolo detalhado) para induzir um fenótipo semelhante ao depressivo em camundongos C57BL / 6JRj fêmeas jovens (Figura 2A, B). Essas fêmeas foram testadas no teste de preferência olfativa com urina de camundongo macho (MU, pura) como odor apetitivo e 2,4,5-trimetiltiazol (TMT, 5% em óleo mineral) como odor aversivo. Em média, cada camundongo passou pelo menos 50 s na zona de "controle" e "odor" durante a habituação, cumprindo o critério (Figura 2C). No entanto, por meio da habituação, os camundongos UCMS passaram significativamente mais tempo na "zona de controle" em comparação com os controles, mas como não há diferença significativa em relação à zona onde o odor será adicionado, essa diferença pode ser descartada. Em relação à distância, os camundongos controle se moveram significativamente mais do que o UCMS quando expostos ao MU, mas não durante a habituação ou na presença de TMT (Figura 2D). Finalmente, todas as leituras da resposta hedônica (tempo gasto na zona de odor, número de entradas na zona de odor e índice de preferência) mostram diferenças significativas ou uma tendência estatística entre as mulheres Controle e UCMS (Figura 2E-G). Esse efeito também é visível através do índice global de exploração de odores, que é uma medida combinada da resposta hedônica e locomotora (Figura 2H). Consistentemente, cada leitura demonstra um viés hedônico negativo em resposta a estímulos olfativos apetitivos e aversivos. Curiosamente, o escore de emocionalidade, que é calculado como um valor normalizado do fenótipo semelhante à ansiedade e depressão com base em uma grande bateria de testes comportamentais14, está positivamente correlacionado com o índice de exploração de odor de MU e TMT (Figura 2I), mostrando uma relação entre a resposta comportamental a odores positivos e negativos e o fenótipo semelhante à ansiedade e depressão.
Em segundo lugar, usamos o mesmo protocolo UCMS para induzir um fenótipo semelhante ao depressivo em camundongos machos desta vez. Durante o Teste de Preferência Olfativa, esses camundongos foram expostos à urina de camundongo fêmea (FU, pura), que é apetitosa, e TMT como anteriormente, como odor negativo (Figura 3A, B). Não há diferença no tempo gasto nas quatro zonas durante a habituação, nem na distância percorrida no teste (Figura 3C,D). O tempo gasto na zona de odor mostra uma redução significativa da exploração de FU e TMT no UCMS em comparação com os controles (Figura 3E). Além disso, os camundongos UCMS entram significativamente menos na zona de odor, ou tendem a fazê-lo, e apresentam um índice de preferência significativamente reduzido para FU e TMT ( Figura 3F, G ), confirmando um viés olfativo negativo em um estado depressivo. Da mesma forma, o índice de exploração de odor mostra uma resposta comportamental negativamente deslocada à FU e TMT de camundongos UCMS em comparação com os controles (Figura 3H), que tendem a ser positivamente correlacionados com o escore de emocionalidade dos animais (Figura 3I).
Em um terceiro experimento, recorremos a outro modelo de depressão que se baseia na administração crônica de corticosterona (CORT) na água potável de camundongos C57BL / 6NTac machos, enquanto os camundongos controle recebem apenas a solução veículo (Veh) (10% 2-hidroxipropil-beta-ciclodextrina) 27. Após quatro semanas de tratamento com CORT ou Veh, os camundongos foram habituados por quatro dias e, em seguida, expostos a um odor neutro (OCT: 2-transoctenal, 1% em água), um odor positivo (PO: óleo de amendoim) e um odor negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazol, 5% em óleo mineral) (Figura 4A, B). Por meio da habituação, não houve diferenças entre Veh e CORT (Figura 4C). No entanto, ambos os grupos passaram significativamente mais tempo na "zona de odor" em comparação com a "zona de controle". Não há diferenças para a distância percorrida, exceto para o odor positivo (PO) para o qual os camundongos Veh se moveram mais do que o CORT (Figura 4D). É importante ressaltar que, como para camundongos UCMS, o tempo gasto na zona de odor foi significativamente reduzido para camundongos CORT quando expostos a um odor neutro e apetitivo ( Figura 4E ). A exploração reduzida de odores também é visível por meio de uma redução significativa ou tendência a um menor número de entradas na zona de odor (Figura 4F). Nesse caso, as diferenças entre os grupos são reveladas dependendo da leitura analisada, provavelmente devido às limitações relacionadas ao número de animais utilizados, bem como a um potencial efeito de piso causado pelo baixo tempo de exploração observado após a exposição ao TMT. No geral, o índice de preferência é significativamente menor em camundongos CORT para todos os estímulos de odor em comparação com Veh (Figura 4H). Finalmente, o índice de exploração de odores para todos os odores está significativamente correlacionado com o escore de emocionalidade dos animais (Figura 4I), demonstrando mais uma vez que este teste de preferência olfativa é uma ferramenta adequada para avaliar o viés emocional negativo em vários modelos de depressão em camundongos.
Finalmente, podemos descartar a possibilidade de que as diferenças observadas possam ser causadas por uma redução na atividade locomotora, e não por vieses emocionais. De fato, a locomoção não difere entre os grupos durante a habituação ao avaliar a distância total percorrida (Figura 2D, Figura 3D, Figura 4D). Além disso, com base na análise estatística, uma redução geral no engajamento da tarefa ou um efeito de novidade também não pode explicar esses vieses. De fato, encontramos um efeito significativo do fator odor na análise do índice de preferência, sem interação significativa entre os grupos experimentais e os odores. Esses resultados demonstram que camundongos depressivos realmente realizam a tarefa e que sua exploração reduzida é específica para cada pista olfativa.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig1v2.jpg"> 
Figura 1: Esquema geral da linha do tempo e configuração do teste de preferência olfativa. Os ratos são os primeiros habituados à arena. No primeiro dia de habituação, os ratos da mesma gaiola são colocados juntos para reduzir a neofobia. No dia seguinte, eles são colocados individualmente na arena. Após a habituação, um odor é adicionado a uma das câmaras. Os odores neutros são preferencialmente testados primeiro, seguidos por odores positivos e, finalmente, odores negativos. Para análise, a arena pode ser dividida em quatro zonas diferentes. Criado com Biorender. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig1v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig2v2.jpg"> 
Figura 2: Viés olfativo negativo em um modelo de depressão em camundongo fêmea UCMS. (A, B) Linha do tempo e grupos experimentais do estudo: Camundongos fêmeas controle e UCMS (Estresse Leve Crônico Imprevisível) são testados no Teste de Preferência Olfativa com odor positivo (MU: urina de camundongo macho, pura) e negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazol, 5% em óleo mineral). Criado com Biorender. (C) Os camundongos UCMS passaram, em média, significativamente mais tempo na "zona de controle" e menos tempo na "zona de odor atrás" em comparação com os controles durante a habituação (Grupo: F (1, 12) = 74,03, p &lt; 0,0001; Zona: F(2,434, 29,21) = 7,688, p = 0,0012; Interação: F(3, 36) = 5,148, p = 0,0046). (D) A distância total percorrida diminuiu significativamente no UCMS quando exposto à MU, mas não para Habituação (Hab) e TMT (Grupo: F (1, 12) = 4,664, p = 0,0518; Odor: F(1,871, 22,45) = 4,846, p = 0,0195; Interação: F(2, 24) = 4,797, p = 0,0177). (E) Os camundongos UCMS gastaram significativamente menos tempo explorando MU e TMT (Grupo: F (1, 12) = 24,39, p = 0,0003; Odor: F(1, 12) = 59,69, p &lt; 0,0001; Interação: F(1, 12) = 2,267, p = 0,1580). (F) Os camundongos UCMS entraram menos do que a zona de odor ou tenderam a (Grupo: F (1, 12) = 9,279, p = 0,0102; Odor: F(1, 12) = 5,100, p = 0,0433; Interação: F(1, 12) = 1,649, p = 0,2233). (G) O índice de preferência por MU e TMT é significativamente reduzido em camundongos UCMS (Grupo: F (1, 12) = 24,39, p = 0,0003; Odor: F(1, 12) = 59,69, p &lt; 0,0001; Interação: F(1, 12) = 2,267, p = 0,1580). (H) O índice de exploração de odor para MU e TMT é significativamente reduzido em camundongos UCMS (F (1, 12) = 14,71, p = 0,0024; Odor: F(1, 12) = 0, p &gt; 0,9999; Interação: F(1, 12) = 0,02630, p = 0,8739). (I) O índice de exploração de odores para MU e TMT está positivamente correlacionado com o escore de emocionalidade dos animais (MU: Pearson R2 = 0,4837, F(1,12) = 11,24, **p = 0,0058; TMT: Pearson R2 = 0,5340, F(1,12) = 13,75, **p = 0,0030). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig2v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig3v2.jpg"> 
Figura 3: Viés olfativo negativo em um modelo de depressão em camundongo macho UCMS. (A, B) Linha do tempo e grupos experimentais do estudo: Camundongos machos controle e UCMS são testados no Teste de Preferência Olfativa com odor positivo (FU: urina de camundongo fêmea, pura) e negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazol, 5% em óleo mineral). Criado com Biorender. (C) Não há diferenças em média no tempo gasto nas diferentes zonas da arena por habituação (Grupo: F(1, 13) = 3,921, p = 0,0693; Zoner = F(1,688, 21,94) = 34,57, p &lt; 0,0001; Interação: F(3, 39) = 0,7385, p = 0,5355). (D) Não há diferenças na distância total percorrida entre os controles e o UCMS (Grupo: F (1, 13) = 2,313, p = 0,1522; Odor: F(1,722, 22,38) = 1,746, p = 0,1998; Interação: F(2, 26) = 0,8806, p = 0,4266). (E) O tempo gasto explorando a zona de odor com FU e TMT é significativamente reduzido em camundongos UCMS (Grupo: F (1, 13) = 6,808, p = 0,0216; Odor: F(1, 13) = 16,21, p = 0,0014; Interação: F(1, 13) = 0,3304, p = 0,5753). (F) Os camundongos UCMS entraram significativamente menos vezes na zona de odor para TMT e tenderam para FU (Grupo: F (1, 13) = 6,572, p = 0,0236; Odor: F(1, 13) = 3,784, p = 0,0737; Interação: F(1, 13) = 0,2145, p = 0,6509). (G) O índice de preferência dos camundongos UCMS é significativamente reduzido para FU e TMT (Grupo: F(1,13) = 6,808, p = 0,0216; Odor: F(1, 13) = 16,21, p = 0,0014; Interação: F(1, 13) = 0,3304, p = 0,5753); (H) O índice de exploração de odores do UCMS é significativamente reduzido para ambos os odores (Grupo: F(1, 13) = 12,42, p = 0,0037; Odor: F(1, 13) = 0,002580, p = 0,9603; Interação: F(1, 13) = 0,5804, p = 0,4598). (I) O índice de exploração de odores para FU e TMT tende a estar positivamente correlacionado com o escore de emocionalidade dos animais (FU: Pearson R2 = 0,2573, F(1, 13) = 4,504, p = 0,0536; TMT: Pearson R2 = 0,2266, F(1, 13) = 3,809, p = 0,0729). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig3v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig4v2.jpg"> 
Figura 4: Viés olfatório negativo em um modelo de depressão em camundongos machos CORT. (A,B) Linha do tempo e grupos experimentais do estudo: Camundongos machos Veh e CORT são testados no Teste de Preferência Olfativa com odor neutro (OCT: trans-2-octenal, 1% em água), positivo (PO: óleo de amendoim, puro) e negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazol, 5% em óleo mineral). Camundongos Veh e CORT são administrados com a solução Vehicle e Vehicle + Corticosterone, respectivamente, durante toda a duração do experimento. Criado com Biorender. (C) Tempo médio gasto nas diferentes zonas da arena durante a habituação (Grupo: F(1, 10) = 0,07588, p = 0,7886; Zona: F(2,224, 22,24) = 6,939, p = 0,0036; Interação: F(3, 30) = 0,7033, p = 0,5575). (D) Distância total percorrida durante o teste de Habituação (Hab) e os diferentes odores (Grupo: F(1, 10) = 4,193, p = 0,0678; Odor: F(3, 30) = 11,80, p &lt; 0,0001; Interação: F(3, 30) = 1,489, p = 0,2375). (E) Os camundongos CORT passam menos tempo na zona de odor do que o Veh para OCT e PO (Grupo: F (1, 10) = 5,094, p = 0,0476; Odor: F(2, 20) = 28,87, p &lt; 0,0001; Interação: F(2, 20) = 3,841, p = 0,0388). (F) Camundongos CORT entram menos vezes na zona de odor ou tendidos em comparação com Veh (Grupo: F(1, 10) = 6,832, p = 0,0259; Odor: F(2, 20) = 2,738, p = 0,0889; Interação: F(2, 20) = 0,2902, p = 0,7512). (G) Os qmics CORT apresentam menor índice de preferência para OCT e PO (Grupo: F(1, 10) = 5,895, p = 0,0356; Odor: F(2, 20) = 20,83, p &lt; 0,0001; Interação: F(2, 20) = 1,437, p = 0,2611). (H) O índice de exploração de odores é significativamente reduzido em camundongos UCMS para todos os odores (Grupo: F (1, 10) = 12,35, p = 0,0056; Odor: F(2, 20) = 0,04381, p = 0,9572; Interação: F(2, 20) = 0,3622, p = 0,7006). (I) O índice de exploração de odores para cada odor está positivamente correlacionado com o escore de emocionalidade dos animais (OCT: Pearson R2 = 0,5601, F(1, 10) = 12,73, **p = 0,0051; PO: Pearson R2 = 0,4495, F(1, 10) = 8,165, *p = 0,0170; TMT: Pearson R2 = 0,5061, F(1, 10) = 10,25, **p = 0,0095). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig4v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Nome</td>
			<td>Abreviação</td>
			<td>Diluição</td>
			<td>Valência</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,4,5-Trimetiltiazol</td>
			<td>TMT</td>
			<td>5% em óleo mineral</td>
			<td>Negativo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-trans-octenal</td>
			<td>OUTUBRO</td>
			<td>1% em água</td>
			<td>Neutro</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urina fêmea do rato</td>
			<td>FU</td>
			<td>Puro</td>
			<td>Positivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urina de rato macho</td>
			<td>MU</td>
			<td>Puro</td>
			<td>Positivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Óleo de amendoim</td>
			<td>PO</td>
			<td>Puro</td>
			<td>Positivo</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Exemplos de odores com valência neutra, positiva e negativa.
Arquivo Suplementar 1: Protocolo para estresse leve crônico imprevisível de 4 semanas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/Supplementary%20File%201.docx" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>

Um teste de preferência olfativa para medir vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos

Depression is the single largest contributor to disability worldwide, affecting 280 million people annually. Beyond reduced activity and motivation, ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Fundamentais, ainda propriedades únicas do sistema olfativo dos roedores, levaram ao seu estudo crescente entre os biólogos. A avaliação relativamente simples de sua função é, então, também é necessário. Aqui nós descrevemos testes sensíveis para a caracterização da sensibilidade olfativa do mouse e preferência.

Teste Comportamental olfativo no rato adulto

O comprometimento da função olfativa é uma característica comum em muitos distúrbios neurodegenerativos, incluindo as doenças de Parkinson, Alzheimer e Huntington. No presente artigo, descrevemos um conjunto de testes para avaliar a discriminação e detecção de olfato em camundongos que podem ser usados para medir as habilidades olfativas em modelos de camundongos de doenças neurodegenerativas.

Ensaios olfativas para o Rato modelos de doenças neurodegenerativas

Este manuscrito descreve um protocolo para examinar o sistema olfativo de roedores. O teste de habituação/deshabituação olfativa permitirá que os investigadores determinem se um camundongo se habitua a um odor apresentado repetidamente e se o camundongo demonstra deshabituação quando apresentado a um novo odor.

Testes para Odor Discriminação e habituação em ratos

Apresentamos um teste olfativo simples e imparcial em camundongos. Com este protocolo, a discriminação olfativa, a preferência, a evitação e a sensibilidade a um novo odor em comparação com a água podem ser avaliadas em sessões comportamentais únicas. Este método é indicado para um único experimentador e a análise é baseada no processamento de vídeo assistido por computador.

Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador

Este trabalho apresenta um protocolo para a investigação de transmissão social de preferência alimentar em ratos. As vantagens e aplicações possíveis para este procedimento, por exemplo, na detecção de mudanças adiantadas em modelos do rato AD, são destacadas. Para concluir, a interpretação dos resultados à luz dos detalhes críticos são discutidos.

Avaliação da transmissão Social dos comportamentos de preferências alimentares

Aqui, treinamos os ratos em uma tarefa de aprendizagem associativa para testar a discriminação do odor. Este protocolo permite também para estudos sobre aprendizagem-induzido mudanças estruturais no cérebro.

Uma objetiva e reproduzível teste de aprendizagem olfactiva e discriminação em ratos

O modelo de rato de desespero crônico (MDL) da depressão consiste em sessões repetitivas de natação forçada e outra fase de natação retardada como leitura. Representa um modelo adequado para a indução de um estado crônico depressivo estável por pelo menos 4 semanas, para avaliar intervenções de tratamento subcrático e agudo.

Modelos Animais de Depressão - Modelo de Desespero Crônico (MDL)

Este artigo fornece uma descrição detalhada de um novo protocolo de viés de julgamento do mouse. Evidências da sensibilidade dessa tarefa olfativa de escavação ao estado afetivo também são demonstradas e sua utilidade em diversos campos de pesquisa é discutida.

Avaliação do viés de julgamento do rato através de uma tarefa de escavação olfativa

Inseto sistemas olfativos fornecem oportunidades únicas para a gravação odorant induzida por respostas nas formas de electroantennograms (EAG) e gravações sensillum simples (SSR), que são somadas as respostas de todos os neurônios olfativos receptor (ORNS), localizado na antena e daqueles alojados em individuais sensilla, respectivamente.

Medidas eletrofisiológicas partir de um sistema olfativo Traça

Fotólise de compostos enjaulado permite a produção de aumentos rápidos e localizados na concentração de vários compostos fisiologicamente ativos. Aqui, nós mostramos como obter patch-clamp gravações combinado com fotólise de cAMP gaiola ou enjaulado Ca para o estudo da transdução olfativos em dissociada do mouse neurônios sensoriais olfativos.

Flash Fotólise de Compostos Caged no Cilia de Olfactory neurônios sensoriais

Aprenda a avaliar vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos usando um teste de preferência olfativa. Este método permite investigar mecanismos neurais e fenótipos depressivos.

Um teste de preferência olfativa para medir vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos

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