Name: Preparação de Spreads Cromossômicos Meióticos de Oócitos de Camundongos para Avaliação de Sinapse e Recombinação (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-18T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Aprenda a preparar spreads cromossômicos meióticos de oócitos de camundongos para avaliar sinapse e recombinação. Este método permite analisar eventos meióticos em células germinativas femininas.

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<table><tbody><tr><td>0,45 & mu; Filtro de Seringa m</td><td>Millipore Sigma</td><td>SLHAR33SB</td><td>para fabricar pipetas operadas por boca</td></tr><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Corning</td><td>46-034-CI&nbsp;</td><td>para HEB</td></tr><tr><td>Seringa estéril de 1 mL com agulha de calibre 25, 16 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-125&nbsp;</td><td>para romper ovários</td></tr><tr><td>Placa de Petri de 100 x 15 mm</td><td>VWR</td><td>25384-302&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas descartáveis de vidro Pasteur de borosilicato de 14,6 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20B&nbsp;</td><td>para fabricar pipetas operadas por boca</td></tr><tr><td>Placa de Petri de 35 x 10 mm</td><td>Corning</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>Pinos de aço inoxidável #3 de 40 mm x 0,45 mm para entomologia</td><td>Amazon</td><td>B0CSSPW5S7</td><td>para imobilização de camundongos fetais para dissecação</td></tr><tr><td>Ácido acético, glacial</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td>para o fixador de Carnoy</td></tr><tr><td>Conjuntos de tubos aspiradores para microcapilares calibrados</td><td>Millipore Sigma</td><td>A5177-5EA</td><td>para fabricar pipetas operadas por boca</td></tr><tr><td>Vidro de Relógio B.P.I.</td><td>NDS Technologies & nbsp;</td><td>1580-00</td><td>Alternativamente, use um prato embrionário de 30 mm de diâmetro x 12 mm de profundidade (SKU de Ciências da Microscopia Eletrônica: 70543-30)</td></tr><tr><td>Ácido Bórico</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP168-1</td><td>para ajustar o pH do HEB, PFA</td></tr><tr><td>Albumina Sérica Bovina</td><td>Millipore Sigma</td><td>A7906-100G</td><td>para ADB</td></tr><tr><td>Tanque de CO2</td><td></td><td></td><td>para incubadora</td></tr><tr><td>Lâminas de Microscópio Corning</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS294875X25</td><td>L x L 75 mm x 25 mm, com um lado fosco</td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio Corning, com geado de um lado e uma das extremidades</td><td>VWR</td><td>294875X25</td><td></td></tr><tr><td>Cubra o vidro retangular. 60 x 24 mm, #1.5</td><td>VWR</td><td>48393-251</td><td></td></tr><tr><td>Prato Dissecador</td><td>Ciências da Microscopia Eletrônica</td><td>70540</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de Dissecação</td><td></td><td></td><td>Qualquer modelo padrão</td></tr><tr><td>Tesoura de dissecação, ponta afiada, 4,5"</td><td>VWR</td><td>82027-578</td><td></td></tr><tr><td>Pinças extra finas e afiadas</td><td>VWR</td><td>76548-836</td><td></td></tr><tr><td>Giemsa Stain</td><td>Millipore Sigma</td><td>GS500-500</td><td>para tingir espalhamentos de chiasmatas</td></tr><tr><td>Caneta PAP de barreira hidrofóbica ImmEdge</td><td>Laboratórios Vector</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td></td><td></td><td>Qualquer modelo padrão com tecnologia de CO2 e jaqueta d'água</td></tr><tr><td>Estação de trabalho FIV</td><td>K-Systems</td><td></td><td>Qualquer modelo com bancada aquecida</td></tr><tr><td>Solução Kodak Photo-Flo 200</td><td>BH Photo & Vídeo</td><td>1464510</td><td>para lavagens deslizantes</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td>para o fixador de Carnoy</td></tr><tr><td>Pota de Coloração Coplin da MP Biomedicals</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN17006201</td><td></td></tr><tr><td>Soro Normal de Cabra</td><td>Gibco</td><td>16210-072</td><td>para ADB</td></tr><tr><td>Paraformaldeído, grau EM, prill purificado</td><td>Ciências da Microscopia Eletrônica</td><td>19200</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td>for&nbsp; Slides de montagem para espalhamentos de chiasmata</td></tr><tr><td>Montagem Antidesvanecimento de Vidro ProLong com Mancha NucBlue</td><td>Termo Científica</td><td>P36985</td><td>para montagem de lâminas imunocoloridas</td></tr><tr><td>Tubo de silicone, diâmetro interno: 0,125", diâmetro externo: 0,25"</td><td>VWR</td><td>89068-474</td><td>para fabricar pipetas operadas por boca</td></tr><tr><td>Diidrato de citrato de sódio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S279-500</td><td>para HEB, solução hipotônica</td></tr><tr><td>Sistema de Coloração por Corredores StainTray</td><td>Ciências da Microscopia Eletrônica</td><td>71396-B</td><td>Para uso como câmara umidificada. É preciso usar a tampa preta para a coloração por imunofluorescência. Alternativamente, pode forrar o fundo de uma caixa de deslizamento opaca ou de utensílios de papel toalha úmidos para uso como câmara umidificada&nbsp;</td></tr><tr><td>Dicas para Stripper - 100</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-100</td><td>para pipeta operada por boca</td></tr><tr><td>Ponteiras de stripper - 150</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-150</td><td>para pipeta operada por boca</td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>Millipore Sigma</td><td>S-8501</td><td>para HEB, solução hipotônica de sacarose</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-5</td><td>para HEB</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-100&nbsp;</td><td>para PFA, ADB e Triton-PBS</td></tr><tr><td>Vaso de Coloração Coplin da United Scientific</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17495A</td><td>Plástico branco opaco para lavagens e lâminas de bloqueio após adição de anticorpos secundários fotossensíveis</td></tr><tr><td>Slides de Concavidade de Vidro da United Scientific</td><td>Fisher Scientific</td><td>S139533</td><td>1,3 mm de espessura, contagem de 2 poços</td></tr><tr><td>Tesoura de Microdissecação Vannas 5mm reta</td><td>VWR</td><td>76457-358</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axio Imager.Z2, Colibri 7</td><td>Carl Zeiss</td><td>000000-2624-307</td><td></td></tr><tr><td>Zen Blue 3.11 Software</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>Software de aquisição e análise de imagens</td></tr><tr><td>Anticorpos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab')? Fragmento Goat Anti-Mouse IgG, específico do fragmento Fc</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>115-546-071</td><td>diluição usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab')? Fragmento Goat Anti-Rabbit IgG, Fc específico do fragmento</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>111-546-046</td><td>diluição usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 AffiniPure F(ab')? Fragmento de Cabra Anti-Humano IgG, Fc&gamma; Específico do fragmento</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>109-606-170</td><td>diluição usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 AffiniPure Cabrit Anti-Porquinho-da-Índia IgG, especificação do fragmento Fc</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>106-605-008</td><td>diluição usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Porquinho-da-Índia anti-MLH3 pAb</td><td></td><td></td><td>Feito sob medida com Thermo-Fisher, usado diluição 1:500</td></tr><tr><td>Porquinho-da-índia anti-SYCP1 pAb</td><td></td><td></td><td>de Christer H&ouml; &ouml; g (Kouznetsova et al. 2005), usou diluição 1:200</td></tr><tr><td>Proteína anti-Centrômero humana pAb</td><td>Antibodies Inc.</td><td>15-234</td><td>diluição usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Mouse anti-MLH1 mAb</td><td>BD em Biociências</td><td>550838</td><td>diluição usada 1:100</td></tr><tr><td>Mouse anti-SYCP3 mAb</td><td>Abcam</td><td>ab97672</td><td>diluição usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Rabbit anti-HORMAD1 pAb</td><td>Proteintech</td><td>13917-1-AP</td><td>Diluição 1:500 usada</td></tr><tr><td>Rabbit anti-MSH4 pAb</td><td>Abclonal</td><td>A8556</td><td>diluição usada 1:100</td></tr><tr><td>Rabbit anti-RAD51 pAb</td><td>Millipore</td><td>PC130</td><td>Diluição 1:500 usada</td></tr><tr><td>Rabbit anti-SYCP3 pAb</td><td>Abcam</td><td>ab15093</td><td>diluição usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Rhodamine Red-X (RRX) AffiniPure F(ab')? Fragmento Goat Anti-Mouse IgG, específico do fragmento Fc</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>115-296-071</td><td>diluição usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Rhodamine Red-X (RRX) AffiniPure F(ab')? Fragmento Goat Anti-Rabbit IgG, Fc específico do fragmento</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>111-296-046</td><td>diluição usada 1:1.000</td></tr></tbody></table>

preparação de spreads cromossômicos meióticos de oócitos de camundongos para avaliação de sinapse e recombinação

Preparation of Meiotic Chromosome Spreads from Mouse Oocytes for Assessment of Synapsis and Recombination

Preparação de Spreads Cromossômicos Meióticos de Oócitos de Camundongos para Avaliação de Sinapse e Recombinação

Three critical and interdependent processes define meiotic prophase I: homologous chromosomes must pair together, a proteinaceous structure called the ...

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Ovócitos são propensas a aneuploidia devido a erros na segregação cromossômica durante a maturação meiótica. Aneuplóides ovos pode causar infertilidade, abortos espontâneos ou transtornos de desenvolvimento como a síndrome de Down. Aqui, descrevemos métodos para introduzir materiais de escolha em oócitos e métodos para estudar e avaliar a maturação meiótica ploidia.

Avaliação do mouse microinjeção de oócitos, maturação e ploidia

Aqui, apresentamos um protocolo para esgotamento específico mRNA mediado por siRNA seguido por análise de imunofluorescência para avaliar a formação do fuso meiótico e organização em oócitos de camundongos. Este protocolo é adequado para in vitro esgotamento das transcrições e avaliação funcional dos diferentes fuso e / ou fatores associados à MTOC em oócitos.

Meiotic Avaliação de fuso em oócitos mouse por silenciamento mediado por siRNA

Meiose é o processo de desenvolvimento pelo qual gâmetas são formadas através de uma única rodada de replicação de DNA e duas rodadas sucessivas de segregação do cromossomo. Mamíferos meiose pode ser examinado, utilizando uma técnica para preparar os cromossomas se espalha. Aqui, vamos demonstrar um método de preparação de superfície-propagação núcleos de espermatócitos de rato.

Preparação de cromossomas se espalha a partir do Mouse espermatócitos

Oogénese nos mamíferos é conhecido por ser propenso a erro, especialmente devido à missegregation do cromossomo. Este manuscrito descreve métodos de preparação de cromatina espalhado para prófase rato, metáfase I e II-encenado oócitos. Estas técnicas fundamentais permitem o estudo de proteínas da cromatina-limite e a morfologia do cromossomo durante a ovogênese mamífera.

Preparações de espalhamento de cromatina para a análise da progressão de oócitos de camundongo da prófase para a metáfase II

Como as variantes genéticas associadas a doenças humanas começam a tornar-se descoberto, está se tornando cada vez mais importante desenvolver sistemas com os quais rapidamente avaliar o significado biológico dessas variantes identificadas. Este protocolo descreve métodos para avaliar a função do gene humano durante a meiose feminina eu usando oócitos de rato.

Usando oócitos de camundongo para avaliar a função de genes humanos durante a meiose I

Os spreads de superfície nuclear são uma ferramenta indispensável para estudar eventos cromossomos durante a meiose. Aqui demonstramos um método para preparar e visualizar cromossomos meioóticos durante a profase I de espermatotatocitos de zebrafish.

Preparação do Cromossomo Meioético Se espalha de espermatocitocitos de zebrafish

O erro na segregação cromossômica é uma característica comum nos ovócitos. Portanto, estudar o ponto de verificação de montagem do fuso dá pistas importantes sobre os mecanismos necessários para produzir ovos saudáveis. O presente protocolo descreve três ensaios complementares para avaliar a integridade do ponto de verificação da montagem do fuso em ovócitos de rato.

Avaliação da Integridade do Ponto de Verificação da Montagem do Fuso em Oócitos de Rato

Este protocolo descreve uma técnica para avaliar alterações na vasculatura materna durante a gravidez em camundongos. Usando métodos estereológicos, o remodelamento das artérias espirais deciduais é avaliado quantitativamente e os resultados confirmados qualitativamente por imuno-histoquímica.

Avaliação do Maternal Vascular Reformas durante a gravidez no mouse Útero

Aqui apresentamos um protocolo para a caracterização de oócitos antrais de rato com base na organização nucleolar.

Isolamento e Caracterização do mouse Antral Oócitos Baseado em Nucleolar organização da cromatina

Este manuscrito descreve uma abordagem experimental para caracterizar morfologicamente e bioquimicamente ovócitos de cavalo. Especificamente, o presente trabalho ilustra como recolher ovócitos de equídeos imaturos e maduros por captação de óvulos guiados por ultra-som (OPU) e como investigar a segregação cromossómica, a morfologia do fuso, a acetilação das histonas globais ea expressão de mRNA.

Análise da segregação cromossômica, acetilação de histona e morfologia do fuso em ovócitos de cavalo

Aprenda a preparar spreads cromossômicos meióticos de oócitos de camundongos para avaliar sinapse e recombinação. Este método permite analisar eventos meióticos em células germinativas femininas.

Preparação de Spreads Cromossômicos Meióticos de Oócitos de Camundongos para Avaliação de Sinapse e Recombinação

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