Um modelo de camundongo para avaliar os resultados estruturais e funcionais de longo prazo após a reversão da obstrução ureteral unilateral prolongada

Meu laboratório trabalha nos mecanismos e na terapia para melhorar os resultados a longo prazo após a lesão renal, e o foco específico deste protocolo é desenvolver uma ferramenta para estudar os resultados a longo prazo após a reversão da obstrução urinária. Desenvolvemos um modelo de camundongo de obstrução ureteral reversível unilateral, que nos permite avaliar os resultados funcionais e estruturais a longo prazo da reversão da obstrução urinária no rim. Outros métodos requerem múltiplas cirurgias ou experiência microcirúrgica, às quais a maioria dos laboratórios não tem acesso. Além disso, por se tratar de obstrução unilateral, a maioria dos outros métodos não permite a avaliação funcional da recuperação sem a realização de testes de função renal dividida. Na verdade, existem apenas dois. A primeira é a colocação consistente da pinça vascular na mesma posição no ureter proximal em cada experimento, e a segunda é a remoção da pinça vascular vários dias depois, sem causar danos ao ureter ou rim.

[Raquel] Para começar, prepare o lado cirúrgico de um camundongo anestesiado com anti-sépticos. Faça uma incisão dorsal longitudinal de 1,5 centímetro ao longo da linha média através da pele e das camadas subcutâneas usando tesouras e pinças. Faça uma pequena incisão no músculo do flanco esquerdo e na fáscia acima do rim. Em seguida, com um par de pinças, exteriorize o rim esquerdo. Usando pinças rombas. Disseque cuidadosamente a gordura no pólo inferior e algum tecido conjuntivo próximo ao ureter. Localize a região do ureter. Em seguida, separe o ureter junto com seu tecido conjuntivo do pedículo renal para evitar a inclusão da veia e artéria renal com a pinça. Use aplicadores de grampo para abrir o grampo vascular e posicione-o diretamente abaixo da pelve renal no ureter. Use as marcações no clamp para garantir que a pressão uniforme seja aplicada em todos os mouses. Agora use um cotonete estéril embebido em solução salina para empurrar suavemente o rim com a pinça de volta para o espaço retroperitoneal. Em seguida, suture a camada muscular usando uma sutura absorvível. Use clipes de pele para fechar a camada de pele. Para remover a pinça ureteral, remova os clipes da ferida e limpe a área cirúrgica sem remodelar usando as incisões originais para acessar a pinça. Reabra a camada muscular e exponha o espaço retroperitoneal. Use uma pinça para localizar cuidadosamente a pinça no espaço retroperitoneal sem exteriorizar o rim. Com aplicadores de pinça, abra suavemente a pinça enquanto puxa o tecido circundante usando uma pinça para removê-lo com segurança. Agora exteriorize o rim para inspecionar a pelve renal em busca de obstrução. Uma pelve renal edemaciada confirma hidronefrose. Empurre o rim de volta para o espaço retroperitoneal usando um cotonete estéril embebido em solução salina e suture a incisão fechada conforme demonstrado. Para realizar a nefrectomia contralateral, reabra o local dorsal usando a incisão cutânea original. Em tamanho, o músculo do flanco direito e a fáscia acima do rim. Em seguida, exteriorize o rim direito usando uma pinça. Segure o rim direito com uma pinça lisa e curva e disseque os pólos superior e inferior do tecido circundante. Depois de liberar o rim, amarre uma sutura de seda Foro ao redor dos vasos renais e ureter usando um nó cirúrgico duplo. Aguarde aproximadamente 30 segundos até que o rim escureça. Em seguida, segure-o com a pinça curva lisa e remova-o cortando distalmente ao nó usando uma tesoura curva. Empurre suavemente o pedículo renal restante de volta para o espaço retroperitoneal usando um cotonete estéril embebido em solução salina e, em seguida, feche as camadas muscular e cutânea usando suturas e clipes. As medidas típicas de sobrevida e função renal foram realizadas 84 dias após a obstrução ureteral unilateral reversível. Estudos funcionais compararam a obstrução ureteral unilateral reversível com nefrectomia isolada para nitrogênio ureico sanguíneo, taxa de filtração glomerular transdérmica e osmolaridade urinária após 18 horas de privação hídrica. Os valores de osmolaridade urinária foram marcadamente menores do que os camundongos controle de nefrectomia nos mesmos momentos.