Name: Senescência induzida por drogas em células hepáticas promove polarização de macrófagos M2: implicações para a hepatotoxicidade associada ao inibidor de tirosina quinase (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T13:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Descubra como inibidores de tirosina quinase induzem senescência em células hepáticas Hep G2, promovendo polarização de macrófagos M2 via SASP. Este método revela mecanismos de hepatotoxicidade induzida por drogas.

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<ol><li>Xuhong, J. C., Qi, X. W., Zhang, Y., Jiang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism%2C+safety+and+efficacy+of+three+tyrosine+kinase+inhibitors+lapatinib%2C+neratinib+and+pyrotinib+in+HER2-positive+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanism, safety and efficacy of three tyrosine kinase inhibitors lapatinib, neratinib and pyrotinib in HER2-positive breast cancer.</a> Am J Cancer Res. 9 (10), 2103-2119 (2019).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Linha celular de HepG2</td><td>NCCS</td><td></td><td>Linha celular aderente</td></tr><tr><td>Linha celular RAW264.7</td><td>NCCS</td><td></td><td>Linha celular aderente</td></tr><tr><td>DMEM (Eagle Medium Modificado da Dulbacco)</td><td>Himídia</td><td>AT066</td><td>Alta glicose, pó</td></tr><tr><td>MEM (Eagle Médio Modificado</td><td>Gibco</td><td>611100-053</td><td>Pó</td></tr><tr><td>PBS (Soro Tamponador de Fosfato)</td><td>Himídia</td><td>TS1101</td><td>Pó</td></tr><tr><td>Solução de Tripsina-EDTA</td><td>Himídia</td><td>TCL007</td><td>Solução</td></tr><tr><td>FBS (Soro Bovino Fetal)</td><td>Himídia</td><td>RM1112</td><td>Líquido</td></tr><tr><td>Tinta MTT</td><td>Himídia</td><td>TC191</td><td>Pó</td></tr><tr><td>Lapatinib</td><td>Selleckchem</td><td>S2111</td><td>Pó</td></tr><tr><td>Neratinibe</td><td>Companhia Química das Ilhas Cayman</td><td>18404</td><td>Pó</td></tr><tr><td>DMSO (Dimetil Sulfóxido)&nbsp;</td><td>Himídia</td><td>TC185</td><td>Solução</td></tr><tr><td>Formaldeído&nbsp;</td><td>Rankem</td><td>F0080</td><td>Solução</td></tr><tr><td>Glutaraldeído</td><td>Sigma-aldrich</td><td>340855</td><td>Solução</td></tr><tr><td>Ácido Cítrico Monohidratado, Puro</td><td>Himídia</td><td>GRM229</td><td>Pó</td></tr><tr><td>Fosfato de sódio dibásico anidro &nbsp;</td><td>Himídia</td><td>MB024</td><td>Pó</td></tr><tr><td>Ferrocianeto de potássio, K4[Fe(CN)6]</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>P-236-500</td><td></td></tr><tr><td>Ferricianeto de potássio, K3[Fe(CN)6]</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>P-232-500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SRL</td><td>41721</td><td>Pó</td></tr><tr><td>MgCl2 hexahidratado</td><td>Himídia</td><td>GRM-1068</td><td>Pó</td></tr><tr><td>X-Gal</td><td>SRL</td><td>45904</td><td>Pó</td></tr><tr><td>Lipopolissacarídeo</td><td>Sigma-aldrich</td><td>L6529</td><td></td></tr><tr><td>Interferon-&gamma Recombinante Humano;</td><td>Himídia</td><td>CF040-20MCG</td><td></td></tr><tr><td>Reagente vermelho profundo ROX de células</td><td>Termo Fisher Scientific</td><td>C10422</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td>Pó</td></tr><tr><td>MitoTRACKER Verde</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>1842298</td><td>Pó</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-ARG1</td><td>Afinidade</td><td>DF6657</td><td>Solução, MW calculado - 35kDa, MW observado - 65kDa</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-NOS2</td><td>Cloudo Clone Corp.</td><td>PAA837Hu01</td><td>Solução, MW calculado - 130kDa, MW observado - 65kDa</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-iNOS</td><td>Afinidade</td><td></td><td>Solução, MW calculado - 130kDa, MW observado - 120kDa</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-GAPDH</td><td>Biobharati LifeScience Pvt.Ltd</td><td>BB-AB0060</td><td>Solução</td></tr><tr><td>Anticorpo Anti-Coelho</td><td>Companhia Química das Ilhas Cayman</td><td>10004301</td><td>Solução</td></tr><tr><td>Membrana de nitrocelulose &nbsp;</td><td>Merck Millipore Ltd.&nbsp;</td><td>HATF00010 (Número do produto)</td><td></td></tr><tr><td>femtoLUCENTTMPLUS HRP</td><td>G Biociências &nbsp;</td><td>786-003</td><td></td></tr><tr><td>Antenas de 60mm</td><td>NUCK</td><td>150462</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 poços, &nbsp;</td><td>NUCK</td><td>165306</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de Cultura Celular &nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>371</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio &nbsp;</td><td>1. Microscópio Invertido LEICA &nbsp; &nbsp; 2. Microscópio Confocal Nikon &nbsp;</td><td>1. DMIL LED&NBSP; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2. Ti2E, A1R</td><td>&nbsp; Ambos são números de modelo</td></tr><tr><td>Sistema de Imagem iBright</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>CL1500 (número do modelo)</td><td></td></tr><tr><td>Leitor de placas</td><td>Bio-RAD</td><td>Leitor de Microplacas iMark</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Sorvall ST 8R (número do modelo)</td><td></td></tr></tbody></table>

senescência induzida por drogas em células hepáticas promove polarização de macrófagos m2: implicações para a hepatotoxicidade associada ao inibidor de tirosina quinase

Drug-Induced Senescence in Liver Cells Promotes M2 Macrophage Polarization: Implications for Tyrosine Kinase Inhibitor-Associated Hepatotoxicity

Senescência induzida por drogas em células hepáticas promove polarização de macrófagos M2: implicações para a hepatotoxicidade associada ao inibidor de tirosina quinase

Lapatinib and neratinib are tyrosine kinase inhibitors (TKIs) approved for treating HER2-positive metastatic breast cancer, but their clinical use is ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

A senescência celular, o estado irreversível de paragem do ciclo celular, pode ser induzida por vários stresses celulares. Aqui, descrevemos os protocolos para induzir a senescência e métodos celular para avaliar marcadores de senescência.

Técnicas para induzir e quantificar Cellular Senescence

Macrófagos associados ao tumor M2 (TAM) estão associados à progressão do tumor e ao prognóstico ruim no câncer. Este protocolo serve como um guia detalhado para reproduzir e polarizar células semelhantes a monócitos THP-1 em macrófagos semelhantes a M2 dentro de 14 dias. Este modelo é a base para investigar os efeitos anti-inflamatórios da TAM dentro do microambiente tumoral.

Diferenciação e polarização do macrófago em um fenótipo semelhante a M2 usando uma linha celular de leucemia THP-1 semelhante ao monocito humano

Aqui apresentamos um método baseado em citometria de fluxo para visualização e quantificação de marcadores associados à senescência múltipla em células únicas.

Detecção simultânea baseada em imagens e flutometria de marcadores de senescência fluorescentes múltiplas em células cancerígenas senescentes induzidas por terapia

Este protocolo apresenta microscopia confocal com luz refletida para a detecção objetiva, por célula única, da atividade beta-galactosidase associada à senescência (SA-β-gal) na fração vascular estromal isolada do tecido adiposo humano. O método é compatível com imunocitoquímica, incorpora controles de pH para avaliação quantitativa e, adicionalmente, oferece uma alternativa mais sensível e menos subjetiva à coloração convencional de SA-β-gal.

Detecção de Senescência usando luz refletida na fração vascular estromal adiposa

Esse método estuda como fibroblastos cutâneos senescentes afetam os saudáveis. A senescência é induzida por exposição à UVB, e o meio condicionado é aplicado aos fibroblastos normais. Ele ajuda a avaliar compostos bioativos que visam a comunicação celular alterada no envelhecimento da pele.

Nova combinação de antioxidantes para restaurar a comunicação intercelular saudável em um modelo in vitro usando meio condicionado de células senescentes

Compreender o comportamento maligno do câncer requer a criação de modelos precisos de como as células tumorais interagem com componentes do microambiente tumoral, como macrófagos. Aqui descrevemos dois métodos para estudar a interação das células de glioblastoma com macrófagos associados a tumores e micróglia, onde o efeito na invasão do glioblastoma é avaliado.

Co-cultura Ensaios para estudar macrófagos e Microglia Estimulação do Glioblastoma Invasion

Aqui, apresentamos um protocolo para matrizes de anticorpos identificar alterações nas vias de sinalização em vários modelos de celulares. Estas mudanças, causadas por drogas/hipóxia/ultra-violet luz/radiação ou superexpressão/downregulation/nocautes, são importantes para vários modelos da doença e podem indicar se uma terapia será eficaz ou pode identificar mecanismos de drogas resistência.

Avaliação da resistência aos inibidores de tirosina quinase por um interrogatório das vias de transdução de sinal por matrizes de anticorpo

Este artigo representa um ensaio in vitro útil para avaliar a capacidade do meio condicionado das células tumorais para atrair macrófagos.

Ensaio in vitro para estudo do tumor-interação macrófago

Este estudo descreve um método para isolar vesículas extracelulares exosome enriquecidas carregando fatores estimulantes da colônia de granulocitos imunes de células-tronco embrionárias.

Isolamento de vesículas extracelulares exosome enriquecidas carregando fator estimulante da colônia granulocito-macrófago de células-tronco embrionárias

A atividade fagocítica do macrófago contra as células cancerosas, especificamente as células carcinomas mamárias do camundongo 4T1, foi imagemda neste estudo. O modelo de cocultura de células vivas foi estabelecido e observado por meio de uma combinação de microscopia de contraste de interferência fluorescente e diferencial. Esta avaliação foi imagemdo usando o software de imagem para desenvolver multiponto de vídeo time-lapse.

Time-Lapse 2D Imaging of Phagocytic Activity in M1 Macrophage-4T1 Mouse Mammary Carcinoma Cells in Co-cultures

Descubra como inibidores de tirosina quinase induzem senescência em células hepáticas Hep G2, promovendo polarização de macrófagos M2 via SASP. Este método revela mecanismos de hepatotoxicidade induzida por drogas.

Senescência induzida por drogas em células hepáticas promove polarização de macrófagos M2: implicações para a hepatotoxicidade associada ao inibidor de tirosina quinase (Vídeo) | JoVE Journal

Senescência induzida por drogas em células hepáticas promove polarização de macrófagos M2: implicações para a hepatotoxicidade associada ao inibidor de tirosina quinase

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