Name: Medição de Monofosfato de Guanosina Cíclico (cGMP) em Tecidos Sólidos usando Ensaio Imunoenzimático Competitivo (ELISA) (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Aprenda a medir cGMP em tecidos sólidos usando ELISA competitivo. Este protocolo demonstra quantificação do segundo mensageiro em amostras de tecido porcino, auxiliando pesquisadores a estudar metabolismo do óxido nítrico e vias de sinalização.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Dierks, E. A., Burstyn, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+%28NO%29%2C+the+only+nitrogen+monoxide+redox+form+capable+of+activating+soluble+guanylyl+cyclase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide (NO), the only nitrogen monoxide redox form capable of activating soluble guanylyl cyclase.</a> Biochem Pharmacol. 51 (12), 1593-1600 (1996).</li>
<li>Koglin, M., Behrends, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+domain+of+the+alpha1+subunit+of+soluble+guanylyl+cyclase+is+necessary+for+activation+of+the+enzyme+by+nitric+oxide+and+YC-1+but+is+not+involved+in+heme+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A functional domain of the alpha1 subunit of soluble guanylyl cyclase is necessary for activation of the enzyme by nitric oxide and YC-1 but is not involved in heme binding.</a> J Biol Chem. 278 (14), 12590-12597 (2003).</li>
<li>Olson, L. J., Knych, E. T., Herzig, T. C., Drewett, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+guanylyl+cyclase+inhibitor+reverses+nitric+oxide-induced+vasorelaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Selective guanylyl cyclase inhibitor reverses nitric oxide-induced vasorelaxation.</a> Hypertension. 29 (1), 254-261 (1997).</li>
<li>Bailey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+supplementation+reduces+the+O2+cost+of+low-intensity+exercise+and+enhances+tolerance+to+high-intensity+exercise+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate supplementation reduces the O2 cost of low-intensity exercise and enhances tolerance to high-intensity exercise in humans.</a> J Appl Physiol (1985). 107 (4), 1144-1155 (2009).</li>
<li>Vanhatalo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+effects+of+dietary+nitrate+supplementation+on+blood+pressure+and+the+physiological+responses+to+moderate-intensity+and+incremental+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic effects of dietary nitrate supplementation on blood pressure and the physiological responses to moderate-intensity and incremental exercise.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 299 (4), R1121-R1131 (2010).</li>
<li>Qin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+role+of+nitric+oxide+in+complement-mediated+activation+of+platelets+from+mcd59a+and+mcd59b+double-knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">Balancing role of nitric oxide in complement-mediated activation of platelets from mcd59a and mcd59b double-knockout mice.</a> Am J Hematol. 84 (4), 221-227 (2009).</li>
<li>Radomski, M. W., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+l-arginine%2Fnitric+oxide+pathway+present+in+human+platelets+regulates+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">An l-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation.</a> PNAS. 87 (13), 5193-5197 (1990).</li>
<li>Thomas, D. D., Liu, X., Kantrow, S. P., Lancaster, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+lifetime+of+nitric+oxide%3A+Implications+for+the+perivascular+dynamics+of+NO+and+O2%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">The biological lifetime of nitric oxide: Implications for the perivascular dynamics of NO and O2.</a> PNAS. 98 (1), 355-360 (2001).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rat+skeletal+muscle+homogenates+for+nitrate+and+nitrite+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of rat skeletal muscle homogenates for nitrate and nitrite measurements.</a> J Vis Exp. (173), e62427(2021).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+roles+of+nitrate+and+nitrite+in+nitric+oxide+metabolism+in+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Potential roles of nitrate and nitrite in nitric oxide metabolism in the eye.</a> Sci Rep. 10 (1), 13166(2020).</li>
<li>Srihirun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+uptake+and+metabolism+in+human+skeletal+muscle+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Nitrate uptake and metabolism in human skeletal muscle cell cultures.</a> Nitric Oxide. 94, 1-8 (2020).</li>
<li>Montoliu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+nitric+oxide+and+atrial+natriuretic+peptide+changes+with+altered+cGMP+homeostasis+in+liver+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Correlation of nitric oxide and atrial natriuretic peptide changes with altered cGMP homeostasis in liver cirrhosis.</a> Liver Int. 25, 787-795 (2005).</li>
<li>Origlia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+cGMP+inversely+correlates+with+age+in+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol+Invest%22%5BJournal%5D)">Platelet cGMP inversely correlates with age in healthy subjects.</a> J Endocrinol Invest. 27 (2), RC1-RC4 (2004).</li>
<li>Calamera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fret-based+cyclic+GMP+biosensors+measure+low+cGMP+concentrations+in+cardiomyocytes+and+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Fret-based cyclic GMP biosensors measure low cGMP concentrations in cardiomyocytes and neurons.</a> Commun Biol. 2, 394(2019).</li>
<li>Rutkowski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+cGMP+signaling+shows+pronounced+differences+between+glomerular+endothelial+cells+and+podocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of cGMP signaling shows pronounced differences between glomerular endothelial cells and podocytes.</a> Sci Rep. 14, 26099(2024).</li>
<li>Straub, A. C., Beuve, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+for+measuring+cGMP+signaling+and+cGMP-mediated+vascular+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">A primer for measuring cGMP signaling and cGMP-mediated vascular relaxation.</a> Nitric Oxide. 117, 40-45 (2021).</li>
<li>Huang, K. T., Lin, T. J., Hsu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+cyclic+GMP+concentration+using+a+gold+nanoparticle-modified+optical+fiber%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Determination of cyclic GMP concentration using a gold nanoparticle-modified optical fiber.</a> Biosens Bioelectron. 26 (1), 11-15 (2010).</li>
<li>Cyclic gmp elisa kit. , 
 <a target="_blank" href="https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf">https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf</a> (2024).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+metabolism+in+porcine+ocular+tissues+determined+using+15N-labeled+sodium+nitrate+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate metabolism in porcine ocular tissues determined using 15N-labeled sodium nitrate supplementation.</a> Nutrients. 16 (8), 1154(2024).</li>
<li>Cgmp enzyme immunoassay kit, direct technical bulletin. , 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V">https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V</a> (2025).</li>
<li>Cyclic gmp competitive elisa lysate and homogenate samples. , 
 <a target="_blank" href="https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf">https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf</a> (2025).</li>
<li>Hamad, A. M., Range, S., Holland, E., Knox, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cGMP+by+soluble+and+particulate+guanylyl+cyclases+in+cultured+human+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cGMP by soluble and particulate guanylyl cyclases in cultured human airway smooth muscle.</a> Am J Physiol. 273 (4), L807-L813 (1997).</li>
<li>Mo, E., Amin, H., Bianco, I. H., Garthwaite, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+a+cellular+nitric+oxide%2FcGMP%2Fphosphodiesterase-5+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Kinetics of a cellular nitric oxide/cGMP/phosphodiesterase-5 pathway.</a> J Biol Chem. 279 (25), 26149-26158 (2004).</li>
<li>Corbin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3h%5Dsildenafil+binding+to+phosphodiesterase-5+is+specific%2C+kinetically+heterogeneous%2C+and+stimulated+by+cGMP%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">[3h]sildenafil binding to phosphodiesterase-5 is specific, kinetically heterogeneous, and stimulated by cGMP.</a> Mol Pharmacol. 63 (6), 1364-1372 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL de seringa oral transparente BD</td><td>Becton Dickinson</td><td>50382903052177</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de ensaio de fundo redondo de 14 mL</td><td>Falcão</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos de 2,0 ml, sortidos</td><td>Plásticos Olympus</td><td>24-283A</td><td></td></tr><tr><td>30-300 &micro; L pipeta multicanal&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Anidrido acético (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>400031</td><td>98% puro <forte>Perigoso</forte>: Inflamável, Corrosivo: queima gravemente a pele, danos aos olhos, Toxicidade aguda <forte>Manuseio seguro</forte>: Mantenha longe de fontes de ignição, trabalhe em uma área ventilada, use luvas</td></tr><tr><td>Marcador de acetilcolinesterase cGMP (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>481020</td><td>fosfato de potássio dibásico, cloreto de sódio,&nbsp; fosfato de potássio monobásico, albumina bovina, azida sódica, EDTA, cGMP Traçador AChE <forte>Perigo</forte>: Perigo para a saúde: toxicidade de órgãos por exposição repetida, Corrosivo: danos oculares Irritante cutâneo e respiratório <forte>Manuseio seguro</forte>: Trabalho em área ventilada, use luvas</td></tr><tr><td>Anti-soro ELISA cGMP (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>481022</td><td>fosfato de potássio dibásico, cloreto de sódio,&nbsp; fosfato de potássio monobásico, albumina bovina,&nbsp; azida de sódio, EDTA, coelho anti-cGMP policlonal Anti-soro <forte>Perigo</forte>: Perigo para a saúde: toxicidade de órgãos por exposição repetida, Corrosivo: danos oculares, Irritante cutâneo e respiratório, Toxicidade aguda <forte>Manuseio seguro</forte>: Trabalhe em uma área ventilada, use luvas</td></tr><tr><td>Padrão cGMP ELISA (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>481024</td><td>fosfato de potássio dibásico, cloreto de sódio,&nbsp; fosfato de potássio monobásico, albumina bovina,&nbsp; azida de sódio, EDTA, padrão cGMP Hazard: Perigo para a saúde: toxicidade de órgãos por exposição repetida, Corrosivo: danos oculares, Irritante cutâneo e respiratório Manuseio seguro: Trabalhe em uma área ventilada, use luvas</td></tr><tr><td>Kit ELISA GMP cíclico</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>581021</td><td></td></tr><tr><td>Concentrado de tampão ELISA 10X (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>400060</td><td>1 M de fosfato, 1% de BSA, 4 M de cloreto de sódio, 10 mM de EDTA, 0,1% de azida de sódio <forte>Perigo</forte>: Perigo para a saúde: toxicidade de órgãos por exposição repetida, Corrosivo: danos oculares Irritante cutâneo e respiratório <forte>Manuseio seguro</forte>: Trabalhe em uma área ventilada, guarde em um recipiente com tampa que possa ser fechada, use luvas</td></tr><tr><td>Reservatório de reagente ELISA</td><td>Pierce (agora Thermo Fisher Scientific)</td><td>15075</td><td></td></tr><tr><td>Reagente de Ellman (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>400050</td><td>fosfato de potássio dibásico, cloreto de sódio, fosfato de potássio monobásico, acetiltiocolina (iodeto), 5,5'-ditiobio-(ácido 2-nitrobenzóico) Perigo: Toxicidade aguda, Perigo para a saúde: toxicidade de órgãos, Corrosivo: Lesões oculares, Irritante cutâneo, irritante respiratório Manuseio seguro: Trabalhe em uma área ventilada, use luvas</td></tr><tr><td>Ácido clorídrico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320331</td><td><forte>Perigo</forte>: Corrosivo: corrói o metal, queima gravemente a pele, Danos oculares, Irritante respiratório <forte>Manuseio seguro</forte>: Trabalhe em uma área ventilada, use luvas</td></tr><tr><td>Nitrogênio líquido</td><td>Oxigênio de Robert</td><td></td><td>Nitrogênio <forte>Perigo</forte>: Gás comprimido: Risco de queimaduras criogênicas, congelamento, asfixia <forte>Manuseio seguro</forte>: Trabalhe em uma área ventilada, use luvas</td></tr><tr><td>Placa revestida com IgG anti-coelho de camundongo (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>400006</td><td> Perigo: Nenhum</td></tr><tr><td>Novo Classic MF Balance</td><td>Mettler Toledo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agitador Orbital&nbsp;</td><td>Stovall Life Science Inc. (agora IBI Scientific)</td><td>15-453-211 (varia)</td><td></td></tr><tr><td>Parafilme</td><td>Bemis Company, Inc.</td><td>3023-4526 (varia)</td><td></td></tr><tr><td>Polissorbato 20 (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>400035</td><td> Perigo: Nenhum</td></tr><tr><td>Hidróxido de potássio (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>400029</td><td>85% puro <forte>Perigo</forte>: Corrosivo: corrói metais e pele, Danos oculares, Toxicidade aguda <forte>Manuseio seguro</forte>: Trabalhe em uma área ventilada, use luvas</td></tr><tr><td>Homogeneizador Precellys Evolution</td><td>Tecnologias Bertin</td><td>PE000062-PEVO0-A</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Lysing Precellys Homogeneização de Tecidos Duros</td><td>Tecnologias Bertin</td><td>P000911-LYSK0-A</td><td></td></tr><tr><td>Leitor de microplacas Sense</td><td>HIDEX</td><td>425-301</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga Sorvall Legend Micro 17R</td><td>Thermo Fisher Científico</td><td>75002441</td><td></td></tr><tr><td>Pulverizador de tecidos</td><td>Britador de células</td><td>Kit de britador de células</td><td></td></tr><tr><td>Vórtice Gênio 2</td><td>Indústrias Científicas</td><td>SI-0246</td><td></td></tr><tr><td>Garrafa de lavagem</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z423092</td><td></td></tr><tr><td>Concentrado de tampão de lavagem 400X (no kit cGMP)</td><td>Companhia Química Cayman</td><td>400062</td><td>fosfato de potássio dibásico, fosfato de potássio monobásico, água <forte>Perigo</forte>: Corrosivo: Danos aos olhos, Toxicidade aguda, Irritante da pele, Toxicidade de órgãos <forte>Manuseio seguro</forte>: Trabalhe em uma área ventilada, use luvas</td></tr></tbody></table>

medição de monofosfato de guanosina cíclico (cgmp) em tecidos sólidos usando ensaio imunoenzimático competitivo (elisa)

Measurement of Cyclic Guanosine Monophosphate (cGMP) in Solid Tissues using Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Porcos domésticos de Yorkshire tratados com cloreto de sódio dietético (0,15 mmol / kg) ou nitrato marcado com N 15(0,15 mmol / kg) administrado uma vez por dia por cinco dias consecutivos como bolus em ração foram perfundidos com uma solução de heparina sódica (cloreto de sódio a 0,9%) antes da coleta de tecido; Todos os detalhes da coleta foram publicados anteriormente19. As concentrações de cGMP nos músculos glúteos e fígados de quatro porcos domésticos de Yorkshire foram medidas de acordo com o protocolo ELISA descrito. Os tecidos hepáticos foram diluídos na proporção de diluição de 1:5 e os músculos glúteos na proporção de diluição de 1:10, com ácido clorídrico (HCl) 0,1 N para precipitar as proteínas. Os homogeneizados diluídos em HCl foram acetilados e depois diluídos com tampão ELISA em uma proporção de diluição de 1:2 e 1:3 para as amostras de fígado e músculo glúteo. As concentrações de GMPc foram medidas conforme descrito acima. As absorbâncias foram convertidas em picomoles de cGMP por mililitro de amostra preparada e, em seguida, em nanomoles de cGMP por grama de tecido (nmol/g de tecido), conforme declarado no protocolo acima.
As concentrações de cGMP medidas nos tecidos hepáticos produziram resultados experimentais ideais nas condições acima. As concentrações de cGMP no grupo controle e no grupo tratado com nitrato no fígado suíno são de 0,0202 nmol/g ± 0,003 nmol/g de tecido e 0,0364 nmol/g ± 0,011 nmol/g de tecido, respectivamente (Figura 3). Vários valores confirmam a confiabilidade dos resultados. As absorbâncias dos poços B0 com os brancos subtraídos, que variam de 0,466 a 0,475, estão dentro da faixa de 0,3 UA a 1,0 UA, verificando o desenvolvimento suficiente de microplacas com o reagente de Ellman. A alta qualidade da curva padrão é exibida tanto por aumentos incrementais nas absorbâncias do padrão 1 para o padrão 8 quanto pela linearidade da curva padrão, verificada por um coeficiente de determinação de 0,99. A porcentagem <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> para cada poço medido (31,5%-71,2%) está entre 20% e 80%, validando que todas as amostras se enquadram na curva padrão. As amostras que possuem as características declaradas são adequadas para interpretação.
As concentrações de cGMP medidas nos tecidos musculares glúteos produziram resultados experimentais abaixo do ideal. O rótulo subótimo é atribuído aos resultados do músculo glúteo porque a maioria dos valores percentuais <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> dos poços do músculo glúteo (3,69%-27,3%) caiu abaixo de 20%, indicando que mais amostras diluídas foram necessárias para que as absorbâncias caíssem na curva padrão. As concentrações de GMPc no grupo controle e no grupo tratado com nitrato no músculo glúteo suíno são de 1,22 nmol/g ± 0,49 nmol/g de tecido e 0,732 nmol/g ± 0,18 nmol/g de tecido, respectivamente (gráfico não mostrado). As amostras de músculo glúteo compartilham as absorbâncias dos poços B0 e padrões das amostras de fígado. O uso dessas amostras abaixo do ideal pode levar a conclusões incorretas; portanto, é necessária a preparação de amostras mais diluídas e a remedição das concentrações de cGMP.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2.jpg"> 
Figura 3: concentração de cGMP no tecido hepático. A concentração média de cGMP de fígado suíno tratado com cloreto de sódio (0,15 mmol/kg) ou nitrato marcado com 15N (0,15 mmol/kg) em nmol/g de tecido. n = 4; as barras de erro indicam desvio padrão; os dados foram analisados pelo teste t de Welch; ns não significa significado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Medição de Monofosfato de Guanosina Cíclico (cGMP) em Tecidos Sólidos usando Ensaio Imunoenzimático Competitivo (ELISA)

A major pathway that produces cyclic guanosine monophosphate (cGMP) is the nitric oxide (NO)-cGMP pathway. In this pathway, NO stimulates the catalytic ...

measurement-cyclic-guanosine-monophosphate-cgmp-solid-tissues-using

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ensaiando in vitro a função das células β usando o mouse ilhotas isoladas de Langerhans é um componente importante no estudo da fisiopatologia do diabetes e terapêutica. Embora muitas aplicações a jusante estão disponíveis, este protocolo descreve especificamente a medida da intracelular monofosfato cíclico de adenosina (AMPc) como um parâmetro essencial para definir a função das células β.

Um Método para Mouse ilhotas pancreáticas Isolamento e intracelular cAMP Determinação

Nós geneticamente codificam o aminoácido não natural, p-azido-L-fenilalanina em várias posições orientadas nos GPCRs e mostram a versatilidade do grupo azido em diferentes aplicações. Estes incluem uma tecnologia de fotorreticulação alvo para identificar resíduos na bolsa de ligação ao ligando de um GPCR, e específica do local de modificação bioorthogonal de GPCRs com uma etiqueta de péptido epitopo ou sonda fluorescente.

Geneticamente codificados Molecular Probes para estudar G receptores acoplados à proteína

Biomarcadores de medição em amostras biológicas complexas é cada vez mais guiando tomada de decisão clínica. Nós descrevemos um método altamente sensível para medir simultaneamente miosina cardíaca binding protein-C, MB da creatina quinase e troponina I em amostras de soro de pacientes com infarto do miocárdio e controle de indivíduos saudáveis.

Um método de quantificação sensível e específico para Determinação do Serum miosina cardíaca Binding Protein-C por Imunoensaio electroquimioluminescência

Ativação persistente de inibição G receptores acoplados à proteína resulta em sensibilização da adenilil ciclase sinalização. Para identificar as vias moleculares essenciais, abordagens nonbiased são necessárias, no entanto, esta estratégia requer o desenvolvimento de um ensaio escalável sensibilização AMPc baseado em células. Relata-se um ensaio de sensibilização para a pequena molécula e triagem siRNA.

Induzida por drogas Sensibilização de adenililciclase: Racionalização Ensaio e miniaturização para pequenas moléculas e siRNA Triagem Applications

O onipresente segundo mensageiro c-di-GMP controla o crescimento e o comportamento de muitas bactérias. Desenvolvemos uma nova tecnologia baseada em espectrometria de massa composta de captura para identificar e caracterizar bioquimicamente as proteínas de ligação c-di-GMP em praticamente qualquer espécie bacteriana.

Captura de Espectrometria de Massa Compound - uma ferramenta poderosa para identificar novos c-di-GMP efetoras Proteínas

O S1P exerce seus diversos efeitos fisiológicos através da subfamília de receptores S1P (S1PRs). Aqui, um pipeline é descrito para expor sobre as estruturas e função das S1PRs.

Um pipeline para investigar as estruturas e caminhos de sinalização de receptores sphingosine 1-fosfato

Os dados publicados relativos às concentrações de peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP) no plasma humano são inconsistentes. Essas inconsistências podem ser devidas à falta de uma metodologia padronizada e validada para quantificar esse neuropeptídeo. Aqui, descrevemos um protocolo validado de ensaio imunoenzimático (ELISA) para purificar e quantificar CGRP em plasma humano.

Detecção e quantificação de peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP) em plasma humano usando um ensaio imunoenzimático modificado

O protocolo apresentado neste estudo ilustra a eficácia do Detector de Diferença de AMPc In Situ  na medição do AMPc através de dois métodos. Um método utiliza um espectrofotômetro de leitura de placas de 96 poços com células HEK-293. O outro método demonstra células HASM individuais sob um microscópio fluorescente.

Dinâmica de cAMP em tempo real em células vivas usando o detector de diferença de cAMP fluorescente in situ

Apresentamos um ensaio ELISA sanduíche validado usando novos anticorpos monoclonais anti-HER2. Este ensaio permite a quantificação precisa da proteína HER2 ligada e liberada a partir de células cultivadas in vitro e outras amostras, incluindo sangue e tecidos.

Ensaio imunoquímico validado para determinação abrangente do receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano liberado e ligado às células

É amplamente entendido que forças mecânicas no corpo pode influenciar a diferenciação e proliferação celular. Aqui apresentamos um protocolo de vídeo demonstrando o uso de um biorreator custom-built para a entrega de deformação de tração uniaxial cíclicos às células-tronco cultivadas em substratos flexíveis micropatterned.

A estimulação mecânica de Células-Tronco Usando Strain Uniaxial Cíclico

Aprenda a medir cGMP em tecidos sólidos usando ELISA competitivo. Este protocolo demonstra quantificação do segundo mensageiro em amostras de tecido porcino, auxiliando pesquisadores a estudar metabolismo do óxido nítrico e vias de sinalização.

Medição de Monofosfato de Guanosina Cíclico (cGMP) em Tecidos Sólidos usando Ensaio Imunoenzimático Competitivo (ELISA)

Explorar mais vídeos