Geração de mutantes maternos usando zpc:cas9 knock-in zebrafish

Neste vídeo, apresentamos um método aprimorado de nocaute de condição específica de oócitos em peixe-zebra, oferecendo uma plataforma versátil para estudar fatores maternos com mutações zigóticas resultando em letalidade ou esterilidade. O método atual de nocaute materno é tecnicamente desafiador ou demorado. Havíamos relatado anteriormente que o transgene zpc: cas9 é silenciado transcricionalmente ao longo de gerações.

Usando a linha knock-in zpc:cas9, estabelecemos uma plataforma robusta para gerar nocaute condicional durante a oogênese, permitindo a produção rápida e altamente eficiente de mutantes maternos. Para começar, colete embriões que foram gerados por peixes homozigotos rbm24a RFPKI zpc:cas9. Combine um microlitro de pó PGG EB rbm24a 4sGRNA com um microlitro de RNA mensageiro da transposase Tol2 para preparar a mistura de injeção.