Name: Preparação de olhos suínos para microscopia de refletância confocal para visualizar a rede de fibras de colágeno vítreo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Aprenda a preparar olhos suínos para microscopia confocal de refletância, visualizando a rede de fibras de colágeno vítreo sem artefatos. Este método preserva a estrutura natural e auxilia no estudo do descolamento de retina.

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<ol><li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreous+and+vision+degrading+myodesopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Vitreous and vision degrading myodesopsia.</a> Prog Retin Eye Res. 79, 100847(2020).</li>
<li>Phillips, J. D., Hwang, E. S., Morgan, D. J., Creveling, C. J., Coats, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+mechanics+of+the+vitreoretinal+interface%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mech+Behav+Biomed+Mater%22%5BJournal%5D)">Structure and mechanics of the vitreoretinal interface.</a> J Mech Behav Biomed Mater. 134, 105399(2022).</li>
<li>Seider, M. I., Conell, C., Melles, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+acute+posterior+vitreous+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Complications of acute posterior vitreous detachment.</a> Ophthalmology. 129 (1), 67-72 (2022).</li>
<li>Ketkar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreomacular+traction+-+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">Vitreomacular traction - a review.</a> Eye. 39 (4), 710-717 (2025).</li>
<li>Filas, B. A., Zhang, Q., Okamoto, R. J., Shui, Y. -B., Beebe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+degradation+identifies+components+responsible+for+the+structural+properties+of+the+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Enzymatic degradation identifies components responsible for the structural properties of the vitreous body.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (1), 55(2014).</li>
<li>Taufalele, P. V., VanderBurgh, J. A., Muñoz, A., Zanotelli, M. R., Reinhart-King, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber+alignment+drives+changes+in+architectural+and+mechanical+features+in+collagen+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Fiber alignment drives changes in architectural and mechanical features in collagen matrices.</a> PLoS One. 14 (5), e0216537(2019).</li>
<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Prog Retin Eye Res. 19 (3), 323-344 (2000).</li>
<li>Los, L. I., van Luyn, M. J. A., Nieuwenhuis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+rabbit+vitreous+body%3A+Lamellae%2C+Cloquet%27s+channel+and+a+novel+structure%2C+the+%27Alae+canalis+Cloqueti%27%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Organization of the rabbit vitreous body: Lamellae, Cloquet's channel and a novel structure, the 'Alae canalis Cloqueti'.</a> Exp Eye Res. 69 (3), 343-350 (1999).</li>
<li>Voytik-Harbin, S. L., Brightman, A. O., Waisner, B. Z., Robinson, J. P., Lamar, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+intestinal+submucosa%3A+A+tissue-derived+extracellular+matrix+that+promotes+tissue-specific+growth+and+differentiation+of+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Small intestinal submucosa: A tissue-derived extracellular matrix that promotes tissue-specific growth and differentiation of cells in vitro.</a> Tissue Eng. 4 (2), 157-174 (1998).</li>
<li>Bos, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+fibril+organisation+in+mammalian+vitreous+by+freeze+etch%2Frotary+shadowing+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">Collagen fibril organisation in mammalian vitreous by freeze etch/rotary shadowing electron microscopy.</a> Micron. 32 (3), 301-306 (2001).</li>
<li>Bembridge, B. A., Crawford, G. N. C., Pirie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase-contrast+microscopy+of+the+animal+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Phase-contrast microscopy of the animal vitreous body.</a> Br J Ophthalmol. 36 (3), 131-142 (1952).</li>
<li>Filas, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+imaging+of+enzymatic+vitreolysis-induced+fiber+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Quantitative imaging of enzymatic vitreolysis-induced fiber remodeling.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (12), 8626-8637 (2014).</li>
<li>Los, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rabbit+as+an+animal+model+for+post-natal+vitreous+matrix+differentiation+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">The rabbit as an animal model for post-natal vitreous matrix differentiation and degeneration.</a> Eye. 22 (10), 1223-1232 (2008).</li>
<li>Bredfeldt, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+segmentation+of+collagen+fibers+from+second-harmonic+generation+images+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Computational segmentation of collagen fibers from second-harmonic generation images of breast cancer.</a> J Biomed Opt. 19 (1), 016007(2014).</li>
<li>Liu, Y., Keikhosravi, A., Mehta, G. S., Drifka, C. R., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+quantifying+fibrillar+collagen+alignment%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods for quantifying fibrillar collagen alignment.</a> Methods Mol Biol. 1627, 429-451 (2017).</li>
<li>Wershof, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+FIJI+macro+for+quantifying+pattern+in+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">A FIJI macro for quantifying pattern in extracellular matrix.</a> Life Sci Alliance. 4 (3), e202000880(2021).</li>
<li>François, J., Victoria-Troncoso, V., Albarran, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histochemical+structure+of+the+vitreous+fibers+studied+by+phase-contrast+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The histochemical structure of the vitreous fibers studied by phase-contrast microscopy.</a> Am J Ophthalmol. 69 (5), 763-773 (1970).</li>
<li>Hwang, E. S., Morgan, D. J., Sun, J., Hartnett, M. E., Toussaint, K. C., Coats, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+reflectance+microscopy+for+mapping+collagen+fiber+organization+in+the+vitreous+gel+of+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Confocal reflectance microscopy for mapping collagen fiber organization in the vitreous gel of the eye.</a> Biomed Opt Express. 14 (2), 932(2023).</li>
<li>Harris, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+in+vitro+type+I+collagen+fibrillogenesis+by+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualizing in vitro type I collagen fibrillogenesis by transmission electron microscopy.</a> Methods Mol Biol. 1627, 367-383 (2017).</li>
<li>Arevalo, R. C., Urbach, J. S., Blair, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+rheology+of+type+I+collagen+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Size-dependent rheology of type I collagen networks.</a> Biophys J. 99 (8), L65-L67 (2010).</li>
<li>Raub, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+assessment+of+collagen+gel+microstructure+and+mechanics+using+multiphoton+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Noninvasive assessment of collagen gel microstructure and mechanics using multiphoton microscopy.</a> Biophys J. 92 (6), 2212-2222 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agarose I</td><td>VWR</td><td>0710-500G</td><td></td></tr><tr><td>Silicone multiuso 1 calafetagem, transparente</td><td>GE</td><td>2795576</td><td></td></tr><tr><td>Esponja de celulose (Weck-Cel Eye Spear)</td><td>Beaver - Visitec</td><td>000865</td><td></td></tr><tr><td>Pedestal personalizado de 3 pinos &nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador personalizado para montagem de vidro coberto grande</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Vidro grande de cobertura para lâmina, 1,42" x&nbsp; 2,36" Nº 1</td><td>Ted Pella</td><td>260460-100</td><td></td></tr><tr><td>Lego (base clássica, 1 x 8 peças, 1 x 8 tijolos, 1 x 6 placas)</td><td>Lego</td><td>11023, 3008, 3666, 4162</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas Microtome (perfil alto) & nbsp;</td><td>Lieca Biosystems</td><td>14035838926</td><td></td></tr><tr><td>Objetiva de silicone Olympus UPlanSApo 30x</td><td>Olimpo</td><td>UPLSAPO30XS</td><td></td></tr><tr><td>Bandeja grande de cubos de gelo de silicone (Samuelworld)</td><td>Amazona</td><td>713243280060</td><td></td></tr><tr><td>Lenços de tecido (Kimwipes) e nbsp;</td><td>Kimberly Clark</td><td>34120</td><td></td></tr></tbody></table>

preparação de olhos suínos para microscopia de refletância confocal para visualizar a rede de fibras de colágeno vítreo

Preparing Porcine Eyes for Confocal Reflectance Microscopy to Visualize the Vitreous Collagen Fiber Network

Um olho de cada um dos três porcos adultos jovens (uma fêmea de 4 meses, um macho de 5 meses e uma fêmea de 6 meses) foi fotografado após seccionar o olho em um plano axial através do limbo inferior. Seis locais de imagem foram adquiridos no plano de secção X-Y, espaçados de 4 mm. Em cada local de imagem, foi obtida uma grade contígua de 4 x 4 de imagens de 70 μm x 70 μm (Figura 8). Para cada porco, cada imagem foi analisada separadamente para vários parâmetros (Tabela 1).</...

Preparação de olhos suínos para microscopia de refletância confocal para visualizar a rede de fibras de colágeno vítreo

The vitreous is a clear gel that fills the space between the lens and retina. Its structure is supported by a network of collagen fibers, which likely ...

preparing-porcine-eyes-for-confocal-reflectance-microscopy-to

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Medicine

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Neste vídeo, demonstramos a dissecção do segmento anterior do olho suíno portador de córnea. O segmento isolado pode ser usado para cultura de órgãos para estudar a fisiopatologia dos distúrbios oculares.

Dissecção do Segmento Ocular Anterior: Um Método para Isolar o Segmento Anterior da Córnea do Olho Suíno

Este artigo apresenta um método para rotular fluorescência de colagénio que pode ser ainda utilizado para ambos e correcção de imagem ao vivo de culturas de células em 3D. Nós também fornecer um protocolo optimizado para visualizar as proteínas do citoesqueleto endógenos de células cultivadas em ambientes em 3D.

Revelando a Organização do citoesqueleto das células invasoras câncer em 3D

Este procedimento demonstra in vivo perto IR imagens de fluorescência de atividades de remodelação do colágeno em ratos, bem como ex vivo coloração de colágenos em cortes de tecido usando enjaulados peptídeos de colágeno miméticas que podem ser foto-acionado para cruzar com fios de colágeno desnaturado.

Imagiologia desnaturadas colágeno Vertentes<em&gt; In vivo</em&gt; E<em&gt; Ex vivo</em&gt; Via foto desencadeada Hibridização do Caged Colágeno mimético Peptídeos

O objetivo deste protocolo é mostrar uma técnica eficaz para isolar o núcleo vítreo e o córtex vítreos inteiros e intactos de olhos suínos enucleados post mortem.

Whole humor vítreo Dissecção de Análise Vitreodynamic

Vamos demonstrar três técnicas de preparação de tecidos diferentes para visualização de imuno-histoquímica de pericitos microvascular da retina do rato, ou seja, crio-seções, todo-montagens e hipotônica isolamento da rede vascular.

Cryo-seções da retina, todo-montagens e hipotônica vasculatura isolada preparações para visualização de imuno-histoquímica de pericitos Microvascular

O objetivo deste protocolo é caracterizar um novo modelo de neurodegeneração glaucomatosa baseado na cauterização térmica 360° do plexo vascular limbal, induzindo hipertensão ocular subaguda.

Cauterização em círculo completo do plexo vascular limbal no glaucoma induzido cirurgicamente em roedores

Aqui, um método fácil de seguir para a cultura de células epiteliais primárias do pigmento da retina suína in vitro é apresentado.

Cultura Primária de Células Epiteliais do Pigmento da Retina Suína

O presente protocolo descreve os passos para o alinhamento in vivo de imagens de fibrografia por tomografia de coerência óptica de luz visível (vis-OCTF) com imagens confocais ex vivo da mesma retina de camundongos com o objetivo de verificar a morfologia do feixe axonal de células ganglionares da retina observada nas imagens in vivo.

Alinhamento de Fibrogramas de Tomografia de Coerência Óptica com Luz Visível com Imagens Confocais da Mesma Retina de Camundongo

Este protocolo descreve um método confiável para obter criosseções de alta qualidade de olhos inteiros de coelho. Ele detalha os procedimentos de dissecção, fixação, incorporação e seccionamento do olho do coelho, que podem ser facilmente adaptados para uso em qualquer estudo que utilize imuno-histoquímica em olhos maiores.

Obtenção de criosecções de alta qualidade de olho de coelho inteiro 

Os pericitos na vasculatura retiniana foram examinados por coloração imunofluorescente com receptor de fator de crescimento derivado de plaquetas β após injeção retro-orbital de lectina fluorescente de tomate. A retina marcada foi posteriormente tratada com o método de limpeza de tecido e toda montada para visualizar as vistas tridimensionais dos pericitos ao redor da vasculatura retiniana sob um microscópio confocal.

Visualização 3D de pericitos vasculares da retina em camundongos por imunocoloração 

Aprenda a preparar olhos suínos para microscopia confocal de refletância, visualizando a rede de fibras de colágeno vítreo sem artefatos. Este método preserva a estrutura natural e auxilia no estudo do descolamento de retina.

Preparação de olhos suínos para microscopia de refletância confocal para visualizar a rede de fibras de colágeno vítreo

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