Name: Aprimorando a tecnologia de vesículas extracelulares com receptor de antígeno quimérico (CAR-EV): o futuro da terapia do câncer (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Descubra como isolar vesículas extracelulares com receptor de antígeno quimérico para terapia do câncer usando cromatografia de troca iônica. Este método validado oferece alta pureza e rendimento para aplicações terapêuticas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Park, J. H., Geyer, M. B., Brentjens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD19-targeted+CAR+T-cell+therapeutics+for+hematologic+malignancies%3A+Interpreting+clinical+outcomes+to+date%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD19-targeted CAR T-cell therapeutics for hematologic malignancies: Interpreting clinical outcomes to date.</a> Blood. 127 (26), 3312-3320 (2016).</li>
<li>Jain, M. D., Smith, M., Shah, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+I+treat+refractory+CRS+and+ICANS+following+CAR+T-cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">How I treat refractory CRS and ICANS following CAR T-cell therapy.</a> Blood. 141 (20), 2430-2442 (2023).</li>
<li>Tang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+CAR-T+cell-derived+exosomes%3A+A+cell-free+modality+for+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of CAR-T cell-derived exosomes: A cell-free modality for targeted cancer therapy.</a> Oncotarget. 6 (42), 44179-44190 (2015).</li>
<li>St-Denis-Bissonnette, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clinically+relevant+large-scale+biomanufacturing+workflow+to+produce+natural+killer+cells+and+natural+killer+cell-derived+extracellular+vesicles+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22JEV%22%5BJournal%5D)">A clinically relevant large-scale biomanufacturing workflow to produce natural killer cells and natural killer cell-derived extracellular vesicles for cancer immunotherapy.</a> JEV. 12 (12), e12387(2023).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+enhances+the+production+and+antitumor+effect+of+exosomes+derived+from+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypoxia enhances the production and antitumor effect of exosomes derived from natural killer cells.</a> Ann Transl Med. 9 (6), 473-473 (2021).</li>
<li>Decot, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural-killer+cell+amplification+for+adoptive+leukemia+relapse+immunotherapy%3Acomparison+of+three+cytokines+IL-2%2C+IL-15%2C+or+IL-7+and+impact+on+NKG2D%2C+KIR2DL1%2C+and+KIR2DL2+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Natural-killer cell amplification for adoptive leukemia relapse immunotherapy:comparison of three cytokines IL-2, IL-15, or IL-7 and impact on NKG2D, KIR2DL1, and KIR2DL2 expression.</a> Exp Hematol. 38 (5), 351-362 (2010).</li>
<li>Kim, I. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+enhancement+of+exosomes+derived+from+NK+cells+by+IL-15+and+IL-21+synergy+against+hepatocellular+carcinoma+cells%3A+The+cytotoxicity+and+apoptosis+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Functional enhancement of exosomes derived from NK cells by IL-15 and IL-21 synergy against hepatocellular carcinoma cells: The cytotoxicity and apoptosis in vitro study.</a> Heliyon. 9 (6), e16962-e16962 (2023).</li>
<li>Mehdiani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+innovative+method+for+exosome+quantification+and+size+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An innovative method for exosome quantification and size measurement.</a> J Vis Exp. (95), e50974(2015).</li>
<li>Bachurski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicle+measurements+with+nanoparticle+tracking+analysis-an+accuracy+and+repeatability+comparison+between+NanoSight+NS300+and+ZetaView%5BTitle%5D)+AND+%22JEV%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicle measurements with nanoparticle tracking analysis-an accuracy and repeatability comparison between NanoSight NS300 and ZetaView.</a> JEV. 8 (1), 1596016(2019).</li>
<li>Khanabdali, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+surface+epitope+immunoaffinity+isolation+of+extracellular+vesicles+and+downstream+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">High throughput surface epitope immunoaffinity isolation of extracellular vesicles and downstream analysis.</a> Biol Methods Protoc. 9 (1), bpae032(2024).</li>
<li>Salomon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+ovarian+cancer%3A+An+accurate+high-throughput+extracellular+vesicle+test%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Early detection of ovarian cancer: An accurate high-throughput extracellular vesicle test.</a> J Clin Oncol. 43 (16_suppl), 5582-5582 (2025).</li>
<li>Fu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+exosomes+derived+from+effector+CAR-T+cells+have+potent+antitumour+effects+and+low+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">CAR exosomes derived from effector CAR-T cells have potent antitumour effects and low toxicity.</a> Nat Commun. 10 (1), 1-12 (2019).</li>
<li>Zheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalable+CAR-T+cell-derived+exosomes+as+paclitaxel+carriers+for+treating+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Inhalable CAR-T cell-derived exosomes as paclitaxel carriers for treating lung cancer.</a> J Transl Med. 21 (1), 383(2023).</li>
<li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+exosome+for+drug+delivery%3A+Recent+development+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Engineered exosome for drug delivery: Recent development and clinical applications.</a> Int J Nanomed. 18, 7923-7940 (2023).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation+and+assessment+of+therapeutic+cargo+in+engineered+exosomes%3Aa+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Encapsulation and assessment of therapeutic cargo in engineered exosomes:a systematic review.</a> J Nanobiotechnology. 22 (1), 18(2024).</li>
<li>Basyoni, A. E., Atta, A., Salem, M. M., Mohamed, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+exosomes+for+targeted+drug+delivery+systems+to+combat+brain+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Harnessing exosomes for targeted drug delivery systems to combat brain cancer.</a> Cancer Cell Int. 25 (1), 150(2025).</li>
<li>Coughlan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome+isolation+by+ultracentrifugation+and+precipitation+and+techniques+for+downstream+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Exosome isolation by ultracentrifugation and precipitation and techniques for downstream analyses.</a> Curr Protoc Cell Biol. 88 (1), e110(2020).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+separation+and+purification+of+exosomes+using+ion-exchange+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Large-scale separation and purification of exosomes using ion-exchange chromatography.</a> Biomed Res Ther. 11 (4), 6348-6356 (2024).</li>
<li>Fernandes, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+isolation+of+extracellular+vesicles+from+cell+culture+supernatant+using+immuno-affinity+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Sep+Purif+Technol%22%5BJournal%5D)">Targeted isolation of extracellular vesicles from cell culture supernatant using immuno-affinity chromatography.</a> Sep Purif Technol. 358 (Part A), 130312-130312 (2024).</li>
<li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-EGFR+ScFv+functionalized+exosomes+delivering+LPCAT1+specific+siRNAs+for+inhibition+of+lung+cancer+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22JNB%22%5BJournal%5D)">Anti-EGFR ScFv functionalized exosomes delivering LPCAT1 specific siRNAs for inhibition of lung cancer brain metastases.</a> JNB. 22 (1), 159(2024).</li>
<li>Dobersberger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+engineering+strategy+to+target+activated+EGFR+with+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">An engineering strategy to target activated EGFR with CAR T cells.</a> Cell Rep Methods. 4 (4), 100728-100728 (2024).</li>
<li>Shi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bispecific+CAR+T+cell+therapy+targeting+BCMA+and+CD19+in+relapsed%2Frefractory+multiple+myeloma%3Aa+phase+I%2FII+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Bispecific CAR T cell therapy targeting BCMA and CD19 in relapsed/refractory multiple myeloma:a phase I/II trial.</a> Nat Commun. 15 (1), 3371(2024).</li>
<li>Roddie, G., Amrolia, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+targeting+CAR-T+cells+for+B-cell+acute+lymphoblastic+leukaemia+and+B-cell+non-Hodgkin+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Dual targeting CAR-T cells for B-cell acute lymphoblastic leukaemia and B-cell non-Hodgkin lymphoma.</a> Blood Adv. 9 (4), 704-721 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><forte>Materiais</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x solução salina tamponada com fosfato (PBS), pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010049</td><td>Enriquecimento de EV</td></tr><tr><td>Dodecil sulfato de sódio a 1% (SDS)</td><td>Sigma</td><td>L3771-100G</td><td>Dissolva 1g de pó de SDS em 10 mL de água ultrapura</td></tr><tr><td>1x solução salina tamponada tris com Tween-20 (TBST)</td><td>Produtos Químicos Termocientíficos</td><td>J77500. K2</td><td>Dilua com água ultrapura para fazer uma solução 1x (alternativamente, prepare uma solução de polissorbato-20/Tween-20 a 0,1% em solução salina tamponada com 1x tris)</td></tr><tr><td>Microplaca de poliestireno de fundo plano transparente de 96 poços tratada com TC, estéril</td><td>Corning</td><td>3595</td><td>in vitro ensaio funcional</td></tr><tr><td>Géis de proteína Bolt Bis-Tris Plus Mini, 4-12%, 1,0 mm, formato WedgeWell</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Caracterização de célula/EV</td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647-100G</td><td>Caracterização de célula/EV</td></tr><tr><td>Anticorpo Calnexina</td><td>Sinalização Celular</td><td>2433S</td><td>Caracterização de célula/EV</td></tr><tr><td>Células CAR-NK/T</td><td>ProMab Biotecnologias</td><td>Varia</td><td>O domínio de ligação ao ligante extracelular CAR depende do alvo preferido nas células receptoras</td></tr><tr><td>CellTiter 96 AQuo ensaio de proliferação celular em uma solução (MTS)</td><td>Promega</td><td>G3580</td><td>in vitro ensaio funcional</td></tr><tr><td>cOmplete, Mini, Coquetel de Inibidor de Protease sem EDTA</td><td>Roche</td><td>11836170001</td><td>Lise celular</td></tr><tr><td>Reagente de detecção de Western blotting ECL</td><td>Amersham</td><td>RPN2232</td><td>Caracterização de célula/EV</td></tr><tr><td>Tampão de eluição</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimento/isolamento EV</td></tr><tr><td>Amortecedor de equilíbrio</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimento/isolamento EV</td></tr><tr><td>Coluna EXO-ACE IEX</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimento/isolamento EV para ensaio funcional a jusante Patent ID AU2024901931</td></tr><tr><td>Contas de captura de pan-exossomos EXO-NET</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Isolamento de EV para caracterização downstream Patente nº WO/2014/011673</td></tr><tr><td>Anticorpo Granzyme B</td><td>Sinalização Celular</td><td>4275</td><td>Caracterização de célula/EV</td></tr><tr><td>IL-2 Is Humana, grau premium</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-744</td><td>Cultura de células T/NK sem xeno</td></tr><tr><td>Pilhas de transferência iBlot 2, PVDF</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Caracterização de célula/EV</td></tr><tr><td>ImmunoCult-XF (cGMP)</td><td>Tecnologias de células-tronco</td><td>100-0956</td><td>Cultura de células T/NK sem xeno</td></tr><tr><td>K-562</td><td>ATCC</td><td>CCL-243</td><td>in vitro ensaio funcional</td></tr><tr><td>MCF-7</td><td>ATCC</td><td>HTB-22</td><td>in vitro ensaio funcional</td></tr><tr><td>Unidade de filtro de seringa Millex-GP, 0.22 &micro; m</td><td>Merck Millipore</td><td>SLGPR33RS</td><td>Filtragem terminal</td></tr><tr><td>Buffer de regeneração</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimento/isolamento EV</td></tr><tr><td>Tampão RIPA (10X)</td><td>Tecnologia de sinalização celular</td><td>9806</td><td>Lise celular</td></tr><tr><td>Solução de azul de tripano, 0,4%</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Avaliação da viabilidade e densidade celular</td></tr><tr><td>Tampão de lavagem</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimento/isolamento EV</td></tr><tr><td><forte>Equipamento</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Contador de células automatizado</td><td>Invitrogen</td><td>Condessa II FL</td><td>Avaliação da viabilidade e densidade celular</td></tr><tr><td>Instrumento de extração automatizado de bancada</td><td>Invitrogen</td><td>Sistema KingFisher Apex</td><td>Sistema de purificação automatizado de alto rendimento Veja o link para detalhes do protocolo: https://www.inoviq.com/site/technology/resources</td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência</td><td>Zeiss</td><td>Observador Axio 7</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Análise de rastreamento de nanopartículas (NTA)</td><td>Particle Metrix GmbH</td><td>Zetaview PMX-130</td><td>Análise de partículas</td></tr><tr><td>Leitor de placas</td><td>BMG Labtech</td><td>SPECTROstar Nano</td><td>in vitro ensaio funcional</td></tr><tr><td>Centrífuga de bancada refrigerada</td><td>Beckman Coulter</td><td>Avanti J-15R</td><td>Cultura de células e Processamento de enriquecimento EV</td></tr><tr><td>Mini tanque de gel SDS-PAGE</td><td>Invitrogen</td><td>Rolamento A25977</td><td>Caracterização de célula/EV</td></tr><tr><td>Sistema de transferência de Western blot</td><td>Invitrogen</td><td>iBlot 2</td><td>Caracterização de célula/EV</td></tr></tbody></table>

aprimorando a tecnologia de vesículas extracelulares com receptor de antígeno quimérico (car-ev): o futuro da terapia do câncer

Enhancing Chimeric Antigen Receptor-Extracellular Vesicles (CAR-EV) Technology: The Future of Cancer Therapy

Um fluxo de trabalho típico de cultura de células CAR T/NK, seguido de isolamento de EV, caracterização e utilização de EVs em um ensaio funcional é ilustrado na Figura 1. O CM da cultura de células CAR T / NK é coletado, antes do enriquecimento de EV e caracterização a jusante (incluindo análise de rastreamento de nanopartículas) e atividade funcional avaliada por meio de um ensaio MTS de placa de vários poços (Figura 1).
As células CAR marcadas com GFP podem ser visualizadas por microscopia para confirmar a expressão da construção CAR em cultura. A microscopia deve ser realizada como uma etapa de rotina antes e durante a coleta do MC para garantir eficiência de transdução suficiente. É importante sobrepor canais de campo claro e GFP, para capturar a autofluorescência potencial ao avaliar a eficiência. É importante notar que as células T possuem uma tendência a se aglomerar naturalmente (observada de forma semelhante nas células NK; dados não mostrados), e a fluorescência pode ser claramente observada quando as células exibem um fenótipo agrupado (Figura 2).
Após o enriquecimento de EV, os EVs podem ser caracterizados via NTA e western immunoblotting. Usando NTA, a análise do rendimento de partículas pode confirmar um aumento da concentração nos EVs isolados, em comparação com o CM ( Figura 3A ). Os dados de Western blot confirmam ainda a expressão do marcador citolítico granzima B em células CAR e EVs, e a ausência de calnexina neste último, o que confirma a ausência de material celular nas preparações. HEK293T células são incluídas como um controle negativo para CAR (Figura 3B).
A análise da funcionalidade EV foi realizada via ensaio MTS para determinar a viabilidade / capacidade de proliferação celular. O efeito dos CAR-EVs direcionados a EGFR e HER2 no câncer de mama MCF-7 e na viabilidade e crescimento de células de câncer de sangue K562 é determinado pela medição do reagente MTS colorimétrico a uma absorbância de 490 nm (após a remoção do sinal de fundo). Neste exemplo, o EGFR direcionado a CAR-EVs reduziu a viabilidade das células MCF-7 e K562 em 70% e 40%, respectivamente. HER-2 visando CAR-EVs reduziu MCF-7 em ~ 10% (conforme determinado por meio do teste t de Student). Considerando o layout experimental, o emprego de um teste não paramétrico (por exemplo, Mann-Whitney U) pode oferecer insights mais robustos em estudos subsequentes (Figura 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig1.jpg"> 
Figura 1: Geração, enriquecimento, caracterização de EV e leitura funcional do CAR-EV. Diagrama esquemático que descreve um fluxo de trabalho típico de geração, produção e caracterização de EV de amostras enriquecidas de CAR-EV antes da análise da funcionalidade. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig2.jpg"> 
Figura 2: Análise de microscopia representativa por confirmação da expressão de GFP em células CAR-T direcionadas a HER2. As imagens foram capturadas por microscopia de fluorescência, usando uma objetiva de 20x. A barra de escala branca representa um comprimento de 50 μm. As células T têm uma tendência natural de crescer em aglomerados antes do descolamento em células únicas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig3.jpg"> 
Figura 3: Caracterização de células CAR e EVs. (A) Análise de partículas de nano-rastreamento de CAR-T CM e EVs enriquecidos. A concentração de partículas de EVs foi 1,6-2,1 vezes maior que a de CM, enquanto a concentração de proteína foi reduzida em &gt;80%. Diferenças estatisticamente significativas foram testadas com ANOVA one-way e teste de comparações múltiplas de Tukey; p≤ 0,001, **** p≤ 0,0001. (B) A análise de Western blot de células T transduzidas e CAR-EVs enriquecidas confirmou a presença de granzima B citolítica em células CAR e EVs, enquanto uma ausência foi observada em HEK293T células não-CAR. A calnexina não foi detectada no CAR-EV, indicando baixa contaminação por partículas do retículo endoplasmático. Carga de proteína por pista = 5 μg. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig4.jpg"> 
Figura 4: Efeito dos CAR-EVs na viabilidade da célula-alvo (células de câncer de mama MCF-7 e linha celular de leucemia mielóide crônica K562). As células-alvo foram tratadas com uma dose única de 4,5 x 105 e 2,5 x 105 EVs/célula (EGFR ou HER2 CARs, respectivamente) ou controle (tampão EV) por até 3 dias. (A) Células CAR-EVs direcionadas ao EGFR. (B) CAR-EVs direcionados ao HER2. Uma diminuição na leitura de absorbância (indicativa da eficácia do tratamento) foi observada em ambas as linhagens celulares. Os dados representam a absorbância média ± DP (n = 3), analisada por meio de um teste t de Student não pareado bicaudal, com valores de p indicando significância estatística; ** p≤ 0,01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig4large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Aprimorando a tecnologia de vesículas extracelulares com receptor de antígeno quimérico (CAR-EV): o futuro da terapia do câncer

CAR cell therapies have significantly advanced personalized treatment for several hematological malignancies. Currently, seven CAR-&#8239;cell products ...

enhancing-chimeric-antigen-receptor-extracellular-vesicles-car-ev

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este vídeo demonstra uma técnica para fabricar células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) ex vivo. As células T humanas são incubadas com esferas magnéticas revestidas com anticorpos anti-CD3 e anti-CD28, juntamente com um meio suplementado com interleucina-2 (IL-2), levando à ativação e proliferação de células T. Vetores lentivirais transgênicos são introduzidos, permitindo que o RNA transgênico se integre ao genoma do hospedeiro e expresse o transgene. Isso resulta nas células T...

Uma técnica ex vivo para fabricar células T receptoras de antígeno quimérico

Este vídeo demonstra uma técnica para a geração ex vivo de células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) específico do antígeno tumoral. Vetores retrovirais portadores de RNA transgênico são misturados com células do baço em um meio suplementado com interleucina-2 para promover a sobrevivência e proliferação de células T. A mistura é então transferida para uma placa revestida com fragmentos de fibronectina humana recombinante e centrifugada para facilitar a fusão do vírus com a célula,...

Uma técnica ex vivo para gerar células T receptoras de antígeno quimérico específicas para tumores

Os efeitos linfodepletivos e imunomoduladores do padrão de tratamento da quimioterapia e radiação podem ser aproveitados para aumentar a eficácia antitumoral da imunoterapia com células T. Descrevemos um método para gerar células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) específicas do EGFRvIII e administrá-las no contexto do tratamento padrão de glioblastoma.

Geração de células T para CAR adoptivo Therapy no Contexto do Glioblastoma Padrão de Atendimento

Descrevemos um sistema quantitativo de ensaio de citolíse in vitro em tempo real para avaliar a potência das células T do receptor de antígeno quimérico que visam células tumorais líquidas e sólidas. Este protocolo pode ser estendido para avaliar outras células efetores imunes, bem como tratamentos combinados.

Um ensaio de potência em tempo real para células T do receptor de antígeno quimérico visando células cancerosas sólidas e hematológicas

Aqui, descrevemos um método in vitro co-cultura para recursivamente desafio tumor-alvo as células T, que permite a análise fenotípica e funcional da atividade antitumoral de célula T.

Em Vitro Tumor Cell reexposição para avaliação preditiva de Receptor de antígeno quimérico célula T função antitumoral

Descrevemos uma abordagem para gerar de forma confiável células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) e testar sua diferenciação e função in vitro e in vivo.

Fabricação de células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) para imunoterapia adotiva

Esse protocolo agiliza a produção de vetores retrovirais e a transdução de células T murinas, facilitando a geração eficiente de células CAR-T em camundongos.

Geração Eficiente de Células T do Receptor de Antígeno Quimérico Murino (CAR)-T

Este protocolo descreve um procedimento detalhado para gerar células T do receptor de antígeno quimérico transitório (CAR) usando mRNA não integrante para imunoterapia contra o câncer e fornece métodos confiáveis para avaliar as células CAR-T e sua função citotóxica.

Uma abordagem não viral para gerar células T receptoras de antígeno quimérico transitório usando mRNA para imunoterapia contra o câncer

Este protocolo descreve as etapas essenciais para o cultivo das células T primárias, incluindo seu isolamento, ativação, expansão e transfecção transitória por eletroporação de mRNA. Além disso, é proposto um fluxo de trabalho e um painel de anticorpos para análise citométrica de fluxo do fenótipo, marcadores de ativação, viabilidade e expressão do receptor de antígeno quimérico (CAR).

Isolamento, cultivo e transfecção transitória de células T humanas primárias para gerar células T do Receptor de Antígeno Quimérico (CAR)

O advento da tecnologia local específico recombinase (SSR) eo sistema Cre / lox tem levado a inúmeros avanços em biologia molecular, e provou-se como uma valiosa ferramenta para avaliar a função do gene em animais transgênicos. Esta entrevista aborda o mecanismo de recombinação sítio específica por Ciclização recombinase (CRE) e como o uso desta enzima tem levado ao desenvolvimento de mutagênese condicional, que tem vantagens significativas sobre os tradicionais knock out estratégias.

Princípios do site-specific Recombinase (SSR) Tecnologia

Descubra como isolar vesículas extracelulares com receptor de antígeno quimérico para terapia do câncer usando cromatografia de troca iônica. Este método validado oferece alta pureza e rendimento para aplicações terapêuticas.

Aprimorando a tecnologia de vesículas extracelulares com receptor de antígeno quimérico (CAR-EV): o futuro da terapia do câncer

Explorar mais vídeos