Name: Técnica de injeção sub-retiniana transescleral minimamente invasiva otimizada em camundongo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-25T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Aprenda uma técnica otimizada de injeção sub-retiniana transescleral minimamente invasiva em camundongos para estudos de terapias de doenças retinianas hereditárias. Este método melhora a reprodutibilidade e reduz danos cirúrgicos.

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<ol><li>Trapani, I., Banfi, S., Simonelli, F., Surace, E. M., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+inherited+retinal+degenerations%3A+prospects+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of inherited retinal degenerations: prospects and challenges.</a> Hum Gene Ther. 26, 193-200 (2015).</li>
<li>Peng, Y., Tang, L., Zhou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+Injection%3A+A+Review+on+the+Novel+Route+of+Therapeutic+Delivery+for+Vitreoretinal+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Res%22%5BJournal%5D)">Subretinal Injection: A Review on the Novel Route of Therapeutic Delivery for Vitreoretinal Diseases.</a> Ophthalmic Res. 58, 217-226 (2017).</li>
<li>Simunovic, M. P., Xue, K., Jolly, J. K., MacLaren, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+Functional+Recovery+Following+Limited+Iatrogenic+Macular+Detachment+for+Retinal+Gene+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Structural and Functional Recovery Following Limited Iatrogenic Macular Detachment for Retinal Gene Therapy.</a> JAMA Ophthalmol. 135, 234-241 (2017).</li>
<li>Parikh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Alternative+and+Validated+Injection+Method+for+Accessing+the+Subretinal+Space+via+a+Transcleral+Posterior+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An Alternative and Validated Injection Method for Accessing the Subretinal Space via a Transcleral Posterior Approach.</a> J Vis Exp. (118), e54808(2016).</li>
<li>Testa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-year+follow-up+after+unilateral+subretinal+delivery+of+adeno-associated+virus+in+patients+with+Leber+congenital+Amaurosis+type+2%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Three-year follow-up after unilateral subretinal delivery of adeno-associated virus in patients with Leber congenital Amaurosis type 2.</a> Ophthalmology. 120, 1283-1291 (2013).</li>
<li>Ghazi, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+retinitis+pigmentosa+due+to+MERTK+mutations+by+ocular+subretinal+injection+of+adeno-associated+virus+gene+vector%3A+results+of+a+phase+I+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Treatment of retinitis pigmentosa due to MERTK mutations by ocular subretinal injection of adeno-associated virus gene vector: results of a phase I trial.</a> Hum Genet. 135, 327-343 (2016).</li>
<li>Bennett, J., Anand, V., Acland, G. M., Maguire, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+comparison+of+in+vivo+reporter+gene+expression+after+recombinant+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Cross-species comparison of in vivo reporter gene expression after recombinant adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Methods Enzymol. 316, 777-789 (2000).</li>
<li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garcia Garrido, M., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods Mol Biol. 935, 343-349 (2013).</li>
<li>Hejri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-surgical+method+for+subretinal+delivery+by+trans-scleral+microneedle+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Bioeng+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">A non-surgical method for subretinal delivery by trans-scleral microneedle injection.</a> Bioeng Transl Med. 10 (3), e10755(2025).</li>
<li>Sastry, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscope-Integrated+OCT-Guided+Volumetric+Measurements+of+Subretinal+Blebs+Created+by+a+Suprachoroidal+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Microscope-Integrated OCT-Guided Volumetric Measurements of Subretinal Blebs Created by a Suprachoroidal Approach.</a> Transl Vis Sci Technol. 10, 24(2021).</li>
<li>Blanc, V. F., Jacob, J. L., Milot, J., Cyrenne, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oculorespiratory+reflex+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Anaesth%22%5BJournal%5D)">The oculorespiratory reflex revisited.</a> Can J Anaesth. 35, 468-472 (1988).</li>
<li>Dewar, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oculocardiac+reflex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+Med%22%5BJournal%5D)">The oculocardiac reflex.</a> Proc R Soc Med. 69, 373-374 (1976).</li>
<li>Katzung, B. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKatzung%2C+BG+%22Basic+%26amp%3B+clinical+pharmacology%22">Basic &amp; clinical pharmacology</a>. , 9th ed, Lange Medical Books/McGraw Hill. New York, USA. (2004).</li>
<li>Mai, X., Huang, S., Chen, W., Ng, T. K., Chen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+Optical+Coherence+Tomography+to+a+Mouse+Model+of+Retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy.</a> J Vis Exp. (179), e63421(2022).</li>
<li>L'Abbate, D., Prescott, K., Geraghty, B., Kearns, V. R., Steel, D. H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+considerations+for+optimising+subretinal+injections%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Biomechanical considerations for optimising subretinal injections.</a> Surv Ophthalmol. 69, 722-732 (2024).</li>
<li>Huang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injection+in+mice+to+study+retinal+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Subretinal injection in mice to study retinal physiology and disease.</a> Nat Protoc. 17, 1468-1485 (2022).</li>
<li>Stockslager, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+method+for+automated+measurement+of+glass+micropipette+tip+geometry%5BTitle%5D)+AND+%22Precis+Eng%22%5BJournal%5D)">Optical method for automated measurement of glass micropipette tip geometry.</a> Precis Eng. 46, 88-95 (2016).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Injeção de cloreto de sódio a 0,9%, USP</td><td>Hospira</td><td>PAA130066</td><td></td></tr><tr><td>Solução oftálmica de sulfato de atropina a 1%, USP</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-215-05</td><td></td></tr><tr><td>30&deg; faca de diamante</td><td>Katena</td><td>K2-6560</td><td></td></tr><tr><td>Iluminador duplo de pescoço de ganso LED AmScope 6W</td><td>AmScope</td><td>LED-11CR</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Vannas angulada</td><td>Roboz</td><td>RS-5618</td><td></td></tr><tr><td>Solução de irrigação estéril BSS</td><td>Alcon</td><td>289010-0902</td><td></td></tr><tr><td>Colírio dilatador de ciclomidril</td><td>Alcon</td><td>0065-0359-02</td><td>0,2% ciclopentolato, 1% fenilefrina</td></tr><tr><td>Ponteiras de pipeta epT.I.P.S. MicroloaderTM</td><td>Eppendorf</td><td>5242 956.003</td><td></td></tr><tr><td>Microinjetor FemtoJet 4i</td><td>Eppendorf</td><td>E5252000021</td><td>Produto descontinuado</td></tr><tr><td>GenTeal Tears pomada lubrificante para os olhos</td><td>Alcon</td><td>16027802</td><td></td></tr><tr><td>Agulhas de microinjeção de vidro</td><td>Clunbury Científica</td><td>B100-58-50</td><td>30&deg; bisel. Diâmetro: 50 &micro; m externo, 29 &micro; m interno</td></tr><tr><td>Solução de isoflurano</td><td>Covetrus</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de imagem da retina MICRON IV com OCT guiada por imagem</td><td>Phoenix</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>estereomicroscópio SteREO Discovery.V8</td><td>Zeiss</td><td>495015-0001-000</td><td></td></tr><tr><td>Pinça dentada de travamento Stern-Castroviejo</td><td>Katena</td><td>K5-2552</td><td></td></tr><tr><td>Pinça dentada</td><td>Roboz</td><td>RS-5172</td><td></td></tr><tr><td>Fios de limpeza de tungstênio para agulhas de calibre 23s</td><td>Hamilton</td><td>18306</td><td></td></tr><tr><td>Lanças de Olho Ultracell PVA</td><td>BVI Médico</td><td>40400-8</td><td></td></tr><tr><td>Seringas de insulina Ultra-Fine2015&nbsp;</td><td>BD</td><td>328438</td><td>3/10 mL, 8 mm (5/16"), 31G</td></tr></tbody></table>

técnica de injeção sub-retiniana transescleral minimamente invasiva otimizada em camundongo

Optimized Minimally Invasive Transscleral Subretinal Injection Technique in Mouse

Uma injeção bem-sucedida usando esta técnica transescleral gera uma bolha sub-retiniana observável na OCT imediatamente após o procedimento de injeção (Figura 2A). Dado o desafio técnico desta técnica, a etapa de imagem é indispensável para identificar animais injetados com sucesso. Para pesquisadores que planejam usar essa técnica para experimentos de terapia genética, recomendamos a realização de injeções práticas com partículas de vírus adeno-associados (AAV) carregando um gene repórter f...

Técnica de injeção sub-retiniana transescleral minimamente invasiva otimizada em camundongo

The conventional method of material delivery to the subretinal space in the mouse involves dual perforation of the neural retina, which causes extensive ...

optimized-minimally-invasive-transscleral-subretinal-injection

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Esta técnica cirúrgica ilustra a injecção de vectores de terapia genética e de células estaminais para o espaço sub-retiniano do olho do rato.

Injeção de sub-retiniana de Vetores da terapia genética e células-tronco no olho do rato

Fonte: Park, S. W., et al. Abordagem límbica-injeção sub-retiniana de vetores virais para terapia gênica no epitélio pigmentar da retina de camundongos. J. Vis. Exp. (2015)O vídeo descreve o método de injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina (EPR) em um modelo de camundongo. Ele detalha o procedimento desde a anestesia e preparação ocular até a entrega precisa do vetor lentiviral, garantindo a integração e expressão do gene no EPR.

Injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina em um modelo de camundongo

Fonte: Parikh, S., et al. Um método de injeção alternativo e validado para acessar o espaço sub-retiniano por meio de uma abordagem posterior transcleral. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra o procedimento para entregar um corante fluorescente no espaço sub-retiniano de um camundongo. O processo envolve anestesiar o camundongo, preparar o olho, fazer incisões precisas para acessar o espaço sub-retiniano e injetar o corante para criar um descolamento de retina controlado. Essa técnica...

Entrega de um corante fluorescente no espaço sub-retiniano de um camundongo

Aqui apresentamos um protocolo aceito pela comunidade em formato multimídia para injeção sub-retina de um bolus de células RPE em ratos e camundongos. Essa abordagem pode ser usada para determinar potenciais de resgate, perfis de segurança e capacidades de sobrevivência de células RPE enxertadas após implantação em modelos animais de degeneração retiniana.

Realizando Subretinal Injeções em roedores para entregar epitélio pigmentar da retina células em suspensão

A injeção direta no nervo óptico do rato é útil para a pesquisa regenerativa. Demonstramos uma técnica minimamente invasiva para injeção direta em um nervo óptico de rato que não envolve a abertura do crânio. Usando este método, as complicações cirúrgicas são minimizadas e a recuperação é mais rápida.

Técnica minimamente invasiva para a injeção em Rat Optic Nerve

A injeção sub-retiniana é uma técnica cirúrgica para entrega gênica eficaz ao epitélio pigmentar da retina no olho do camundongo.  Aqui descrevemos um método fácil e replicável para injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina em camundongos experimentais.

Limbo Abordagem-Subretinal injeção de vetores virais para terapia genética em ratos Retinal Pigment Epithelium

As injeções sub-retinianas são a técnica mais comum para administrar grandes agentes terapêuticos, como proteínas e vetores virais, aos fotorreceptores e ao epitélio pigmentar da retina. Um método alternativo em camundongos que atinge com sucesso o espaço sub-retiniano com danos colaterais mínimos e tempos de recuperação rápidos é descrito aqui.

Um método de injeção Alternativa e validado para acessar o espaço sub-retiniano<i&gt; via</i&gt; Uma abordagem transcleral Posterior

Subretinal injeção tem sido amplamente aplicada em estudos pré-clínicos de terapia de reposição de células-tronco para degeneration macular age-related. Neste artigo visualizado, descrevemos uma técnica de injeção subretinal menos arriscado, reproduzíveis e precisamente modificados através da abordagem trans-escleral para entregar as células nos olhos de rato.

Desenvolvimento de um protocolo refinado para Trans-escleral apresentam transplante de células epiteliais de pigmento Retinal humano nos olhos de rato

Aqui vamos demonstrar uma nova abordagem para usando a tomografia de coerência óptica espectral-domínio de alta resolução (HR-SD-OCT) para auxiliar entrega de agentes de terapia do gene para o espaço subretinal, avaliar sua cobertura areal e caracterizar vitalidade fotoreceptor.

Tomografia de coerência óptica Mouse ultra alta resolução para auxiliar a injeção intra-ocular em pesquisa de terapia de genes da retina

Este protocolo apresenta uma abordagem trans-escleral guiada por visão transpupilar para entregar com segurança e precisão enxertos celulares sub-retinianos, com baixa taxa de complicações cirúrgicas, em receptores de camundongos com ou sem degeneração retiniana.

Transplante transpupilar-guiado trans-escleral de enxertos sub-retinianos em modelo de camundongo com degeneração retiniana

Este artigo descreve métodos para injeção sub-retiniana em ratos, utilizando visualização intraoperatória para controlar o local da injeção e a área de descolamento de retina.

Visualização intraoperatória de injeção sub-retiniana e descolamento de retina em ratos

Aprenda uma técnica otimizada de injeção sub-retiniana transescleral minimamente invasiva em camundongos para estudos de terapias de doenças retinianas hereditárias. Este método melhora a reprodutibilidade e reduz danos cirúrgicos.

Técnica de injeção sub-retiniana transescleral minimamente invasiva otimizada em camundongo

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