Name: Atividade convulsiva induzida por eletrochoque em larvas de Drosophila (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T16:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: Aprenda a identificar compostos anticonvulsivos em larvas de Drosophila para pesquisa em epilepsia. Este método permite avaliar respostas neurológicas e revelar alvos terapêuticos potenciais de forma eficiente.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Suporte de eletrodo</td><td>Instrumentos de Precisão Mundiais</td><td>M3301</td><td></td></tr><tr><td>Capilares de vidro</td><td>Instrumentos de Harvard</td><td>GC100F-10</td><td></td></tr><tr><td>Fio de tungstênio (99,95%)</td><td>Goodfellow Cambridge, Reino Unido</td><td></td><td>0,1 mm de diâmetro</td></tr><tr><td>Estimulador de tensão</td><td>Digitimer Ltd, Reino Unido</td><td>DS2A mkII&nbsp;</td><td>Estimulador Isolado de Tensão Constante&nbsp;</td></tr></tbody></table>

atividade convulsiva induzida por eletrochoque em larvas de drosophila

Seizure Activity Induced by Electroshock in Drosophila Larvae

Numerosas mutações de Drosophila exibem comportamento semelhante a convulsõesaprimorado 7,20. A base genética dessas mutações é variada, o que imita favoravelmente as causas genéticas igualmente variadas da epilepsia humana. Três das mutações de Drosophila mais estudadas são parabangsenseless (parabss), julius seizure (jus) e easily-shocked (eas). A mutação para...

Atividade convulsiva induzida por eletrochoque em larvas de Drosophila

Epilepsy presents a significant health burden that is exacerbated by high numbers of individuals who are drug-refractory. Whilst some drug-refractory ...

Usamos as larvas da drosófila da mosca-da-fruta para identificar novos tratamentos para a epilepsia. Assim como os humanos, as moscas podem carregar mutações genéticas que as tornam propensas a convulsões, e podemos reduzir a gravidade das convulsões em moscas com medicamentos anticonvulsivantes usados clinicamente. Os principais desafios são entender completamente o funcionamento do sistema nervoso da mosca, de modo que possamos mapear áreas para suas áreas equivalentes no cérebro humano.Cerca de 1% da população tem epilepsia e, desse número, cerca de 1/3 não responde bem aos medicamentos anticonvulsivantes usados atualmente. Estamos explorando novas maneiras de tratar a epilepsia. O uso de larvas de moscas em vez de moscas adultas é vantajoso porque as larvas vivem nos alimentos que comem. Isso torna a adição de drogas experimentais muito simples. A técnica que usamos para induzir convulsões também é simples, mas eficaz.Identificamos alguns medicamentos candidatos que têm potente atividade anticonvulsiva. Agora vamos nos concentrar em entender como esses medicamentos funcionam e testar se eles são seguros para uso em mamíferos.[Instrutor] Para começar, construa a sonda de eletrochoque para o procedimento. Certifique-se de que caules de aproximadamente 100 larvas errantes de terceiro ínstar de uma cepa de controle do tipo selvagem e de uma cepa mutante de convulsão estejam disponíveis. Remova uma única larva de terceiro ínstar errante da parede do frasco e coloque-a em uma pequena placa de Petri de plástico. Usando um pincel pequeno, lave suavemente as larvas com água bidestilada para remover qualquer resíduo de comida. Agora, transfira as larvas lavadas para um prato de plástico vazio. Com uma pinça, segure um pequeno fragmento de papel toalha e seque suavemente as larvas. Remova o excesso de água sem secar totalmente as larvas para evitar que grudem no prato. Deixe a larva se recuperar por 30 segundos para garantir fácil manuseio durante a colocação da sonda. Em seguida, veja a larva sob um microscópio de dissecção com ampliação de 15 a 20 vezes. Assim que a larva retomar o engatinhar normal, coloque suavemente a sonda de eletrochoque na superfície dorsal anterior acima do sistema nervoso central. Aplique pressão suficiente para comprimir a larva a cerca de um terço a metade de sua profundidade para garantir a condutividade adequada sem causar danos. Aplique um pulso de dois segundos de tensão constante usando um estimulador de tensão isolado, cuja intensidade foi previamente calibrada por meio de uma curva de titulação. Imediatamente, inicie um cronômetro assim que o choque for aplicado. Observe a larva em busca de sinais de paralisia transitória, espasmos ou comportamento de rolamento. Pare o cronômetro quando a larva se afastar claramente de sua posição original, indicando a recuperação por meio do movimento peristáltico para frente. Em seguida, enxágue os fios da sonda primeiro com etanol 100%, seguido de água bidestilada duplamente. Depois de inspecionar os fios sob ampliação, raspe suavemente qualquer resíduo usando uma pinça sem alterar o espaçamento do fio. Use a sonda para fornecer um pulso de dois segundos de tensões variadas para cerca de 15 larvas por voltagem para cada genótipo. Choque cada larva apenas uma vez. Meça o tempo de recuperação de cada larva e calcule o tempo médio de recuperação para cada voltagem entre os genótipos. Plote os tempos médios de recuperação em um gráfico e ajuste uma linha reta aos dados. Escolha uma voltagem que mostre uma diferença distinta e significativa no tempo de recuperação entre as larvas mutantes do tipo selvagem e da convulsão. Certifique-se de que a tensão selecionada não cause recuperação prolongada que prejudique o rendimento. Para a preparação de medicamentos, adicione medicamentos dissolvidos em um solvente apropriado diretamente na superfície do alimento sólido para moscas e dê tempo para que ele seja absorvido e evapore. Como alternativa, retire a comida dos frascos e derreta-a novamente. Quando a temperatura esfriar para 40 graus Celsius, adicione a solução do medicamento e misture bem usando um misturador de vórtice. Despeje aproximadamente cinco mililitros do alimento tratado de volta em frascos e deixe solidificar antes de usar. Execute um gradiente de concentração testando uma variedade de concentrações de medicamentos para determinar a dose ideal. Aplique eletrochoque nas larvas do genótipo teste ou expostas a um medicamento e meça o tempo de recuperação da convulsão. Aplique um tempo de corte de 300 segundos para eliminar durações de recuperação excessivamente longas. Registre apenas convulsões com tempos de recuperação superiores a 30 segundos como quantificáveis. A sonda foi calibrada e ficou evidente pelos ajustes de linha que o mutante mostrou um tempo de recuperação de convulsão aumentado em todas as voltagens em comparação com o tipo selvagem. Os tempos de recuperação das convulsões variaram significativamente entre os genótipos esofágicos, com o parabang sem sentido exibindo o maior tempo de recuperação e a convulsão de Julius o mais curto entre os mutantes. O tratamento com valproato de sódio e fenitoína reduziu significativamente o tempo de recuperação de convulsões no mutante sem sentido parabang em comparação com os controles do veículo.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Aqui nós descrevemos métodos eletrofisiológicos para medir a transmissão sináptica na junção neuromuscular de larva Drosophila. Liberação evocada é iniciado artificialmente estimulando os axônios do neurônio motor ea transmissão através do MNJ pode ser medida pela resposta pós-sináptica evocado no músculo.

Métodos eletrofisiológicos de gravação Potenciais Synaptic do MNJ de larvas de Drosophila

Usando de alta freqüência, estimulação elétrica, a atividade de apreensão-como pode ser induzida...

Ensaios Neurocircuit para Apreensões em mutantes de Epilepsia Drosophila</em

Este procedimento utiliza um canal activado pela luz azul de algas e células específicas de ferramentas de expressão genética para evocar potenciais sinápticos com pulsos de luz na junção neuromuscular (MNJ),...

Channelrhodopsin2 Estimulação Mediated de Potenciais Synaptic em Drosophila Junções Neuromusculares

Gravação eletrofisiológicas na Drosophila Embrião

O vídeo demonstra o registro extracelular da atividade neuronal do sistema nervoso central (SNC) de larvas de Drosophila. O SNC seccionado é posicionado em uma câmara de registro e a atividade elétrica de um nervo descendente é registrada para estabelecer a frequência de disparo da linha de base. Um agente de teste é então introduzido e a mudança na frequência de disparo é registrada para determinar o efeito excitatório ou inibitório do agente.

Registro extracelular da atividade elétrica no sistema nervoso central da drosófila

Um método simples para gravar os potenciais de campo extracelulares no larval do peixe-zebra é descrita prosencéfalo. O método proporciona um...

Prosencéfalo gravação eletrofisiológico em larval Zebrafish

O método para medir adulto Drosophila memória associativa é descrito. O ensaio é baseado na capacidade de tempo real para associar um odor apresentado com um reforçador negativa (choque eléctrico) e depois recupera esta informação numa altura posterior, permitindo que a memória a ser medido.

Drosophila Adulto Olfativo Choque Aprendizagem

Usando uma webcam e uma combinação de programas de software livre e de baixo custo, os padrões de locomotivas em Drosophila melanogaster podem ser analisadas para detectar diferenças na velocidade, distância e tempo de várias atividades motoras.

Um método de baixo custo para análise de Apreensão-como atividade e movimento em<em&gt; Drosophila</em

Este protocolo descreve um método para registrar a atividade elétrica descendente do sistema nervoso central Drosophila melanogaster para permitir que o custo-eficiente e conveniente de teste de agentes farmacológicos, mutações genéticas das proteínas neurais, e/ou o papel das vias fisiológicas inexploradas.

Eletrofisiológica gravação da atividade do sistema nervoso Central de terceiro ínstar Drosophila Melanogaster

Aqui, apresentamos um protocolo para o desenvolvimento e a caracterização de um modelo de zebrafish de epilepsia resultante da inibição transitória do gene DEPDC5.

Análise comportamental e fisiológica em um modelo de zebrafish de epilepsia

Aqui, apresentamos um protocolo para imagens ex vivo de cálcio em Drosophila adulta que expressam GCaMP6 para monitorar atividades epileptiformes. O protocolo fornece uma ferramenta valiosa para investigar eventos ictais em adultos com Drosophila através de imagens ex vivo de cálcio, permitindo a exploração dos potenciais mecanismos de epilepsia em nível celular.

Ex Vivo Imagem de cálcio para Drosophila Modelo de Epilepsia

Aprenda a identificar compostos anticonvulsivos em larvas de Drosophila para pesquisa em epilepsia. Este método permite avaliar respostas neurológicas e revelar alvos terapêuticos potenciais de forma eficiente.

Atividade convulsiva induzida por eletrochoque em larvas de Drosophila

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