Name: Limpeza óptica transitória usando moléculas absorventes para imagens ex vivo e in vivo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T16:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Aprenda a usar a tartrazina como agente de limpeza óptica transitória para imagens ex vivo e in vivo. Este protocolo demonstra como melhorar a profundidade e a clareza da imagem em tecidos biológicos de forma rápida e reversível.

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<ol><li>Yun, S. H., Kwok, S. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+in+diagnosis%2C+therapy+and+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Light in diagnosis, therapy and surgery.</a> Nat Biomed Eng. 1 (1), 0008(2017).</li>
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<li>Ertürk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+3D+histology+powered+by+tissue+clearing%2C+omics+and+AI%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Deep 3D histology powered by tissue clearing, omics and AI.</a> Nat Methods. 21 (7), 1153-1165 (2024).</li>
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<li>Miller, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+penetration+depth+in+optical+coherence+tomography+and+photoacoustic+microscopy+in+vivo+enabled+by+absorbing+dye+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Optica%22%5BJournal%5D)">Enhanced penetration depth in optical coherence tomography and photoacoustic microscopy in vivo enabled by absorbing dye molecules.</a> Optica. 12 (1), 24-30 (2025).</li>
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<li>Zuo, T., Tao, C., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absorbing+molecules+as+optical+clearing+agents+improve+the+resolution+and+sensitivity+of+photoacoustic+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Lett%22%5BJournal%5D)">Absorbing molecules as optical clearing agents improve the resolution and sensitivity of photoacoustic microscopy.</a> Opt Lett. 50 (7), 2282-2285 (2025).</li>
<li>Narawane, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+clearing+with+Tartrazine+enables+deep+transscleral+imaging+with+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Photonics+Eng%22%5BJournal%5D)">Optical clearing with Tartrazine enables deep transscleral imaging with optical coherence tomography.</a> J Biomed Photonics Eng. 29 (12), 120501(2024).</li>
<li>Ueda, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+applications+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its applications in neuroscience.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (2), 61-79 (2020).</li>
<li>Mai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+cellular+mapping+in+mouse+using+standard+IgG+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Whole-body cellular mapping in mouse using standard IgG antibodies.</a> Nat Biotechnol. 42, 617-627 (2024).</li>
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<li>Sai, T., Saba, M., Dufresne, E. R., Steiner, U., Wilts, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+refractive+index+fluids+using+the+Kramers-Kronig+relations%5BTitle%5D)+AND+%22Faraday+Discuss%22%5BJournal%5D)">Designing refractive index fluids using the Kramers-Kronig relations.</a> Faraday Discuss. 223, 136-144 (2020).</li>
<li>Yu, T., Zhu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strongly+absorbing+molecules+make+tissue+transparent%3A+A+new+insight+for+understanding+tissue+optical+clearing%5BTitle%5D)+AND+%22Light+Sci+Appl%22%5BJournal%5D)">Strongly absorbing molecules make tissue transparent: A new insight for understanding tissue optical clearing.</a> Light Sci Appl. 14 (1), 10(2025).</li>
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<li>Wang, F., Zhou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+mice%27%3A+Deep-tissue+live+imaging+using+food+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Transparent mice': Deep-tissue live imaging using food dyes.</a> Commun Biol. 7 (1), 1307(2024).</li>
<li>Yu, H., Liu, J. -B., Ma, Y. -S., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+live+mice+offer+more+possibilities+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Innov+Med%22%5BJournal%5D)">Transparent live mice offer more possibilities for biomedical research.</a> Innov Med. 2 (4), 100098(2024).</li>
<li>Shabbir, M. W., Biswas, S., Kajla, R., Nadella, S., Ou, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+refractive+index+fluids+of+food+dye+for+light+propagation+through+scattering+media%5BTitle%5D)+AND+%22MRS+Commun%22%5BJournal%5D)">Designing refractive index fluids of food dye for light propagation through scattering media.</a> MRS Commun. , (2025).</li>
<li>Scheele, C. L. G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphoton+intravital+microscopy+of+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Multiphoton intravital microscopy of rodents.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 89(2022).</li>
<li>Schmidt, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+II+fluorescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Near-infrared II fluorescence imaging.</a> Nat Rev Methods Primers. 4 (1), 23(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Balança Analítica</td><td>HZK</td><td>FA220S</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de anestesia animal</td><td>RWD ciências da vida co</td><td>TAIJI-IE</td><td>Anestésicos inalatórios</td></tr><tr><td>Injeção de Atipamezol HCL 5 mg / mL</td><td>Covertus</td><td>82124</td><td>Anestesia injetável</td></tr><tr><td>Câmera CMOS</td><td>Laboratórios Thor</td><td>CS165CU/M, Zelux</td><td></td></tr><tr><td>Injeção de dexmedetomidina HCL 5 mg / 10 mL</td><td>Covertus</td><td>72960</td><td>Anestesia injetável</td></tr><tr><td>Iluminador de luz de fibra</td><td>RWD ciências da vida co</td><td>76301</td><td>Fonte de luz para iluminação superior</td></tr><tr><td>Lâminas de vidro</td><td>CravitySci</td><td>0303-2122</td><td>Lâminas de microscópio de super grau</td></tr><tr><td>Cobertor Homeotérmico</td><td>RWD ciências da vida co</td><td>69027</td><td>Controlador de temperatura para animais</td></tr><tr><td>Processamento de imagem</td><td>OpenCV</td><td>Pitão</td><td>Software</td></tr><tr><td>Seringa de insulina 0,5 mL 29 g</td><td>Ponto de conforto</td><td>26028</td><td>Anestesia injetável</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Covertus</td><td>029405 de referência</td><td>Anestésicos inalatórios</td></tr><tr><td>Injeção de Ketmine HCL 100 mg / mL</td><td>Dechra</td><td>20042240</td><td>Anestesia injetável</td></tr><tr><td>Fonte de luz LED</td><td>GGE Corp</td><td>TLB-01</td><td>Fonte de luz para iluminação superior</td></tr><tr><td>Lente</td><td>Laboratórios Thor</td><td>MVL4WA</td><td>Distância focal de 3,5 mm e abertura f/1.4</td></tr><tr><td>Neves</td><td>Igreja e Dwight</td><td>L 1224</td><td>Creme depilatório</td></tr><tr><td>PBS ph 7,4 (1x)</td><td>Gibco</td><td>2902869</td><td>Anestesia injetável</td></tr><tr><td>Ponta Q</td><td>Empresa puritana de produtos médicos</td><td>Hospital 806-WC</td><td></td></tr><tr><td>SeaPlaque Agarose</td><td>Lonza</td><td>50101</td><td>Químico</td></tr><tr><td>Tartrazina</td><td>MilliporeSigma</td><td>Número CAS: 1934-21-0</td><td>Químico</td></tr><tr><td>Pipeta de transferência</td><td>Marca de pescador</td><td>13-711-9AMMD</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotômetro UV-VIS-NIR</td><td>Shimadzu</td><td>Especificações sólidas-3700i</td><td>Instrumento</td></tr><tr><td>Frascos</td><td>Qorpak</td><td>242633</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas volumétricas</td><td>Eppendorf research plus</td><td>3123000063</td><td>100-1000 e micro; L</td></tr><tr><td>Sistema de purificação de água</td><td>Ciência da avidez</td><td>SOLO S</td><td>Instrumento</td></tr></tbody></table>

limpeza óptica transitória usando moléculas absorventes para imagens ex vivo e in vivo

Transient Optical Clearing Using Absorbing Molecules for Ex Vivo and In Vivo Imaging

Demonstração da transparência óptica em tecido peitoral de frango ex vivo Para investigar a propagação da luz através do tecido ex vivo , usamos pedaços fatiados de peito de frango desossado cru com espessuras de 1,5 mm, 2,5 mm e 3,5 mm (Figura 2B). Os tecidos foram cortados paralelamente às fibras colágenas, garantindo uma orientação consistente das fibras musculares. As imagens foram t...

Limpeza óptica transitória usando moléculas absorventes para imagens ex vivo e in vivo

Dynamic imaging is a foundational tool in biology and medicine, but it is limited by light scattering in live tissues caused by refractive index ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Descrevem-se os métodos de imagiologia que usamos para investigar a distribuição e a mobilidade das proteínas fluorescentes transfectadas residentes no retículo endoplasmático (ER), por meio da imagem confocal de células vivas. Também analisamos ultraestruturalmente o efeito de sua expressão na arquitetura deste compartimento subcelular.

Visualização do retículo endoplasmático Subdomains em células cultivadas

Para obter imagens de alta resolução de células marcadas com fluorescência dentro de grandes tecidos, idealmente, as amostras biológicas devem ser visualizadas sem seccionamento. 3DISCO é um procedimento simples de limpeza de tecidos baseado na incubação sequencial com solventes orgânicos. Após a limpeza, os órgãos tornam-se transparentes, permitindo uma varredura a laser de ponta a ponta da amostra.

Imagem Limpa Sistemas Biológicos intactas em um nível celular por 3DISCO

O uso de fluoróforos para imagens in vivo pode ser bastante limitado por opsonização, depuração rápida, baixa sensibilidade de detecção e efeitos citotóxicos no hospedeiro. O encapsulamento de fluoróforos em lipossomas por hidratação e extrusão de filme leva à extinção e proteção de fluorescência, o que permite imagens in vivo com alta sensibilidade de detecção.

Fluorescência-têmpera de um Fluoróforo encapsulado em lipossomas Near-infrared como ferramenta para In Vivo Imageamento óptico

As técnicas de limpeza óptica estão revolucionando a forma como os tecidos são visualizados. Neste relatório, descrevemos modificações do protocolo original Clear Lipid-exchanged Acrylamide-hybridized Rigid Imaging-hYdrogel (CLARITY) que produz resultados mais consistentes e menos dispendiosos.

Clearing óptica do Sistema Nervoso Central Rato Usando a claridade passiva

Devido ao alto teor lipídico, o tecido adiposo tem sido desafiador para visualizar usando métodos histológicos de tradicionais. Adipo-Clear é um tecido de limpeza técnica que permite que a rotulagem robusto e alta resolução imagem fluorescente volumétrica do tecido adiposo. Aqui, descrevemos os métodos para a preparação da amostra, pré-tratamento, coloração, limpeza e montagem para a imagem latente.

Adipo-Clear: Um método de compensação por imagem tridimensional do tecido adiposo tecido

A combinação da rotulagem do anticorpo, do esclarecimento ótico, e da microscopia de luz avançada permite a análise tridimensional de estruturas ou de órgãos completos. Descrito aqui é um método simples para combinar o Immunolabeling de fatias de rim grossas, o esclarecimento ótico com cinnamate do Ethyl, e a imagem latente confocal que permite o visualização e a quantificação de estruturas tridimensionais do rim.

Esclarecimento ótico e imagem latente do tecido Immunolabeled do rim

A imagem in vivo é uma ferramenta poderosa para o estudo da biologia na saúde e na doença. Este protocolo descreve imagens transpupilares da retina de camundongos com um microscópio padrão de dois fótons. Também demonstra diferentes métodos de imagem in vivo para marcar fluorescentemente múltiplas coortes celulares da retina.

Imagem transpupilar de dois fótons in vivo da retina do rato

A microscopia estimulada de dispersão de Raman (SRS) permite imagens livres de rótulos de biomoléculas com base em sua vibração intrínseca de ligações químicas específicas. Neste protocolo, a configuração instrumental de um microscópio de srs e fluorescência de dois fótons integrado é descrita para visualizar estruturas celulares na medula espinhal de camundongos vivos.

In vivo Imagem de tecidos biológicos com fluorescência combinada de dois fótons e microscopia de dispersão de Raman estimulada

Aqui, é descrito um método para tornar os tecidos vegetais transparentes, mantendo a estabilidade das proteínas fluorescentes. Esta técnica facilita a imagem profunda de tecidos vegetais limpos sem seção física.

Limpeza Óptica de Tecidos Vegetais para Imagem de Fluorescência

Este protocolo combina limpeza óptica e imunomarcação para imagens confocais de volume total de organoides retinianos de montagem total. Ele preserva a estrutura 3D, permitindo a visualização detalhada das principais vias neuronais, melhorando o estudo da maturação da retina, organização espacial e suas potenciais aplicações na modelagem de doenças e medicina personalizada.

Visualização de organoides retinianos de montagem completa com resolução celular

Aprenda a usar a tartrazina como agente de limpeza óptica transitória para imagens ex vivo e in vivo. Este protocolo demonstra como melhorar a profundidade e a clareza da imagem em tecidos biológicos de forma rápida e reversível.

Limpeza óptica transitória usando moléculas absorventes para imagens ex vivo e in vivo

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