Name: Plataforma de imagem sem lentes implantável em campo para análise rápida e sem rótulos da ativação de células assassinas naturais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-08T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Aprenda a usar a plataforma LSIT para análise rápida e sem rótulos de células assassinas naturais. Este método computacional avalia a ativação celular em 30 segundos, eliminando a necessidade de coloração e citometria de fluxo.

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<table><tbody><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 1,7 mL</td><td>AXYGEN</td><td>MCT-175-C</td><td>Estéril, livre de DNase/RNase</td></tr><tr><td>Slide de ensaio</td><td>Metaimmunetech</td><td>AS050-G</td><td>Slide dedicado para sistema Cellytics 50 slides em uma caixa</td></tr><tr><td>Sistema Cellytics com software</td><td>Metaimmunetech</td><td>CS001</td><td>Plataforma de imagem de sombra sem lentes</td></tr><tr><td>Centrífuga (rotor de caçamba oscilante)</td><td>LABOGENE</td><td>1580R</td><td>300&ndash; 500 &vezes; Gama G</td></tr><tr><td>Sensor de imagem CMOS</td><td>Incluído com o dispositivo Cellytics</td><td>Integrado</td><td>Usado para imagens de difração</td></tr><tr><td>Centrífuga Cytospin</td><td>Nasco Coreia</td><td>Centrífuga TXT3 Cyto</td><td>Para coloração de citospin</td></tr><tr><td>Bloco de Aquecimento Digital (37 &deg; C)</td><td>Daihan Científico</td><td>DH. WHB00349</td><td>Para incubação celular</td></tr><tr><td>Kit ELISA (IFN-&gama;)</td><td>R& D</td><td>DIF50C</td><td>IFN-&gama humano; Kit ELISA</td></tr><tr><td>Citômetro de fluxo Goiaba easyCyte</td><td>Millipore</td><td>0500-5005</td><td>Para análise de expressão de CD107a</td></tr><tr><td>Pacote de 3 Estatísticas Hema</td><td>ThermoFisher</td><td>122-911</td><td>Para coloração de citospin</td></tr><tr><td>IL-12 (Humano Recombinante)</td><td>R& D</td><td></td><td>Componente do ASC</td></tr><tr><td>IL-2 (Humano Recombinante)</td><td>Peprotech</td><td>200-02</td><td>Componente do ASC</td></tr><tr><td>Rack de separação magnética</td><td>Metaimmunetech</td><td>M13R8</td><td>Para separação de esferas</td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio</td><td>Marienfeld</td><td>1000612</td><td>Para preparações de citospin</td></tr><tr><td>Kit de ativação NK</td><td>Metaimmunetech</td><td>MIT2301V, MIT2301A</td><td>Para ativação de células NK</td></tr><tr><td>Kit NK Set</td><td>Metaimmunetech</td><td>MIT2301-500</td><td>Para isolamento de células NK</td></tr><tr><td>Rato PE Anti-Humano CD107a, 100test</td><td>BD biociências</td><td>555801</td><td>Para análise de expressão de CD107a</td></tr><tr><td>Abertura do orifício</td><td>Incluído com o dispositivo Cellytics</td><td>Integrado</td><td>Usado no caminho de iluminação LSIT</td></tr><tr><td>Pipetas (2&ndash; 20 &micro; L, 20&ndash; 200 &micro; L)</td><td>AXYGEN</td><td>T-200-Y</td><td>Volume ajustável</td></tr><tr><td>Slide de calibração de sombra</td><td>Metaimmunetech</td><td>AS050-G</td><td>Para calibração do dispositivo. 1 Lâmina de calibração em 1 caixa de lâminas de ensaio</td></tr><tr><td>Misturador de vórtice</td><td>Merck&nbsp;</td><td>SI-0246A</td><td>Para ressuspensão</td></tr></tbody></table>

plataforma de imagem sem lentes implantável em campo para análise rápida e sem rótulos da ativação de células assassinas naturais

Field-Deployable Lens-Free Imaging Platform for Rapid Label-Free Analysis of Natural Killer Cell Activation

Seguindo este protocolo, a plataforma LSIT permite uma avaliação quantitativa e sem rótulos da ativação de células NK com base em alterações morfológicas nas células. A Figura 2A mostra preparações de citospin coradas com Hema-3 de células NK primárias de doadores saudáveis após incubação de 2 h com ou sem ASC. A ativação pelo ASC resulta em mudanças acentuadas, principalmente aumento celular e aumento da complexidade ou granularidade interna, em comparação com os controles do veículo (não e...

Plataforma de imagem sem lentes implantável em campo para análise rápida e sem rótulos da ativação de células assassinas naturais

Natural killer (NK) cells are important effectors of innate immunity that eliminate virus-infected and malignant cells. Monitoring NK cell activity is ...

field-deployable-lens-free-imaging-platform-for-rapid-label-free

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Lensfree imagens on-chip e caracterização de células é ilustrada. Esta abordagem on-chip imagens de células fornece uma ferramenta compacta e cost-effective para diagnósticos médicos e de alto rendimento aplicações de biologia celular, tornando-o especialmente adequado para locais de poucos recursos.

Imagem On-chip sem lente de Células fornece uma nova ferramenta de alta capacidade: Biologia Celular e Diagnóstico Médico

Aqui, descrevemos um método não invasivo de dois fótons abordagem microscopia (2P) para estudo de leucócitos homing na pata do rato. Discutimos os aspectos técnicos de nossa preparação tissular e andar o leitor através de um experimento típico de configuração inicial para coleta de execução e de dados.

Não-invasiva por imagem do Homing leucócitos e Migração In vivo</em

Neste vídeo, descrevemos a técnica de microscopia de folha de luz em rede para visualizar as interações entre células T vivas e células apresentadoras de antígenos. O método envolve focar uma folha de luz de treliça ultrafina em um par de células em interação para obter uma série de imagens bidimensionais, que são combinadas para obter imagens quadridimensionais de alta resolução que revelam a dinâmica espaço-temporal da interação célula-célula.

Microscopia de folha de luz treliçada para visualizar interações receptor-ligante em células vivas

Este vídeo demonstra uma técnica para visualizar a formação da sinapse imunológica em células natural killer (NK) em uma bicamada lipídica (SLB) suportada. O SLB é primeiro marcado com um ligante do receptor ativador de células NK marcado com fluoróforo, seguido de incubação com células NK. Posteriormente, as células são coradas para actina polimerizada e grânulos líticos positivos para perforina. Essa abordagem permite a visualização da formação de sinapses usando microscopia de depleção de...

Imagem de super-resolução da formação de sinapses imunológicas de células NK em uma bicamada lipídica suportada

Aqui, ilustramos o protocolo para a imagiologia por duas cores STED Nanoscopia citotóxica sinapse imune das células NK retomados em vidro. Usando este método, obtemos resolução nm sub-100 de proteínas de sinapses e do citoesqueleto.

Visualização do imunológica Synapse por Dual Color Time-fechado Emissão Estimulada Exaustão (STED) Nanoscopia

Descrevemos aqui uma combinação da técnica de bicamada lipídica suportada em vidro de formação de sinapses imunológicas com a técnica de imagem de super-resolução de microscopia de depleção por emissão estimulada (STED). O objetivo deste protocolo é fornecer aos usuários as instruções necessárias para realizar com sucesso essas duas técnicas.

Super-Resolution Imaging da Célula Natural Killer imunológica Synapse em um vidro com suporte Planar Lipid Bilayer

A comunicação inter-celular é crítico para controlar várias actividades fisiológicas dentro e fora da célula. Este documento descreve um protocolo para avaliar a natureza espaço-temporal de secreção das células individuais. Para conseguir isso, uma abordagem multidisciplinar é usado que integra livre-label nanoplasmonic sentindo com imagens de células vivas.

A técnica de livre-Label para a imagem espaço-temporal do Secreções única célula

Lente livre de microscopia nos permite monitorar culturas celulares diretamente dentro da incubadora. Aqui descrevemos o protocolo completo usado para adquirir e analisar uma aquisição de 2,7 dia longo de culturas de células de HeLa, levando a um conjunto de dados de 2,2 x 106 medições de morfologia de célula individual e 10584 ciclo celular rastreia.

Lente livre de microscopia para a dinâmica e a análise quantitativa de cultura de células aderentes

Descreveremos um protocolo para a identificação do rótulo-livre dos subtipos de linfócito usando a imagem latente da fase quantitativa e um algoritmo de aprendizado de máquina. Medições de índice de refração 3D tomograms de linfócitos apresentam 3D informações morfológicas e bioquímicas para células individuais, que é, então, analisadas com um algoritmo de aprendizado de máquina para identificação dos tipos de células.

Livre etiqueta de identificação dos subtipos de linfócito utilizando imagens tridimensionais fase quantitativa e aprendizagem de máquina

O objetivo deste protocolo é mostrar como usar microscopia de folha de luz de rede para visualizar quatro dimensões a dinâmica do receptor de superfície em células vivas. Aqui são mostrados receptores de células T em células CD4+ T primárias.

Visualizando dinâmica sadrindo de receptor estéta de células t usando microscopia de folha de luz de rede

Aprenda a usar a plataforma LSIT para análise rápida e sem rótulos de células assassinas naturais. Este método computacional avalia a ativação celular em 30 segundos, eliminando a necessidade de coloração e citometria de fluxo.

Plataforma de imagem sem lentes implantável em campo para análise rápida e sem rótulos da ativação de células assassinas naturais (Vídeo) | JoVE Journal

Plataforma de imagem sem lentes implantável em campo para análise rápida e sem rótulos da ativação de células assassinas naturais

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