Um teste de preferência olfativa para medir vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos

Um viés negativo no processamento emocional é uma característica importante dos transtornos depressivos. Esse viés é particularmente interessante para entender melhor a fisiopatologia da doença. Aqui, propomos um protocolo para a avaliação confiável da avaliação do odor inato usando odores associados a várias valências em modelos de depressão em camundongos machos e fêmeas.

Avaliar o viés hedônico em modelos de camundongos é essencial, tanto para avaliar melhor o fenótipo do tipo depressivo induzido, quanto como uma ferramenta para investigar os mecanismos neurais por trás dessas mudanças na atribuição de valência. No geral, este protocolo fornece novos caminhos para a pesquisa translacional para entender o mecanismo subjacente à depressão e a eficácia do tratamento. No futuro, tentaremos decifrar os circuitos cerebrais por trás desses processamentos emocionais interrompidos e potenciais mecanismos específicos do sexo, juntamente com a ação dos antidepressivos nessas vias.

Para começar, prepare a configuração experimental usando uma arena de dois compartimentos medindo 45 centímetros por 50 centímetros por 25 centímetros com paredes de plexiglass cinza e piso branco. Divida a arena em dois compartimentos iguais de 25 centímetros por 45 centímetros, usando uma parede de plexiglass cinza medindo 37 centímetros por 25 centímetros. Prenda a placa de Petri perfurada com adesivo e coloque-a na parte inferior da parede em cada compartimento.

Em seguida, use adesivo de dupla face ou Blu Tack para fixar cada placa de Petri verticalmente na parede da arena. Em seguida, posicione uma câmera dois metros acima da arena para registrar o comportamento dos animais e permitir o rastreamento automático de seus movimentos ao longo do experimento. Agora divida os camundongos em pelo menos dois grupos experimentais, os camundongos de controle e os camundongos do grupo de teste.

Transfira cada camundongo para a sala de testes comportamentais 30 minutos antes do início do experimento. Usando um medidor de lux, defina a iluminação na arena para aproximadamente 40 lux e verifique se a iluminação está distribuída uniformemente. Em seguida, adicione um papel de filtro limpo medindo 42,5 milímetros em cada uma das duas placas de Petri na arena.

No primeiro dia, coloque delicadamente todos os ratos da mesma gaiola juntos na arena por 10 minutos para reduzir a neofobia. No dia do teste, prepare em um frasco de vidro o odor sob uma capa química, usando a diluição correta. Dilua o odorante em óleo mineral ou água destilada, dependendo de suas propriedades químicas.

Pouco antes de testar cada mouse, use uma micropipeta com uma ponta de filtro para coletar 200 microlitros da solução de odor sob o capô. Distribuir a solução sobre o papel de filtro numa das placas de Petri. Deixe o segundo papel de filtro na outra placa de Petri sem tratamento.

Transfira as placas de Petri para a sala de testes. Em seguida, fixe-os verticalmente na parede da arena. Coloque cada mouse individualmente na arena no centro entre os dois compartimentos.

Grave o comportamento por 10 minutos usando a câmera aérea. Remova o mouse da arena após o término do período de observação. Remova o odor da placa de Petri da arena.

Em seguida, limpe a arena usando uma solução desinfetante a 70% de etanol e seque-a bem. Descarte o papel de filtro usado e prepare a próxima amostra de odor para o próximo mouse. Use um software de rastreamento automático para registrar a posição do mouse durante o teste.

Defina zonas distintas dentro da arena para análise. Durante a habituação, todos os camundongos passaram pelo menos 50 segundos nas zonas de odor e controle, indicando o envolvimento adequado da tarefa. É importante ressaltar que os camundongos expostos ao UCMS passaram o mesmo tempo na zona de odor que os controles.

Embora alguma diferença possa ser observada em outras zonas. Os camundongos fêmeas de controle se moveram significativamente mais do que as fêmeas UCMS quando expostos à urina masculina, mas não durante a habituação ou exposição ao TMT. Todas as leituras da resposta hedônica mostram diferenças significativas ou uma tendência estatística entre as mulheres controle e UCMS.

Esse efeito também é visível através do Índice Global de Exploração de Odor, que é uma medida combinada da resposta hedônica e locomotora. O Índice de Exploração de Odor correlacionou-se positivamente com a pontuação de emocionalidade para urina masculina e TMT em camundongos fêmeas. Em camundongos machos, não foram observadas diferenças durante a habituação ou na distância total percorrida pelo teste.

O tempo gasto na zona de odor mostra uma redução significativa da urina feminina e da exploração de TMT no UCMS em comparação com os controles. Os camundongos UCMS entram significativamente menos na zona de odor, ou tendem a fazê-lo, e apresentam um índice de preferência significativamente reduzido tanto para urina feminina quanto para TMT. O Índice de Exploração de Odor mostra uma resposta comportamental negativamente deslocada à urina feminina e TMT de camundongos UCMS em comparação com os controles, que tendem a ser positivamente correlacionados com a pontuação de emocionalidade do animal.